浅谈PCR技术在医学检验中的应用

赵婧 程琦云 陈依铭

【摘要】在当下，PCR技术已成为一个最基本且应用十分广泛的技术，广泛应用于各大领域，如医学诊断、环境监测、食品行业、流行病学、基因工程等。PCR技术因其灵敏度高、特异性强、快速简便等优点而深受广大医学学者的喜爱。在医学检验工作中，PCR技术在保证了样品检验的准确性和可靠性的基础上还节省了大量的人力、物力和财力。PCR技术也因其较高的应用价值被应用于细菌检验、寄生虫检验、病毒检验等方面，在临床检验诊断中作出了极大的贡献。本文将简单介绍一下PCR技术在医学检验中的应用。

【关键词】PCR技术;医学检验;应用

1.PCR与医学检验

PCR技术是一种选择性体外扩增DNA或RNA片段的方法，两个人工合成的引物序列决定了其特异性。一次变性、退火、延伸的过程为一个PCR的循环，经过25-30个循环之后，可使模板DNA片段的数量呈几何级数倍增。PCR技术特异性强、敏感性高、快速、简便、对起始材料质量要求低，但也存在一些问题，例如：可能会出现少许非扩增性异物和引物聚体，常规的PCR技术还可能有浪费成本、费时费力的现象、待检样品还易被污染，导致检验结果出现偏差。经众多专家学者不断探索与改进，如今已探究出多种先进的PCR技术检验模式，如实时定量PCR技术（RT-PCR）、PCR-酶联免疫吸附试验、巢式PCR 等。PCR技术作为一项临床医学实验诊断方法，为临床疾病的诊断从基因方面提供了更加准确的诊断依据，便于检验的进行。

2.PCR技术在细菌检验中的应用

人体很多疾病都与肠道菌群失调有关，一些与肠道感染性疾病有关的重要细菌，如志贺氏菌和沙门氏菌等，它们的发病率高、传播速度快、耐药发生率高;细菌传统检测方法是将其培养并用生化和血清学对其鉴定，此法检测效率不高，因此，检验人员在改进过去传统检测方法的同时结合时代技术的发展，引进了更加先进、灵敏度更高的检测方法，如PCR技术。即我们可以把肠道细菌特异性靶基因作为研究对象，设计并合成PCR引物，以临床微生物样本的基因组DNA为模板，用PCR技术对肠道细菌特异性靶基因快速检测。传统PCR有着可能出现假阳性、假阴性，只可以进行定性检测的不足。如今更加完善的PCR技术已应用于细菌检测当中，如实时荧光定量PCR，可进行实时检测，用于绝对或相对定量分析，还解决了PCR的污染问题，常用于志贺菌、沙门菌、大肠埃希菌的检测。

3.PCR技术在寄生虫检验中的应用

疟疾是由疟原虫引起的虫媒传染病，是世界上最常见和危害最重的热带病之一，其在红细胞内进行增值，存在着输血感染的危险。虽然我国即将消除本土感染的疟疾，但输入性病例逐年增多。因此，我们需要继续重视对疟原虫的检测。显微镜镜检是诊断疟疾的金标准，但结果会受许多因素的影响，如血片质量、染色质量、镜检人员的检验习惯和能力。当疟原虫数量少、形态学不典型时，就易发生漏检，因此，效率更高、精密度更好的PCR技术被运用于疟原虫的检测。据文献报道， 巢式PCR的阳性检出率与镜检相同，荧光定量PCR法比巢式PCR灵敏性和特异性较高，利于输入性患者的检测以及对疑似疟疾患者的快速疟疾分型鉴定。因此，在疟疾的复核诊断中，检验人员要结合患者病情及实验室的具体情况选择更为合适的检测方法，在实验室条件允许的情况下，可用荧光定量PCR代替巢氏PCR以提高疟原虫的阳性检出率。由此可见，PCR技术在寄生虫检验中有着重要作用。

4.PCR技术在病毒检验中的应用

乙型肝炎是一种严重危害人体健康的世界性传染病，慢性乙肝是一种乙型肝炎病毒持续感染6个月以上，肝脏出现不同程度纤维化或炎症坏死的慢性疾病，该病的病程较长、临床症状反复发作，患者会出现食欲不振等症状，严重影响了患者生活质量，还增大了患抑郁的风险。ELISA方法测定乙肝五项是辅助诊断乙肝的常规方法，利于发现急性乙肝，但此法对于检测慢性乙肝的灵敏度逐渐下降，乙肝病毒变异之后，此法更加不灵敏，需检测HBV-DNA才可以确诊，可用具极高特异性和敏感性的荧光定量PCR检验。但当标本出现溶血、脂血和标本处理不当的情况时，会使检测结果不准确。而且它只能检测血中游离的HBV-DNA，当病毒与肝细胞染色体整合在一起或者当患者的HBV-DNA突变的情况下，FQ-PCR不能检出病毒，但ELISA可以，因此，在检验乙肝病毒感染的时候，我们要灵活选用适当的方法，提高检出率。

小结

PCR技术是一种放大扩增特定的DNA片段的分子生物技术，其可将极微量的生物标本中的靶核酸在短时间内大量复制扩增至可检测范围，因此其具有高度灵敏性和特异性。当然，在面对原始PCR费时、成本高、无法定量等缺点时，广大专家学者对传统PCR技术进行改进升级，将实时荧光PCR等技术运用于检验之中，这些技术将更加高效、准确。随着技术的不断改进与快速发展，它在医学检验中发挥着重要作用，我们需结合实际情况，选择合适的方法，提高检验效率，相信未来PCR技术会在医学检验方面发挥更大的作用。

参考文献

[1]龚弘局，金家贵，程曦.聚合酶链反应在医学检验中的应用和进展[J].检验医学与临床，2010，（11）：1131-1133.

[2]李芸.聚合酶链反应在医学检验中的应用和进展[J].中国城乡企业卫生，2017，32（08）：18-20.

[3]陈莹，胡蕊，刘颖勋，等.基于聚合酶链式反应的肠道病原菌检测技术[J].中国感染控制杂志，2018，（12）：1122-1128.

[4]陈庆恺，何子毅.输血传播疟疾与血液安全[J].临床输血与检验，2021，（01）：122-126.

[5]李素华，李静，高丽君，等.荧光定量PCR在疟疾实验室诊断中的应用[J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志，2019，（02）：232-234.

[6]崔凤芹.乙肝患者发生抑郁的危险因素及干预对策[J].山东医学高等专科学校学报，2021，43（02）：123-125.

[7]杨巍巍.PCR技术在医学检验乙肝中的应用[J.齐齐哈尔医学院学报，2014，35（17）：2576-2577.

华北理工大學  河北唐山 063000