2020年贵州省兽医系统实验室检测能力比对结果分析

李照伟， 李 涛， 刘 霞， 毛以智， 王 慧， 张 霞， 倪兴维

(贵州省动物疫病预防控制中心，贵州 贵阳 550008)

按照农业农村部畜牧兽医局和贵州省农业农村厅开展兽医系统实验室检测能力比对工作的要求，贵州省动物疫病预防控制中心于2020年9月组织实施了全省市、县级兽医实验室检测能力比对工作[1～3]。此次比对工作充分评估了各级兽医实验室的检测技术水平，也真实客观地反映出一些存在的问题，达到了预期的比对效果和目的，为加强贵州省兽医系统实验室检测能力建设，提升各级兽医实验室动物疫情预警监测能力和动物疫病检测诊断水平提供了一定的参考依据。

1 材料与方法

1.1 待测盲样口蹄疫病毒O/A亚型鉴别检测、禽流感病毒H5/H7/H9亚型鉴别检测设置待检盲样各54份，非洲猪瘟病毒核酸检测设置待检盲样210份，禽流感病毒H7亚型抗体检测、口蹄疫病毒O型抗体检测、小反刍兽疫抗体检测设置待检盲样各222份，均由贵州省动物疫病预防控制中心准备。

1.2 主要试剂口蹄疫病毒O/A亚型鉴别检测试剂盒、口蹄疫病毒O型抗体检测试剂盒、小反刍兽疫抗体检测试剂盒，购自武汉科前生物股份有限公司；禽流感病毒H5/H7/H9亚型鉴别检测试剂盒、禽流感病毒H7亚型抗体检测试剂盒，购自哈尔滨国生生物科技股份有限公司；非洲猪瘟病毒核酸检测试剂盒，购自青岛立见诊断技术发展中心。

1.3 比对项目设计市(州)级兽医实验室共设置3个检测比对项目，分别为口蹄疫病毒O/A亚型鉴别检测、禽流感病毒H5/H7/H9亚型鉴别检测、非洲猪瘟病毒核酸检测。县(市、区)级兽医实验室共设置4个检测比对项目，分别为禽流感病毒H7亚型抗体检测、口蹄疫病毒O型抗体检测、小反刍兽疫抗体检测、非洲猪瘟病毒核酸检测。所有比对项目均采用相应的国家现行标准、农业农村部公布或推荐的检测方法进行比对，包括荧光RT-PCR、荧光PCR、HI、ELISA，具体方法见表1。各比对项目针对每个比对单位，分别设置检测盲样 6份并随机分发，所有盲样及检测试剂均经过统一制备、分装、编号、测试及留存，统一发放并保证运输条件和时间。

表1 2020年贵州省兽医系统实验室检测能力比对项目

1.4 比对结果判定标准与分析口蹄疫病毒O/A亚型鉴别检测、禽流感病毒H5/H7/H9亚型鉴别检测、非洲猪瘟病毒核酸检测、口蹄疫病毒O型抗体检测、小反刍兽疫抗体检测项目判定标准为：盲样检测值与参考值完全一致判为正确，否则判为错误，各参考值样品数目不确定；在判定“阳性”及“阴性”的同时，填写样品对应的“CT”值或“OD”值。禽流感病毒H7亚型抗体检测项目判定标准为：检测值与参考值的偏差不超过1个滴度，判为正确，否则判为错误。对各实验室检测结果正确率进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 全省兽医实验室检测能力整体情况分析全省共计9个市(州)、37个县(市、区)兽医实验室参加此次检测能力比对，其中8个市(州)级、26个县(市、区)级兽医实验室所有比对项目的检测结果完全正确，市、县级实验室正确率分别为88.89%、70.27%。比对共计完成盲样检测984份，市(州)级、县(市、区)级样品正确率分别为98.77%、96.59%，见表2。

表2 2020年贵州省兽医系统实验室比对整体情况统计

2.2 市级兽医实验室比对情况在参与检测能力比对的9个市(州)级兽医实验室中，口蹄疫病毒O/A亚型鉴别检测项目、禽流感病毒H5/H7/H9亚型鉴别检测项目、非洲猪瘟病毒核酸检测项目发放盲样各54份，结果正确率分别为96.30%、100%、100%。其中1个实验室在口蹄疫病毒O/A亚型鉴别检测项目中有2份比对盲样检测值与参考值存在偏差(见表3)，分析原因可能为涉及检测的关键仪器设备未及时进行周期性的检定校准和维护保养，影响仪器设备运行的稳定性和检测结果的判定。

2.3 县级兽医实验室比对情况(1)在参与检测能力比对的37个县(市、区)级兽医实验室中，禽流感病毒H7亚型抗体检测项目、口蹄疫病毒O型抗体检测项目、小反刍兽疫抗体检测项目发放盲样各222份，非洲猪瘟病毒核酸检测项目发放盲样156份，结果正确率分别为89.64%、100%、100%、96.79%，能力比对兽医实验室正确率均大于85%(见表3)。(2)在禽流感病毒H7亚型抗体检测项目中，4个实验室有3份比对盲样检测值与参考值存在偏差，5个实验室有2份比对盲样检测值与参考值存在偏差，1个实验室有1份比对盲样检测值与参考值存在偏差。分析结果偏差的可能原因：一是1%红细胞悬液配置不准确，洗涤红细胞及移取过程中未轻吸轻放，导致红细胞破裂造成红细胞悬液浓度偏低；二是产生红细胞“挂滴”现象，在滴加1%红细胞悬液时有部分红细胞挂在滴头上未全部加入血凝孔中；三是禽流感病毒H7亚型抗体4单位抗原配置后未进行抗原回溯，无法通过抗原回溯显示抗原浓度过高或者过低，对实验结果判定准确性造成影响；四是未严格按照禽流感HA/HI现行检测标准开展检测，使用生理盐水替代PBS缓冲液进行倍比稀释。(3)在非洲猪瘟病毒核酸检测项目中，1个实验室有4份比对盲样检测值与参考值存在偏差，1个实验室有1份比对盲样检测值与参考值存在偏差。导致偏差的原因可能与实验室生物安全柜台面擦拭消毒不彻底，部分使用耗材未进行高压灭菌干燥，部分检测人员操作不够严谨熟练，检测程序设置漏项、错项等有关，造成检测过程中出现交叉污染、结果判定差异性大等情况。

表3 2020年贵州省兽医系统实验室比对结果

3 讨论

3.1兽医实验室作为动物疫病防控体系中的重要组成部分，对动物疫病的检测诊断具有重要的支撑作用[4]。切实强化兽医实验室管理，不断完善实验室质量管理体系和检测能力建设，有助于提高兽医实验室的服务能力和技术水平。实验室能力验证是为确保实验室维持较高的检测水平而对其能力进行考核、监督和确认的一种活动[5]。在兽医实验室能力验证中，实验室检测能力比对作为当前常用的验证方法和体现实验室综合能力的重要技术手段，直观地反映了兽医实验室的质量管理和生物安全水平。定期开展兽医实验室检测能力比对，评估各级兽医实验室检测能力，对兽医实验室的建设、运行及管理可起到促进和警示作用[6～8]。

3.2通过比对情况梳理，在全省参加的9个市(州)级兽医实验室中，有8个实验室比对结果全部符合参考值，1个实验室有1个比对项目存在偏差，实验室正确率为88.89%；参加的37个县(市、区)级兽医实验室中，有26个实验室比对结果全部符合参考值，1个实验室有2个比对项目存在偏差，10个实验室有1个比对项目存在偏差，实验室正确率为70.27%。相关研究表明，实验室检测能力主要受人员、仪器设备工作状态、环境条件等多方面因素影响[9，10]。结合此次检测能力比对，分析各级兽医实验室检测比对结果的符合情况及偏差情况，进一步证实了上述观点。首先是人员方面：检测人员的专业技术水平和专业素质对于检测结果有重要影响。专业技术水平不足可能造成检测操作不熟练，对现行的检测标准及方法掌握不到位，增加检测失误概率。由于缺乏检测经验，在预判检测过程中可能突发的问题时也会处理、解决得不到位。其次是仪器设备工作状态：正常工作状态下运转的仪器设备可保证检测结果的科学性和准确性，因此对实验室的关键及常用仪器设备进行周期性的检定、校准、期间核查及维护保养至关重要。如果未能认真做好仪器设备的日常管理和工作记录，及时追踪仪器设备运行使用状态，就可能会降低仪器设备的稳定性，增加使用误差，严重者甚至会导致功能障碍无法开展检测。最后是环境条件：实验室检测对于实验室的功能布局、环境温湿度、压力、通风系统、照明等有严格要求，如果不能将这些关键因素控制在有效限定范围内，就会出现检测失败、检测结果偏差较大、交叉污染等情况。

3.3根据梳理比对情况及分析偏差原因，各级兽医实验室应将此次检测能力比对工作作为抓手，强化监管实验室检测工作流程，严格控制检测质量，确保检测结果准确可靠。结合日常工作有针对性地开展技术培训，强化实验室人员的业务理论水平和专业操作技能，使各级兽医实验室作为我省动物疫病防控的有力支撑平台。