安神补脑胶囊中制何首乌和淫羊藿的薄层色谱鉴别*

周 峰，江 勋，彭婷婷

（湖南省衡阳市市场监督检验检测中心，湖南 衡阳 421001）

安神补脑胶囊由安神补脑片剂型改良而来，由鹿茸、制何首乌、淫羊藿、干姜、甘草、大枣经提取后加入维生素B1精制而成，临床用于治疗神经衰弱、失眠、健忘、头晕等症［1－2］。安神补脑片执行标准为《国家药品监督管理局标准（试行）》WS－11154（ZD －1154）－2002。安神补脑胶囊可促进大鼠脑组织核酸合成［3］，对樟柳碱模型小鼠的学习记忆障碍也有明显改善作用［4］。目前，全国共有4 家药品生产企业拥有安神补脑胶囊的批准文号，其质量标准均为企业参照国家食品药品监督管理局标准（YBZ15322009，YBZ02542009，YBZ06762009，YBZ08452009）制订。但上述标准中的薄层色谱鉴别均缺乏对处方中主药制何首乌及淫羊藿的有效控制，不能全面体现安神补脑胶囊中复杂成分的可控性。为此，本研究中建立了以何首乌、淫羊藿为对照药材，以及二者中特征性成分 2，3，5，4′－四羟基二苯乙烯 －2－ O－β－ D 葡萄糖苷、淫羊藿苷为对照品的薄层色谱法，旨在完善安神补脑胶囊的质量标准。现报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器

AE240S 型电子分析天平（瑞士梅特勒－托利多有限公司，精度为 0.1 mg）；DK － 615HT 型超声清洗仪（深圳市得康洗净电器有限公司，功率为360 W，频率为40 kHz）；XMTD－4000 型八孔电热恒温水浴锅（北京永光明医疗器械厂）；ZF－20C 型暗箱式自动紫外分析仪（上海顾村电光仪器厂）。

1.2 试药

何首乌对照药材（批号为120934－201410），淫羊藿对照药材（批号为 121632 －201502），2，3，5，4′－四羟基二苯乙烯－2－ O－ β－ D 葡萄糖苷对照品（批号为110844 －201814，纯度为 91.0%），淫羊藿苷对照品（批号为 110737－201516，纯度 94.2%），均购自中国食品药品检定研究院；薄层色谱预制硅胶G 板（德国Merck公司，批号为HX69481826）；实验用水为屈臣氏蒸馏水（批号为20190910C），其余试剂均为分析纯。安神补脑胶囊样品来源见表1。

表1 安神补脑胶囊样品信息Tab.1 Information of Anshen Bunao Capsules

2 方法与结果

2.1 制何首乌

取样品内容物10 粒，研细，取1 g，精密称定，加70%甲醇30 mL，超声处理15 min，滤过，滤液回收溶剂至干；残渣加水20 mL 使溶解，用乙醚振摇提取2 次，每次25 mL，合并乙醚提取液，回收溶剂至干；残渣加甲醇1 mL 使溶解，作为供试品溶液。另取何首乌对照药材1 g，精密称定，加甲醇10 mL，超声处理15 min，静置，取上清液作为对照药材溶液。取 2，3，5，4′－四羟基二苯乙烯－2－ O－ β－ D 葡萄糖苷对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg 的溶液，作为对照品溶液。另取不含制何首乌的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。照2015 年版《中国药典（四部）》通则0502 项下薄层色谱法试验，吸取上述溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯 － 甲醇 － 甲酸（25 ∶1 ∶1，V ／ V ／ V）为展开剂，展开，取出，晾干，于紫外光灯（365 nm）下检视。结果供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液和对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性对照无干扰。详见图1 A。

2.2 淫羊藿

取样品内容物10 粒，研细，取1 g，精密称定，加热水20 mL，超声处理20 min，放冷，离心，取上清液，加乙酸乙酯提取 2 次，每次 20 mL，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇1 mL 使溶解，作为供试品溶液。另取淫羊藿对照药材0.5 g，精密称定，温浸30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇使溶解，作为对照药材溶液。取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1 mL 含1 mg 的溶液，作为对照品溶液。另取不含淫羊藿的阴性样品，按供试品溶液制备方法配制阴性对照品溶液。照2015 年版《中国药典（四部）》通则0502 项下薄层色谱法试验，吸取上述溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以乙酸乙酯－丁酮 － 甲酸 － 水（10 ∶1 ∶1 ∶1，V ／ V ／ V ／ V）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，在105 ℃加热至斑点显色清晰。结果供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液和对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。详见图1 B。

图1 薄层色谱图S.Reference solution S1. Reference material solution S2.Negative reference solution 1 － 11. Test solutionA. Polygoni Multiflori Radix Praeparata（UV lamps，365 nm） B. Epimedium brevicornuFig.1 TLC chromatograms

3 讨论

参考《中国药典（一部）》安神补脑液及文献［5－10］，确定 2，3，5，4′－四羟基二苯乙烯 －2 － O － β－ D 葡萄糖苷和淫羊藿苷分别为制剂中制何首乌和淫羊藿2 味主药的指标性功效成分。选择何首乌及 2，3，5，4′－四羟基二苯乙烯－2－ O－ β－ D 葡萄糖苷、淫羊藿及淫羊藿苷作为薄层色谱鉴别的指标性成分，特征性强，有利于制剂的质量控制。

制何首乌薄层色谱鉴别中，曾参考2015 年版《中国药典（一部）》制何首乌药材［11］176鉴别项下的方法，于紫外光灯（365 nm）下检视，供试品溶液与对照药材溶液均显淡黄色荧光斑点，但 2，3，5，4′－四羟基二苯乙烯 －2－ O－ β－ D 葡萄糖苷对照品溶液无斑点出现；参考成方制剂安神补脑液项下［11］884制何首乌的薄层色谱鉴别及文献［12］，调整提取方法与展开剂，经优化，制订了制何首乌的定性鉴别方法。该方法操作简单，且可同时监测制何首乌药材中多种标志性成分，专属性强，斑点清晰，分离效果好，紫外光灯（365 nm）下检视操作简单，稳定性及重复性均好，阴性对照无干扰，可用于安神补脑胶囊中制何首乌的定性鉴别。

现行4 个企业标准中淫羊藿的薄层色谱鉴别方法差异大，且部分标准缺乏淫羊藿对照药材的参考。本研究结果表明，各厂家的供试品色谱图中淫羊藿苷斑点清晰度差距明显，可反映不同企业样品中淫羊藿苷的含量差异［13］，利于对不同厂家的产品进行质量控制与横向对比。本研究中最终确定的方法能同时检测不同厂家生产的安神补脑胶囊，且斑点清晰，分离效果好，阴性对照无干扰，适用于不同厂家生产的安神补脑胶囊的质量控制。