不同种源八月瓜种子发芽率及总黄酮含量测定研究

李晓斌，陆文，林旭俊，李善志，陈旭，郭霞

海南省林业科学研究院（海南省红树林研究院），海南海口 571100

八月瓜（Holboellialatifolia Wall）是木通科木通属的多年生藤本植物[1，2]，具有较高的药用和食用价值，果实口感香甜，且含有丰富的维生素C、蛋白质氨基酸、可溶性糖等营养成分和人体必需的微量元素，同时在改善人体消化系统、血液循环系统、免疫系统等方面具有较高价值[1，3]。近期八月瓜被作为扶贫产业在四川、湖南、贵州等地进行推广种植，并取得了较好的经济效益[3-4]。

八月瓜中存在着丰富的黄酮成分，具有较高的生理学保健功能[5-6]。黄酮是一种很强的抗氧剂，可有效清除体内的氧自由基，这种阻止氧化的能力是维生素E 的10 倍以上，抗氧化作用可以阻止细胞的退化、衰老，也可阻止癌症的发生[7-8]；黄酮还可以改善血液循环，降低胆固醇，这些作用大大降低了心脑血管疾病的发病率或改善心脑血管疾病的症状，具有广阔的市场前景[9]。基于八月瓜良好的营养成分，通过收集不同种源的八月瓜，对其进行种子繁育及果皮、果肉中总黄酮含量的测定，为八月瓜产品的开展提供依据。

1 研究区概况

海南省林业科学研究院（海南省红树林研究院）定安龙州基地（19°31′N～19°44′N，110°7′E～110°31′E），位于海南省定安县龙州乡，南渡江中下游南畔。土壤类型为沙质壤土和棕色粘土，土壤透水性较好，但肥力欠佳。属热带海洋性季风气候，阳光充足，雨量充沛，2018 全年无霜期，1 月份均温21℃，极高温27℃，极低温10℃；7 月份均温31℃，极高温37℃，极低温24℃；12 月平均温度24℃，极高温30℃，极低温10℃；年均气温、日照和降水量分别为24℃、1880h、1953mm。冬春季干旱，夏秋季节多台风暴雨。

2 材料与方法

2.1 试验材料

八月瓜种子来源于云南、贵州、广东、湖南、江西5 个地区，人工繁育；总黄酮测定的八月瓜果实为海南省林业院自主培育不同种源苗木所结果实；芦丁对照品（含量≥98%）。

2.2 试验方法

2.2.1 种子不同处理方法

选用籽粒饱满、没有残缺或畸形、无病虫害的种子，用1%高锰酸钾溶液消毒10min，清水冲洗后，分别用冷水、温水、10%赤霉素浸泡。浸泡时间均为2h，直接播种作为空白对照。每处理使用种子30 粒，重复3 次。

播种基质为河沙，基质使用前喷洒土壤消毒剂，并覆盖上塑料薄膜，进行基质消毒。7d 后将处理好的基质混合均匀，用于发芽试验及苗床育苗。

温度在22℃～27℃，光照条件为自然光。

播种后，当胚芽出土时，观测记录每个处理的发芽率，对各处理的发芽率进行统计：

发芽率=发芽数/播种数×100%。

2.2.2 不同播种基质选择

试验为单因子试验，采用全河沙、全黄土、黄土：河沙：椰糠=3：1：2 作为育苗基质，基质使用前喷洒土壤消毒剂，并覆盖上塑料薄膜，进行消毒。

播种前将种子用1%高锰酸钾溶液消毒10min，清水冲洗后，用10%赤霉素浸泡2h 后播种于不同基质。每个处理30 粒种子，重复3 次。

播种后，当胚芽出土时，观测记录每个处理的发芽率，对各处理的发芽率进行统计：

发芽率=发芽数/播种数×100%。

2.2.3 总黄酮测定方法

八月瓜总黄酮测定采用紫外-可见光光度法测定，根据物质分子对波长为200nm～760nm 这一范围的电磁波的吸收特性所建立起来的一种定性、定量和结构分析方法。

（1）样品制备。称取不同种源八月瓜样品0.3g，每个种源重复3 次，加入70%乙醇30mL，密塞，称定重量，静置3h，超声提取30min，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，过滤。取滤液1mL，加去离子水6mL，加1mL5%NaNO2，摇匀静置6min，然后加入1mL10%Al （NO3）3，摇匀静置6min，再准确加入10mL4%NaOH，最后加去离子水定容到25mL，摇匀，静置15min。于510nm 处进行比色，读取吸光度。

（2）标准曲线绘制。取6 支试管，取芦丁对照品溶液0mL、0.5mL、1mL、1.5mL、2mL、2.5mL，分别置于25mL 的容量瓶中，分别加去离子水6mL、5.5mL、5mL、4.5mL、4mL、3.5mL，依次各加入1mL5%NaNO2，摇匀静置6min，然后再依次各加入1mL10%Al（NO3）3，摇匀静置6min，再准确依次各加入10mL4%NaOH，最后加去离子水定容到25mL，摇匀，放置15min 后待测。于510nm 处比色，测定吸光度。

3 结果与分析

3.1 不同处理方法对八月瓜种子发芽率的影响

种子千粒重直接反应了种子的大小和饱满程度，种子育苗前首先对种子进行千粒重测定评判其质量好坏。研究收集云南、贵州、广东、湖南、江西5个地方的种子进行测定，为种子育苗奠定基础，具体数据如下表1：

表1 八月瓜种子测试结果Tab.1 Test results of Holboellialatifolia Wall seeds

根据表1 可以看出不同种源间的种子千粒重均存在差异性。种子千粒重表现最好的是贵州种源（189.13±5.22），其次为云南种源、湖南种源、江西种源、广东种源。根据试验结果，种子育苗选用贵州种源的种子。根据种子不同处理方式，对比发芽率，选取最合适的种子处理方式，如表2：

表2 不同处理的八月瓜种子发芽率统计Tab.2 Germination statistics of Holboellialatifolia Wall seeds under different treatments

种子发芽率直接反应了种子品质的好坏。试验结果表明，不同浸泡处理的种子发芽率表现出明显差异，种子发芽最早的是10%赤霉素浸泡（28d），其次为温水浸泡（37d）、冷水浸泡（48d）；对比整个发芽过程，发现10%赤霉素浸泡的种子发芽率最高（92.6%），最低的直播种子发芽率为50.1%。

3.2 不同播种基质对八月瓜种子发芽率的影响

表3 不同播种基质的八月瓜种子发芽率统计Tab.3 Germination statistics of Holboellialatifolia Wall seeds with different sowing substrates

试验结果表明，不同播种基质处理的种子发芽率表现出明显差异，种子发芽最早的是河沙，且发芽率最高也是河沙（92.6%）。

3.3 不同种源八月瓜总黄酮含量测定

不同种源八月瓜总黄酮含量测定基于统一标准曲线下进行测定。不同种源八月瓜总黄酮含量测定结果见表4：

表4 八月瓜果肉和果皮中总黄酮含量Tab.4 Contents of Ttotal Flavonoids in flesh and peel of Holboellialatifolia Wall

研究表明，野生八月瓜果肉占比在10%～20%之间，在海南通过人工干预，果肉占比可以达到40%以上；果肉中总黄酮含量最高的是云南种源（1.173%），其次为广东种源（0.789%）和贵州种源（0.738%）；果皮中总黄酮含量最高的是湖南种源（1.412%），其次为贵州种源（0.818%）和广东、江西种源（均为0.782%）；总含量的排序为：湖南种源＞云南种源＞广东种源＞贵州种源＞江西种源。

对不同种源八月瓜果实总黄酮含量的影响进行方差分析（p＜0.05），如表5，根据结果可以看出，江西种源与云南种源差异不显著，其他4 个种源间差异均显著。

4 结论与讨论

随着生活水平的日益提高，人们对纯天然绿色食品的需求越来越大，加上野生果树具有很大的蕴藏量，食果的加工、深加工及综合开发利用将有广阔的市场前景。八月瓜的营养丰富，果实乳白，清甜多汁，口感远胜蜂蜜，其果实含有多种可溶性果糖、淀粉、碳水化合物以及人体所需的微量元素和多种维生素，是一种富含营养的上品野生瓜果。

八月瓜一般9 月～10 月成熟，将种子及时秋播或用湿沙混合贮藏，到翌年3 月～4 月播种。该研究通过开展种子发芽率试验，发现种子播种前采用10%赤霉素浸泡种子2h，随后采用撒播的方式进行播种，育苗基质采用全河沙基质，发芽率可以达到90%以上，这为八月瓜种子育苗的后续研究及推广提供了技术支持。

八月瓜含有丰富的黄酮成分，具有养颜美容、强身健体的保健效果。该试验通过对不同种源的八月瓜果实的总黄酮含量进行测定，发现果肉中总黄酮含量最高的是云南种源（1.173%），其次为广东种源（0.789%）和贵州种源（0.738%）；果皮中总黄酮含量最高的是湖南种源（1.412%），其次为贵州种源（0.818%）和广东、江西种源（均为0.782%）；总含量的排序为：湖南种源＞云南种源＞广东种源＞贵州种源＞江西种源。这些数据为八月瓜鲜果、果茶等产品开发销售提供了依据。