慢性丙型肝炎患者肝纤维化程度与TLR2、TLR4 mRNA的关系

贾国昌 刘春江 刘东坡 柯近 郭敬超

肝纤维化是慢性肝病向肝硬化发展的关键阶段，因而对反映慢性丙型肝炎(CHC)患者肝纤维程度相关指标的研究成为临床热点话题[1-2]。Toll样受体(TLR)是固有免疫模式识别受体的重要组成部分，目前被认为参与人体组织纤维病变的过程[3-4]。本研究通过对Toll样受体2(TLR2)、Toll样受体4(TLR4)进行观察，探讨其与CHC患者肝纤维化程度的关系，现作以下表述。

资料与方法

一、基础资料

对2019年1月到2019年12月因慢性HCV感染来舞钢市人民医院接受治疗的185例患者进行选择纳入试验，收录进CHC组，再收集相同时期来医院进行体格检查的185名健康志愿者来做对照试验，收录进对照组。两组中的CHC组存在男性患者104例，女性患者81例；年龄位于41～76岁，平均年龄(52.15±4.67)岁；体质量指数(BMI)19～26 kg/m2，平均值为(22.47±2.05)kg/m2；患病年数1～7年，平均年数(3.86±0.74)年。两组中的对照组包括男性96名，女性89名；年龄位于42～75岁，平均年龄(51.89±4.74)岁；BMI 18～26 kg/m2，平均值为(22.39±1.96)kg/m2。对照不同组别病例的人口特征及入院相关信息，无明显差异(P>0.05)，可比度良好，本研究在伦理审核后方通知患者和志愿者进行相关操作。

二、纳入与排除标准

纳入标准：①根据《丙型肝炎防治指南(2015更新版)》[5]有关标准，CHC患者经相关检查被确诊，且均合并不同程度肝纤维化；②41～76岁；③患者和家属知晓研究目的、方法并签字同意。

排除标准：①由于甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、人类免疫缺陷病毒等非HCV的其他慢性肝炎病毒而引起的肝纤维化；②曾经有肝移植史或肝脏相关手术史；③已患有恶性肿瘤，且预计死亡时间在1年内；④心脏、脑血管、肾脏等重要脏器组织发生异常或曾经因为血液系统疾病入院。

三、研究方法

(一)血液采集 在所有患者(或志愿者)入院时即对其空腹静脉血进行采集，收集5 mL血液后以2 000 r/min速度离心后进行细胞培养，采取实时荧光定量法(PCR)测量TLR2转录物(mRNA)、TLR4 mRNA表达，TLR2、TLR4的基因mRNA相对含量以目的基因TLR2、TLR4产物与内参基因β-action产物的条带灰度值之比表示。

(二)肝纤维化程度分级 所有CHC患者均在MRI扫描后通过穿刺进行检查，找出患者右边一侧的腋前到锁骨中线之间肝脏切面较大的位置来刺入并抽取样本，把抽取得到的样本通过甲醛进行固定，采用石蜡将其进行包埋处理。按照Scheuer法[6]将肝纤维化分成F1(汇管区纤维化扩增，但只局限于窦周及小叶内)、F2(汇管区周围纤维化，有间隔形成，但小叶结构仍然完整)、F3(肝小叶结构被破坏，大量纤维间隔形成，但无肝硬化)、F4四期(早期肝硬化)；按照CHC患者肝纤维化不同分期将其分别纳入F1组、F2组、F3组、F4组。

(三)观察指标：①对两组TLR2 mRNA、TLR4 mRNA检测结果进行比较；②对不同肝纤维化程度CHC患者TLR2 mRNA、TLR4 mRNA检测结果进行比较；③通过Spearman系数分析肝纤维化程度分级F1、F2、F3、F4与TLR2 mRNA、TLR4 mRNA水平的相关性。

四、统计学分析

结 果

一、两组TLR2 mRNA、TLR4 mRNA检测结果对照

CHC组TLR2mRNA、TLR4mRNA水平显著高于对照组，有显著差异(P<0.05)。见表1。

表1 两组TLR2 mRNA、TLR4 mRNA检测结果对照(±s)

二、不同肝纤维化程度CHC患者TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表达情况比较

经肝纤维化分级发现185例患者中有35例为F1，63例为F2，58例为F3，29例为F4，分别将其纳入纳入F1组、F2组、F3组、F4组；比较CHC患者不同纤维化程度TLR2 mRNA、TLR4 mRNA水平F1组

表2 不同肝纤维化程度CHC患者TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表达情况比较(±s)

三、肝纤维化程度与TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表达Spearman系数分析

经相关性分析，CHC患者肝纤维化程度分级F1、F2、F3、F4与TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表达呈正相关(P<0.05)。见表3。

表3 肝纤维化程度与TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表达Spearman系数分析

讨 论

本研究结果显示，CHC组TLR2 mRNA、TLR4 mRNA水平显著高于对照组，提示TLR2、TLR4在CHC患者体内已呈现异常表达。TLR胞内区结构域的氨基酸序列缺失或突变会中断信号继续传导，从而影响机体免疫系统，而TLR2、TLR4是TLR家族中较为活跃的成员，通常分布于细胞膜，从而识别多种病原体的表面结构[7-10]。HCV感染患者细胞基质后，分布于其中的TLR2、TLR4结合受体大量增加，激活髓样分化因子依赖性信号转导通路，使得直接或间接的抗病毒细胞因子大量生成，诱导机体天然免疫应答[11]。

比较CHC患者不同纤维化程度TLR2 mRNA、TLR4 mRNA水平F1组

经相关性分析，CHC患者肝纤维化程度分级F1、F2、F3、F4与TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表达呈正相关，提示TLR2 mRNA、TLR4 mRNA水平与CHC患者肝纤维化有明显相关性。TLR2、TLR4都能和HCV蛋白进行反应使得其往更深层传导的过程受到阻碍，由此使得其介导的获得性免疫反应受到抑制，同时在此过程中调节了炎性因子的分泌使得肝纤维化不断进展[15]。

综上，CHC患者肝纤维化程度与TLR2 mRNA、TLR4 mRNA表达呈明显正相关，临床医师在对其肝纤维化程度进行评估时可将其作为参考指标，及时干预，以减缓肝纤维化向肝硬化的进展。