白银地区丙型肝炎基因分型的变化及临床意义＊

陶桂云,李霞霞，包 颖，黄晓晶，陈金霞，查成喜

（1.白银市中西医结合医院，甘肃 白银 730050；2 靖远县人民医院，甘肃 白银 730050；3.甘肃省中医院，甘肃 兰州 730000）

丙型肝炎是一种通过输血、破损皮肤、血液透析、性接触、母婴垂直传播等多种途径传播的，危害人类健康的重要传染病之一，丙型肝炎病毒（HCV）是其致病病原体，属于黄病毒科，核酸是单股、线性、正链RNA，在不同区域的感染者中可检测出不同的基因型分布，且与疾病的严重程度之间有着一定的相关性，可以根据基因型实施不同的治疗方案，所以研究丙肝的基因型不仅有助于掌握HCV的流行病学特点，也有助于了解丙肝的危险因素及疾病的进展情况[1-3]。本研究通过分析2013～2019 年白银地区HCV 基因型分布情况与2011～2012 年数据进行比较，为该地区丙肝患者临床治疗提供可靠的流行病学资料，临床可进一步根据《丙型肝炎防治指南》（2015 年更新版）中不同亚型选择抗病毒治疗方案，以期提高丙肝的治疗效果。

1 对象与方法

1.1 对象

收集白银地区2014～2019 年各医院检测的ELISA 检测抗体阳性217 例患者血清或血浆1ml，-80℃以下保存。其中13 例由于病毒载量低于检测下限无法分型，204 例通过PCR 反向斑点法进行基因分型，男性112 例，年龄10-79 岁，平均年龄46.7岁；女性92 例，年龄16-75 岁，平均年龄42 岁。

1.2 仪器与试剂

美国ABI7500 实时荧光PCR 分析仪；DA-8000核酸杂交分析仪；核酸提取纯化试剂盒（达安基因）；HCV 实时荧光定量PCR 试剂（达安基因）；基因分型检测试剂盒（达安基因）。

1.3 方法

HCV-RNA 定量检测严格按照中山大学达安基因股份有限公司《丙型肝炎病毒核酸定量检测试剂盒》操作说明书和实验室操作规程。HCV 基因型检测：提取纯化HCV-RNA 后，一步法反转录-PCR 扩增HCV 基因，98℃变性10min，立即冷却加入杂交模条，杂交，显色，记录结果。

1.4 统计学方法

采用SPSS20.0 软件进行统计学分析，计数资料用例数或百分率表示，HCV 基因型的分布差异采用卡方检验，以p＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 HCV 基因型结果

204 例HCV-RNA 标本中，共发现1 型、2 型、3型三种基因型，4 种基因亚型（1b、1a、2a、3a），1 型基因143 例（70.1%），其中1b 亚型122 例（66.7%），1a亚型2 例（3.4%）；2 型基因49 例（24.1%），全部为2a亚型；3 型基因12 例（5.8%），全部为3a。以1b 型为主，其次是2a 型，最后是3a 型（见表1，如图1 所示）。

图1 白银地区HCV 基因型分布情况

表1 甘肃省白银地区HCV 的不同基因型检出率n%（例数）比较

2.2 HCV 基因型与性别、年龄相关性分析

在204 例HCV 基因分型标本中，男女之间1b、1a、2a 和3a 基因型分布不存在性别差异，差异无统计学意义（x2=5.881，p=0.116）。1 型基因型年龄中位数为41 岁，2 型基因型年龄中位数为43 岁，3 型基因型患者年龄中位数为44 岁。各组间比较差异无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 HCV 基因型与性别相关性比较 例数(%)

2.3 2011-2019 年HCV 各基因型变化情况

研究者2011-2012 年数据[4]与2014-2019 年数据比较，各基因型分布情况见表3。

表3 2011-2019 年HCV 基因型分布情况 例(%)

通过分析发现，2013～2019 年丙肝分型趋势与2011 年～2012 年分型情况无差异，白银地区丙型肝炎病毒感染以1b 型为主，其次是2a 型，没有检出在我国常见的1b/2a 混合感染的患者。但在白银地区发现了中国其它地区少有发现的2c、3a 型的感染，但病例数较少，还需进一步观察。

3 讨论

丙型病毒性肝炎，简称为丙型肝炎、丙肝，是一种由丙型肝炎病毒（HCV）感染引起的病毒性肝炎，主要经输血、针刺、吸毒等传播，据世界卫生组织统计，全球HCV 的感染率约为3%，估计约1.8 亿人感染了HCV，每年新发丙型肝炎病例约3.5 万例。丙型肝炎呈全球性流行，可导致肝脏慢性炎症坏死和纤维化，部分患者可发展为肝硬化甚至肝细胞癌（HCC）。HCV 基因组高度异质性，根据核苷酸序列的差异程度，可将HCV 分为6 个基因型及至少67种亚型[6]，同时，HCV 基因型分布存在地理性差异。1a 基因亚型多见于美国，1b 基因亚型分布于亚洲各国，2a 和2b 基因亚型占遍布欧洲和日本，而2c 基因亚型最常见于意大利北部[5，6]。6 个HCV 基因型在我国大陆都有分布，但1b、2a 型最常见，如赤峰地区1b 型占71.11%，2a 型占16.33%[7]、北京地区1b 型占70%，2a 型占23.9%[8];山东地区1b 占64.28%，2a占30.57%)[9];在北方地区1b、2a 均高于全国平均水平，然而在南方地区并非如此，云南地区以6 型(43.48%)为主，其次为3b 型[10]，杭州地区以1b 为主（56.7%）接近于全国平均水平，其次是2a（10.2%），3b 型仅占8.42%[11]；广州番禺地区2016 年1b 型为主要类型，占48.0%，低于全国平均水平[12]。本研究结论白银地区丙肝患者主要以1b 型为主，其次是2a 型，符合北方HCV 基因分型的特点，另外甘肃省白银地区发现在中国其它地区少有发现的2c、3a 型的感染，也未发现混合感染1b/2a 的情况。研究表明HCV 基因型与HCVRNA 含量有明显的相关性，1、2型感染者血清HCV-RNA 显著高于3 型感染者，病毒复制相对活跃，易转为慢性[13]。因此，本研究结果以1b 型为主，2a 型次之，且样本病毒含量都是大于103 以上的样本，进一步显示1、2 型病毒含量高。不同HCV 的基因型对IFN-ɑ 治疗反应也有明显差异，可能与的coreE2 和NS5a 以及病毒复制强弱有关[14]。因此，研究区域HCV 基因分型结果有助于制定个体化抗病毒治疗方案，为本地区丙型肝炎的诊断、治疗和预防以及患者的预后判断提供强有力的依据。