GMA致裸鼠细胞恶性转化病理形态学分析

苑凤婷，孙 斌

（黑龙江八一农垦大学动物科技学院，黑龙江大庆 163319）

GMA 全名叫做甲基丙烯酸缩水甘油酯，又称甲基丙烯酸-2，3-环氧丙基酯，无色，呈透明状，难融于水，易融于许多应用范围广的有机溶剂中。优良的性能使GMA 大量应用于我们的衣食住行、生活起居中。这些化学物质的使用不仅大大提高了材料的美观程度，而且增加利用度和使用寿命。但是，相关问题也随即产生，人类的健康水平在时代的发展上亮起了红灯。各种恶性疾病的发生发展引起了人们的高度关注，科学研究证实，人类恶性疾病发生率增多与化学物质的使用率加大有极大的关系。

然而究竟是什么化学物质导致机体的高病变性？能否进行人为控制，进行定向实验? 有害物质主要侵害机体的那些器官？机体对其的代谢能力是否能提高？将是此研究主要关注的问题。

对此我们设计了此次实验，GMA 致裸鼠细胞恶性转化病理学诊断。具体实验设计为化学物质GMA对动物机体的影响[1]。

本次实验涉及到实验标本的制作与染色观察，雌雄二组的实验标本要分别标记观察。得出实验结果后要总结实验过程，与对照组进行比对，确保实验准确。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物

把裸鼠分为实验组与对照组，实验组分为雌雄2 组，共3 组，每组6 只，共18 只。选取SPF 级别21 ～30 d 的裸鼠，重15 ～19 g。

1.1.2 试验药物及试剂

GMA、中性福尔马林固定液、酒精、二甲苯、石蜡、蜂蜡、苏木精染液、伊红酒精染液、盐酸酒精染液、甘油蛋白粘片剂、中性树胶、卡诺固定液。

1.1.3 仪器耗材

蜡杯、酒精灯、解剖剪、培养皿、镊子、单片刀片、包埋盒、染色缸 、载玻片、盖玻片、显微镜、温度计、水浴锅。仪器设备见表1。

表1 仪器设备

1.2 实验方法

1.2.1 实验动物的接种

试验材料埋在后背和腋部皮下。

1.2.2 实验动物变化

接种后的实验动物在SPF 环境下继续饲养，2 ～3 周后肿块就可以形成[2]。眼观形态为菜花样，边缘高突，切面呈灰白色，粗颗粒状，表面有坏死[3]。

1.2.3 实验动物的剖检

固定：由于裸鼠的个体较小，采取简单固定。

器材：小剪刀，镊子，手术刀

用颈椎脱臼法处死小鼠后放在小磁盘中，采取被侧卧位。以耻骨前缘到剑状软骨做纵向切线，再以剑状软骨到腰两侧区剪开皮肤以及富强.侧向翻转小鼠后，整个腹腔就都打开了。以剑状软骨至下颌剪开皮肤后，把皮向左右剥开，然后暴露胸腔，从胸腔两侧背部剪掉肋骨以及肌肉，整个胸腔器官暴漏出来。依此取出检测所需标本脑、心、肝、脾、肺、肾及肿块组织。切取的组织块要方便固定。

1.3 检测方法

1.3.1 送检材料

福尔马林液固定组织标本。

制备：组织块长宽均为1.5 cm，厚为0.4 cm，用10%福尔马林固定4 h。

1.3.2 制作切片

常规病理组织学制片，石蜡包埋，切片厚5 μm，H.E.染色，光镜观察。

1.3.3 图像采集

光学显微镜观测，用TD2000 真彩色病理图像分析系统采集图像。

1.4 检测要求

对动物肿块的组织来源及恶性程度进行检查；

对动物各脏器进行病理组织学检查；

提供详细的病理看片记录。

2 结果

图1 3组裸鼠脑部组织切片（H-E 染色×100，A为雌性，B为雄性，C为对照组）

雌雄2 组无组间差异，脑部结构清晰、完整，无明显病变。大脑皮质各层细胞排列整齐，分层较明显；小脑白质和灰质分界清晰，普肯野细胞层结构正常；无瘤细胞转移。

2.1.2 肾

雌雄2 组无组间差异；肾小球结构完整，肾小管管腔无扩张；肾间质有出血现象，有少量炎性细胞浸润。

2.1.3 肝

雌雄2 组无组间差异；肝脏结构完整，肝细胞以中央静脉为中心，向四周呈放射状排列；肝细胞大小一致呈多边型，核较大呈圆形或椭圆形，胞浆均匀染色。窦状隙有少量淤血[4]。

2.1.4 脾脏

雌雄2 组无组间差异；脾脏结构完整，其间有巨细胞（细胞体积大、胞浆丰富，核多 ，排列呈马蹄形）和巨噬细胞浸润，与瘤细胞转移无关，可能与贫血、炎症有关。

2.1.5 肺

雌雄2 组无组间差异；肺泡壁结构基本完整，肺泡内无异物渗出；除了有局部有淤血、水肿外，无其它病变。

2.2 肿块组织的病理学检测

边缘组织出血、水肿，有炎症细胞浸润，瘤细胞与上皮组织交织、分界不清；肿块恶性程度比较严重。

3 讨论

制作完切片进行观察，发现雌雄2 组无组间差异，与对照组也无明显差异。通过镜下观察，裸鼠各脏器组织除脾脏外，形态结构完整，细胞排列整齐，没有出现明显的炎性细胞浸润等异常现象，没有瘤细胞的转移[5]。说明瘤细胞没有侵害到相关脏器。

镜下观察脾脏结构完整，出现大量的巨噬细胞的浸润，病变明显。实验结果分析，这可能与其它脏器组织和肿块组织出血、贫血有关，而与瘤细胞转移无关[6]。

肿块组织低倍镜下，与对照组差异明显。细胞呈片状、局灶性增生，局部有出血。高倍镜下，细胞大小、深浅不一呈卵圆形、圆锥形或梭性，胞浆丰富、染色质颗粒较粗、核仁明显，可见明显的核分裂相，退变的细胞呈水泡样变性。间质为红染胶原纤维束、粗大均质。雌雄2 组无组间差异，按照恶性程度评分标准，雌性为3.5 分，雄性为4 分。肿块恶性程度比较严重。肿块组织的瘤细胞分化不一致、呈片状局灶性增生，核仁明显、可见明显的核分裂相。综合分析，肿块组织属恶性上皮瘤。

4 结论

GMA 能够导致机体产生病变，且病变明显，实验成立。