血清中PKM2和TSGF水平与宫颈癌患者病情进展的相关性

孙红娜 王月荣 黄勇华 陶伟华 刘晓明

相关报道显示：全世界范围内，宫颈癌新增病例数高达50万例，发病率仅次于乳腺癌[1-2]。通常宫颈癌在早期缺乏明显症状，且宫颈癌患者预后差[3]，近年来宫颈癌发病出现了年轻化趋势且育龄女性患病率逐年增加，因此在已婚或适婚的育龄女性中加大排查力度，早发现、早治疗，对提高宫颈癌临床疗效具有重要意义[4]。目前血清标志物，如：鳞状细胞癌抗原(squamous cell carcinoma，SCC)、糖蛋白抗原125(carbohydrate antigen 125，CA125)、丙酮酸激酶M2型(pyruvate kinase M2 type，PKM2)和恶性肿瘤特异生长因子(tumor specific growth factor，TSGF)等为宫颈癌的诊断和治疗提供了重要依据[5-6]。鉴于此，本研究选择宫颈癌及宫颈上皮瘤样病变患者为研究对象，检测其血清中PKM2和TSGF的水平，并分析二者与患者病情的相关性，以期为宫颈癌的诊治提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 一般资料

回顾性选择2017年1月至2020年1月本院收治的宫颈癌及宫颈上皮瘤样病变患者为研究对象，以手术病理学确诊为宫颈癌的60例患者作为宫颈癌组，经阴道镜下活检、病理学确诊为宫颈上皮瘤样病变的50例患者作为病变组，另选取同期于本研究体检中心进行健康体检的健康女性50例为正常对照组。3组研究对象中，病变组：年龄25～65岁，平均(42.19±6.43)岁，体重指数(23.17±3.16)kg/m2；宫颈癌组：年龄25～65岁，平均(41.70±5.53)岁，体重指数(23.09±3.40)kg/m2；正常对照组：年龄25～65岁，平均(42.19±6.43)岁，体重指数(23.17±3.16)kg/m2。

1.2 入选标准

纳入标准：①均经临床病理确诊为宫颈癌或宫颈上皮瘤样病变；②年龄25～65岁；③无放化疗及手术治疗史。排除标准：①合并其他恶性肿瘤患者；②临床资料不完整者；③合并其他主要器官功能不全者；④合并其他可能影响检验结果的疾病患者。本院伦理学研究委员会已批准并通过本研究内容，入选患者均知情同意本研究内容并签署同意书。

1.3 血清中PKM2和TSGF含量检测

于入院后1天，在患者正式治疗前采集患者及健康体检者空腹静脉血2 ml，收集于血清分离管的全血标本在室温放置2 h或4 ℃过夜，然后1 000×g离心20 min，取上清，-80 ℃保存。采用人PKM2和TSGF ELISA试剂盒，检测血清中PKM2和TSGF含量：从室温平衡20 min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4 ℃。设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50 μl，然后将样本孔中加入待测样本50 μl；空白孔不加，除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100 μl，用封板膜封住反应孔，37 ℃水浴锅或恒温箱温育60 min。然后，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液(350 μl)，静置1 min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。每孔加入底物A、B各50 μl，37 ℃避光孵育15 min后加入终止液50 μl，15 min内，采用美国Thermo Fisher公司MK-3型全自动酶标仪在450 nm波长处测定各孔的OD值。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 3组血清中PKM2和TSGF含量比较

与正常对照组相比，病变组和宫颈癌组患者血清中PKM2和TSGF含量均显著增加；与病变组相比，宫颈癌组患者血清中PKM2、TSGF含量也显著增加，差异均具有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 3组血清中PKM2和TSGF含量比较

2.2 PKM2和TSGF含量与患者临床病理特征的相关性

不同年龄段宫颈癌患者血清中PKM2和TSGF含量相比，差异无统计学意义(P>0.05)；不同肿瘤直径、TMN分期、分化程度、组织学类型以及淋巴结转移情况的宫颈癌患者血清中PKM2和TSGF含量差异均具有统计学意义(P<0.05)，即与肿瘤直径≤4 cm、Ⅰ～Ⅱ期、高分化程度、腺癌以及未发生淋巴结转移的患者相比，肿瘤直径>4 cm、Ⅲ～Ⅳ期、中低分化程度、鳞癌以及发生淋巴结转移的患者血清中PKM2和TSGF含量均显著升高，差异具有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 PKM2和TSGF含量与患者临床病理特征的相关性

2.3 血清PKM2和TSGF含量与患者病情进展的相关性

宫颈癌血清PKM2和TSGF含量与患者病情进展具有显著正相关性(γ均>0，P均<0.05)，即随着宫颈癌发病及病情进展，患者血清中PKM2、TSGF水平逐渐升高。见表3。

表3 血清PKM2和TSGF含量与患者病情进展的相关性

3 讨论

宫颈癌的发生一般需经历高危型HPV感染正常宫颈组织、宫颈上皮内病变以及宫颈癌等过程，虽然该肿瘤发病过程目前已较为明确，但发病的具体分子机制目前仍未见报道，研究表明：HPV感染是宫颈癌发生的主要诱因[1,7]。近年来，随着生活习惯及饮食习惯的变化，宫颈癌发病人群平均年龄呈现年轻化趋势，因此该肿瘤的临床诊断和筛查是降低临床死亡率并改善患者预后的重要手段[8]。相关研究显示：PKM2是糖酵解途径中的限速酶，参与肿瘤的发生和进展，其在肿瘤中呈高表达，被认为极有可能是肿瘤研究的重要靶点[9]。TSGF是一种在恶性肿瘤血管增生中起重要作用的指标，是恶性肿瘤及其周围毛细血管扩增的结果，并随肿瘤进展释放到外周血中，在肿瘤初期即可达到较高水平，因此在肿瘤恶性肿瘤早期诊断中具有重要意义[10-12]。

本研究通过检测宫颈癌患者血清中PKM2和TSGF水平，分析其与宫颈癌病情进展的相关性，结果显示：与正常对照组相比，病变组和宫颈癌组患者血清中PKM2和TSGF含量均显著增加；与病变组相比，宫颈癌组患者血清中以上指标含量也显著增加，差异均具有统计学意义(P<0.05)，表明：随着女性宫颈组织病变及癌变状况的发生，其血清中PKM2和TSGF水平均显著升高，显示出该两个指标与宫颈癌发生及进展的相关性，与蔡尚霞[13]和张建玲[14]。另外，本研究中不同年龄段宫颈癌患者血清中PKM2和TSGF含量相比差异无统计学意义(P>0.05)，不同肿瘤直径、TMN分期、分化程度、组织学类型以及淋巴结转移情况的宫颈癌患者血清中PKM2和TSGF含量差异均具有统计学意义(P<0.05)，表明：宫颈癌患者血清中PKM2和TSGF水平与宫颈癌肿瘤直径、TMN分期、分化程度、组织学类型以及淋巴结转移情况密切相关。因此这两个指标的水平变化可作为宫颈癌的生物学标志用于辅助诊断[15-16]。

本研究中相关性分析结果显示：宫颈癌血清PKM2和TSGF含量与患者病情进展具有显著正相关性(γ均>0，P均<0.05)，表明该两个指标的表达随着育龄女性宫颈病变及癌变程度加深而显著增加，宫颈病变或癌变患者血清中该两个指标的水平变化可作为女性宫颈病变或癌变筛查及诊断的评判依据。另外，本研究不足之处在于纳入样本量较少，且虽然提出宫颈癌血清PKM2和TSGF含量可作为育龄女性宫颈癌筛查的依据，但并未对该标准的具体数值范围进行深入探讨，这些将在后续研究中延长样本纳入年限、扩大样本量以进一步展开分析。

综上所述，宫颈癌患者血清中PKM2和TSGF水平与宫颈癌患者临床特征以及病情进展密切相关，可考虑将PKM2、TSGF表达水平变化作为女性宫颈癌筛查及诊断的评判指标。