VEGF、BCRP蛋白及血清LDH与晚期NSCLC一线化疗预后的关系

孔佑虔 王小玉 宋爱英 唐寅★

作者单位：1.黑龙江中医药大学，黑龙江，哈尔滨150040

2.黑龙江中医药大学附属第一医院肿瘤科，黑龙江，哈尔滨150040

现临床上对于晚期非小细胞癌（non⁃small cell lung cancer，NSCLC）患者的治疗以一线化疗为主，但经临床长期应用发现，该治疗方案中位生存时间较短［1］。及时明确影响晚期NSCLC 患者一线化疗的原因进而采取治疗措施具有重要意义［2］。乳酸脱氢酶（1actate dehydrogenase，LDH）是一种酵解酶，广泛存在于机体的各种组织中，在恶性实体瘤中LDH 水平明显增高［3］。血管内皮生长因子（vasclar endothelial growth factor，VEGF）系肿瘤生长、侵袭及转移相关主要调控因子之一，其表达水平与肿瘤组织及淋巴结转移密切相关［4］。乳腺癌耐药蛋白（Breast cancer resistance protein，BCRP）是新近发现的ABC 亚家族成员之一，有报道显示其在急性白血病、乳腺癌耐药中有一定作用，但在NSCLC 中的作用报道甚少［5］。本文就VEGF 及BCRP 蛋白及血清LDH 与晚期NSCLC 一线化疗预后的关系进行研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集115 例晚期NSCLC 患者肿瘤组织及肿瘤旁的正常粘膜组织（距肿瘤组织5 cm 处），分别作为癌组织组（n=115）、癌旁正常组织组，各115 例。纳入标准：①所有患者符合美国国家癌症综合网NSCLC 治疗指南2008年版［6］，且经病理检查证实；②未接受化疗、放疗等辅助治疗；③本研究患者临床资料均完整；④无其它恶性疾病。排除标准：①合并肝、肾、心脏脏器严重疾病者；②合并严重神经功能、认知功能障碍者；③依从性差者。其中男59 例，女56 例，平均年龄（60.31±6.65）岁。本研究经医院医学伦理委员会批准，受试家属均签署知情同意书。

1.2 一线化疗方案

GP 方案：吉西他滨100 mg/m2，TP 方案：多西他赛175 mg/m2，NP 方案：长春瑞滨25～30 ng/m2，均联合卡铂［按AUC=5 ng·mL⁃1·min⁃1的剂量估算，第1 天用药］；分别于第1、8 天各给药1 次，21天为1 个周期。所有患者至少化疗2 个周期。

1.3 检测方法

抽取患者清晨空腹静脉血5 mL，离心（3 000 r/min，10 min）分离血清于EP 管中，置于-80℃冰柜中待检。采用全自动生分析仪（日立公司7600⁃10）检测血清LDH 水平，操作严格按照说明书进行。

VEGF、BCRP：采集所有研究对象肿瘤组织及肿瘤旁的正常粘膜组织，采用免疫组化法进行检测。VEGF 单克隆抗体试剂盒购于北京中山生物技术有限公司；BCRP 单克隆抗体购于Chemical 公司。免疫组化采用链霉素抗生物素蛋白一过氧化酶连接法（streptavidin⁃perosidase，SP）法，SP 试剂盒购自北京中山生物科技有限公司。各步骤均严格按照试剂盒说明书进行操作。染色结果判定标准［7］：以细胞核中出现棕黄色颗粒为VEGF、BCRP阳性染色细胞。每张切片随机选取10 个高倍视野，按照阳性细胞的染色数量和显色强度分级评分，取其平均值。细胞染色数量的评分按照阳性细胞计数占同类细胞的百分比，计算该病例的细胞阳性率。本研究从患者治疗开始采用电话、微信等方式随访，随访2年，截止于2020年6月。

1.4 统计学分析

采用SPSS 22.0 软件进行分析，计数资料以n（%）表示，χ2检验，计量资料以（）描述，t检验；采用多元Logistic 回归分析影响晚期NSCLC 患者预后生存的危险因素，采用ROC 分析血清LDH、VEGF 及BCRP 蛋白对晚期NSCLC 患者一线化疗预后生存的预测价值；以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 VEGF、BCRP、LDH 表达情况比较

癌组织组VEGF、BCRP 阳性表达率及血清LDH 水平显著高于癌旁正常组织组，差异均具有统计学意义（P<0.05）。见表1。

表1 两组VEGF、BCRP、LDH 表达情况比较［n（%），（±s）］Table 1 The expression of VEGF，BCRP and LDH were compared between 2 groups［n（%），（±s）］

表1 两组VEGF、BCRP、LDH 表达情况比较［n（%），（±s）］Table 1 The expression of VEGF，BCRP and LDH were compared between 2 groups［n（%），（±s）］

组别癌组织组癌旁正常组织组t/χ2值P 值n 115 115 VEGF阳性99（86.08）19（16.52）111.380<0.001阴性16（13.91）96（83.47）BCRP阳性101（87.82）21（18.26）111.718<0.001阴性14（12.17）94（81.73）LDH（U/L）239.11±65.52 169.42±26.15 10.593<0.001

2.2 预后情况

经随访显示，患者2年生存率为31.30%（36/115）。

2.3 影响晚期NSCLC 患者一线化疗预后生存的单因素

患者年龄、性别非影响患者预后生存的相关危险因素（P>0.05），临床分期、分化程度、病理类型、淋巴转移、LDH、VEGF 及BCRP 蛋白表达为影响患者预后生存的相关危险因素（P<0.05）。见表2。

表2 影响晚期NSCLC 患者一线化疗预后生存的单因素Table 2 univariate analysis of prognostic factors in patients with advanced NSCLC after first⁃line chemotherapy

2.4 影响晚期NSCLC 患者一线化疗预后生存的多因素分析

组织中低分化、TNM 分期：Ⅲ+Ⅳ期、淋巴转移、血清LDH 异常升高、VEGF 及BCRP 蛋白阳性表达为影响晚期NSCLC 患者一线化疗预后生存的独立危险因素（P<0.05）。见表3。

表3 影响晚期NSCLC 患者一线化疗预后生存的多因素Table 3 multivariate analysis of prognostic factors in patients with advanced NSCLC after first⁃line chemotherapy

2.5 VEGF 及BCRP 蛋白及血清LDH 对晚期NSCLC 患者一线化疗预后生存的预测价值

LDH、VEGF 及BCRP 及三者联合曲线下面积分别为0.882、0.683、0.650、0.892，各指标曲线下面积以联合检测最大。见表4、图1。

表4 VEGF、BCRP 蛋白及血清LDH 对晚期NSCLC患者一线化疗预后生存的预测价值Table 4 Prognostic value of VEGF，BCRP protein and serum LDH in patients with advanced NSCLC after first⁃line chemotherapy

图1 ROC 分析Figure 1 ROC analysis

3 讨论

一线化疗是近年来肺癌治疗的领域突破，使NSCLC 的治疗方法有了长足的进展，但部分患者治疗效果仍不理想，影响预后。因此，寻求有效治疗靶点对改善晚期NSCLC 患者一线化疗预后有重要意义［8］。

BCRP 是ABC 转运蛋白超家族成员之一，目前，临床认为其可通过自身形成二聚体参与肿瘤进展而发挥作用［9］。相关研究证实BCRP 细胞株对依托泊甙、多柔比星等多种化疗药耐药，且与急性白血病、小细胞肺癌、乳腺癌等多种肿瘤对化疗的敏感性有关［9］。本研究结果说明BCRP 是影响晚期癌症患者无进展生存期及总生存期的重要预后因素［10］。

VEGF 是目前认为作用最强、特异性最高的血管生成调控因子，可特异作用于血管内皮细胞，促进其增殖及新生血管形成，增加血管通透性。相关研究发现，低分化肺癌VEGF 阳性表达率明显高于高分化肺癌，认为VEGF 的表达水平与肿瘤组织血管生成程度有关，并和肿瘤的恶性程度显著相关［11］。同时，Tanaka 等［12］研究显示，VEGF 可促使肿瘤血管生成使肿瘤体积增加，肿瘤细胞通过静脉淋巴管吻合处从血液循环中进入淋巴管，与肿瘤淋巴结转移的概率随血液循环中肿瘤细胞的增加而增高，VEGF 对淋巴结转移具有间接促进作用。类似的，Hirabae 等［13］研究显示，VEGF 表达与肺癌淋巴结转移有密切关系，可通过转导VEGF 反义核苷酸降低VEGF 表达，使肺癌淋巴结转移降低。本研究显示，VEGF 阳性与晚期NSCLC 患者一线化疗预后生存密切相关，说明VEGF 表达水平对临床治疗及预后具有重要指导意义。

LDH 属氢转移酶，可催化乳酸氧化成丙酮酸，与细胞代谢、缺氧、无氧酵解、活性状态和恶性转化等密切相关。研究发现，肿瘤细胞坏死后，体内代谢转换率加快，细胞膜通透性改变，使组织酶入血，导致血清LDH 活性增加［14］。进展期胰腺癌患者予以治疗后显示，完全缓解后血清LDH 水平明显降低，提示肿瘤代谢降低，细胞膜通透性恢复［15］。本研究结果说明血清LDH 升高对反映肿瘤负荷情况具有重要作用。ROC 曲线分析，结果显示VEGF 及BCRP 蛋白及血清LDH 联合检测下面积最大，特异、敏感度高。进一步提示联合检测对晚期NSCLC患者一线化疗预后具有重要意义，临床可通过联合检测多项指标提高对晚期NSCLC 患者一线化疗预后的评估价值。

综上所述，VEGF 及BCRP 蛋白及血清LDH 与晚期NSCLC 患者一线化疗预后密切相关，临床可根据该水平变化制定个体化治疗方案，对延长患者生存期具有重要作用。