芪参固表口服液薄层色谱鉴别与含量测定

韩德强，王伟明，刘 彦，付玮辰，麻继超

(黑龙江省中医药科学院·黑龙江 哈尔滨 150036)

芪参固表口服液由黄芪、防风、太子参等中药组成，具有益气养阴、清热固表、生津止汗的功效，用于气阴两虚型虚人感冒，见心悸气短，或自汗、恶风乏力等症者，对免疫功能低下所致的反复感冒具有较好的预防作用，为本院临床经验方。本方为传统工艺配制的口服液制剂，为了控制其质量，课题组对口服液的质量标准进行了研究，拟将其开发成院内制剂，建立防风薄层色谱鉴别方法及黄芪定量方法。结果显示，方法简单可操作性强，专属性和重复性良好，可以控制制剂质量。报道如下。

1 实验材料

1.1 试药 芪参固表口服液(批号：200201、200202、200203)：黑龙江省中医药科学院制剂室提供；黄芪甲苷(批号：110781-201717)、防风(批号：120947-201810)、5-O-甲基维斯阿米醇苷(批号111523-201811)：中国食品药品检定研究院。乙腈(色谱纯)：德国默克；其他试剂均为国产分析纯，水为杭州娃哈哈集团有限公司纯净水。

1.2 仪器 安捷伦1100高压液相色谱仪：美国安捷伦；奥泰2000ES蒸发光检测器；BT25S型十万分之一电子天平：德国赛多利斯；KQ-700VDB双频数控超声波清洗器：昆山市超声仪器有限公司；HHS-21-6电热恒温水浴锅：上海博讯实业有限公司医疗设备厂。

2 方法与结果

2.1 防风的薄层色谱鉴别 取本品20 mL，用乙醚20 mL去脂，弃去乙醚液，用水饱和正丁醇20 mL提取，取正丁醇液，用氨试液30 mL洗涤，分取正丁醇液，浓缩至干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液[1]689。取防风对照药材1 g，加丙酮20 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为对照药材溶液[1]689。再取5-O-甲基维斯阿米醇苷对照品，加乙醇制成每l mL含l mg的对照品溶液。吸取上述4 种溶液，按(通则0502)试验，分别于硅胶G薄层板上点样5 μL，展开剂为三氯甲烷-甲醇(4∶1)，展开晾干后在紫外灯(254 nm)下检视。结果：供试品色谱中可检出防风、5-O-甲基维斯阿米醇苷荧光斑点，阴性样品无干扰。见图1。

2.2 黄芪甲苷含量测定

2.2.1 色谱条件 色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：乙腈-水(32∶68)[1]302；蒸发光检测器；流速：1.0 mL/min.

1～3.供试品；4.防风；5.5-O-甲基维斯阿米醇苷；6.阴性样品图1 防风薄层色谱图

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照品12.64 mg，以甲醇溶解并定容至25 mL量瓶中，摇匀，即得(每1 mL中含黄芪甲苷 0.5 056 mg)。

2.2.3 供试品溶液的制备 取本品合剂25 mL，用水饱和正丁醇振摇提取4次，每次40 mL，合并正丁醇液，用氨试液充分洗涤2 次，每次40 mL，弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加水5 mL使溶解，放冷，通过D101型大孔吸附树脂柱(内径为1.5 cm，柱高为12 cm)，以水50 mL洗脱，弃去水液，再用40%乙醇30 mL洗脱，弃去洗脱液，继用70%乙醇80 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得[1]303。

2.2.4 阴性对照品溶液制备 取不含黄芪阴性样品，按上述方法制成黄芪阴性对照溶液。

2.2.5 专属性 吸取上述3 种溶液，依次进样，结果阴性色谱图在黄芪甲苷色谱的保留时间未见吸收峰。见图2。

图2 芪参固表口服液的HPLC色谱图(A.黄芪甲苷)

2.2.6 线性关系考察 将2.2.2项下配制的对照品溶液制成浓度分别为0.10 112、0.20 224、0.30 336、0.40 448、0.50 560 g·L-1的溶液，分别进样绘制标准曲线，线性回归方程为Y=2.4039X+2.1021，r=0.9997。结果，在1.0 112～5.0 560 μg范围内黄芪甲苷线性关系良好。

2.2.7 精密度 将浓度为0.30 336 g·L-1对照品溶液进样10 μL，重复6次，计算峰面积RSD为0.49%(n=6)。

2.2.8 稳定性 精密量取口服液依照本法制成供试品溶液，每隔4 h(0、4、8、12、16、24 h)进样1 次,测定24 h内样品稳定性，峰面积的RSD为0.66%(n=6)。

2.2.9 重复性 精密量取同一批次本品口服液，平行条件下分别制成6份供试品，按上述色谱条件注入色谱仪测定含量，计算黄芪甲苷平均含量为0.0 519 g·L-1，RSD=0.48%(n=6)。

2.2.10 回收率 精密量取已知含量同一批次的口服液6份(含量：0.0 519 g·L-1)，每份15 mL，分别精密加入黄芪甲苷对照品溶液，制备供试品溶液，注入液相色谱仪，计算黄芪甲苷含量。结果见表1。

表1 芪参固表口服液中黄芪甲苷的回收率试验

2.2.11 黄芪甲苷含量 取3批芪参固表口服液(批号：200201、200202、200203)按含量测定方法进样测定，计算黄芪甲苷含量，3批口服液含黄芪甲苷分别为2.61 mg/瓶，2.80 mg/瓶，2.74 mg/瓶，依据测定结果，暂定口服液每瓶含黄芪以黄芪甲苷计，不得低于2.00 mg。

3 讨论

防风中的主要活性成分包括色原酮、香豆素、挥发油等，有解热、镇痛和抗炎等方面的药理活性，有很好的化痰镇咳作用[2]。5-O-甲基维斯阿米醇苷属于色原酮类化合物，理化性质稳定，是防风指标性成分。本品为传统工艺水煎，因此选择5-O-甲基维斯阿米醇苷为对照。5-O-甲基维斯阿米醇苷在紫外光灯365 nm下吸收较弱，需喷以三氯化铝试液才可以检测到荧光斑点，实验发现在254 nm下不需要喷显色剂亦有较强的吸收，因此选择的检测波长为254 nm。

黄芪为方中君药，具有补气固表，托毒排脓，利尿，生肌之功效。其有效成分为三萜皂苷类成分，实验过程中采用对三萜皂苷类成分选择性较高的D101型大孔吸附树脂柱来纯化供试品，效果较为理想。流动相比较乙腈-水(32∶68)与0.1%甲酸的乙腈-0.1%甲酸溶液梯度洗脱[3]，结果发现加入甲酸虽然在一定程度上可以改善拖尾，但对基线噪音有一定影响，而且考虑甲酸对C18色谱柱寿命的影响选用乙腈-水(32∶68)为本实验的流动相。该方法稳定可行，可以控制本品的内在质量。