宫颈癌发生发展中aFGF与bFGF因子的表达及临床价值探讨

张琴 张花梅

滨州市中心医院妇科，山东 251700

宫颈癌是临床妇科常见的恶性肿瘤，在我国的发生率非常高，近几年呈年轻化趋势［1］。宫颈癌发生、发展与上皮细胞血管生成、不典型增生有很大的关系。酸性成纤维细胞生长因子（aFGF）与碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）在促进细胞生成、血管生成、宫颈上皮内瘤变、宫颈癌发展期间发挥着重要的作用［2］。但是，临床关于aFGF、bFGF在宫颈癌发生发展中的表达研究较少，本研究主要是对在宫颈癌发生发展中aFGF、bFGF的表达情况进行分析，希望可以为临床治疗、预防宫颈癌的发生提供一定的参考价值，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年1月至12月本院收治的宫颈癌、宫颈上皮内瘤变患者作为研究对象，同时选择正常宫颈组织作为对照对象，均经病理组织学检查确诊。宫颈癌患者60例，年龄范围为28～56岁，年龄（50.4±2.3）岁；其中腺癌22例、鳞癌38例；分期：Ⅳ期4例、Ⅲ期10例、Ⅱ期21例、Ⅰ期25例；分化程度：低分化14例、中分化20例、高分化26例。所有患者在术前没有接受放化疗，人宫颈癌细胞系Hela由中国医科大学细胞生物教研室提供。宫颈上皮内瘤变患者20例，年龄范围为24～58岁，年龄（50.6±2.7）岁；其中子宫颈上皮内瘤变（CIN）Ⅲ级6例、CINⅡ级8例、CINⅠ级6例。正常宫颈组织20例，年龄范围为28～55岁，年龄（50.1±2.1）岁，均取自子宫腺肌病或者是子宫肌瘤手术切除子宫标本。

1.2 方法

1.2.1 宫颈癌组织中aFGF、bFGF检测 通过反转录聚合酶链反应（RT-PCR）法对宫颈癌组织中aFGF、bFGF总RNA进行提取，使用抽提试剂盒（Trizol）。紫外分光光度计对RNA纯度、浓度进行检测，使用β激动蛋白作为内参照，引物序列见表1。

表1 引物序列

1.2.2 逆转录 在设定好的条件下反应，逆转录反应体系20μl，引物1μl，RNA 2μl。聚合酶链反应（PCR）扩增：TaqDNA聚合酶（0.2μl）、取正反向引物（1μl）、cDNA（3μl），加入到反应体系中。参数：94℃下反应40 s、94℃下变性3 min、56℃下反应1 min、72℃下反应1 min，一共30个循环，最后在72℃下反应5 min。PCR产物：经凝胶成像、分析扫描求相对值。

1.2.3 对宫颈癌细胞增殖的影响检测 四甲基偶氮盐微量酶反应比色（MTT）法：（1）常规培养。（2）试验分组：将增殖期细胞接种（96孔板），在5%CO2、37℃下恒温培养，aFGF组、bFGF组都是对细胞作用进行观察，同时设定空白对照组。（3）增加因素：细胞亚融合吸出旧培养液，在每孔中加入无血清培养液，剂量为200μl，后重复吸出操作。根据分组加入不同剂量的培养液、aFGF、bFGF、8μl肝素，让每个孔的终体积始保持200μl。见表2。（4）MTT比色：将孔板放到回孵箱，加入MTT溶液。继续孵育，加入二甲基亚砜（DMSO），对每孔OD值读取（酶联免疫仪），波长620 nm，参考波长490 nm。计算抑制率、细胞增殖。

采用MTT法对照组的aFGF值为0/0/0/0μg/ml，bFGF值为0/0/0/0μg/ml；aFGF组的aFGF值为0.15/0.30/0.60/1.20μg/ml，bFGF值为0/0/0/0μg/L；bFGF组为0/0/0/0μg/L，bFGF值为25.00/50.00/75.00/100.00μg/L。

1.3 观察指标 分析各组人群aFGF mRNA与bFGF mRNA基因的表达半定量结果，分析aFGF、bFGF对Hela细胞增殖的影响。

1.4 统计学方法 应用SPSS20.0软件，符合正态分布的计量资料以（）表示，组内对比，进行重复测量方差分析，P＜0.05为有差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组人群aFGFmRNA与bFGFmRNA的基因表达半定量结果分析 aFGFmRNA与bFGFmRNA基因表达在宫颈癌、宫颈上皮内瘤样病变中高于对照组（均P＜0.05），Ⅲ、Ⅳ期aFGFmRNA与bFGFmRNA基因表达高于Ⅰ、Ⅱ期（均P＜0.05）。Ⅰ、Ⅱ期aFGF mRNA与bFGF mRNA基因表达高于宫颈上皮内瘤样病变患者（均P＜0.05），在高、中、低分化宫颈癌中aFGFmRNA与bFGF mRNA基因表达相比，差异无统计学意义（P＞0.05），故与肿瘤病理类型没有明显的关系。分期一样，aFGF mRNA的表达和bFGF mRNA的表达呈正相关（P＜0.05），见表2。

表2 各组人群aFGFmRNA与bFGFmRNA的基因表达半定量结果分析（）

表2 各组人群aFGFmRNA与bFGFmRNA的基因表达半定量结果分析（）

注：以上各值以β激动蛋白为参照的相对值；aFGF为酸性成纤维细胞生长因子，bFGF碱性成纤维细胞生长因子，对照组为正常宫颈组织者；与对照组相比，a P＜0.05；与Ⅰ期、Ⅱ期相比，b P＜0.05

组别对照组宫颈上皮内瘤样病变组宫颈癌组Ⅰ期Ⅱ期Ⅲ期Ⅳ期高分化中分化低分化例数20 20 60 25 21 10 4 26 20 14 aFGFmRNA 0.645±0.036 0.759±0.092a 1.227±0.048a 0.967±0.048a 1.032±0.077a 1.300±0.128ab 1.342±0.141ab 1.189±0.110a 1.139±0.127a 1.192±0.096a bFGFmRNA 0.656±0.114 0.799±0.063a 1.324±0.095a 0.999±0.101a 1.179±0.044a 1.367±0.125ab 1.399±0.130ab 1.238±0.095a 1.295±0.105a 1.319±0.097a

2.2 aFGF、bFGF对Hela细胞增殖的影响分析 aFGF mRNA的表达和bFGF mRNA的表达呈正相关（P＜0.05）；bFGF mRNA略高于aFGF mRNA，但是整体没有太大差异（P＞0.05）；aFGF、bFGF水平增高，两组增殖都明显，但是bFGF组增殖更明显，75.00μg/ml浓度时程度最高，见表3。

表3 aFGF、bFGF对Hela细胞增殖的影响分析（80例）

3 讨 论

宫颈病变是一个较长的过程，不断恶化与肿瘤分裂、增殖有密切的关系，还与血管内皮细胞被激活、不断增殖、迁移有很大的关系［3］。

aFGF、bFGF是FGF家族中非常重要的两位成员，尤其是bFGF。aFGF主要是促进皮肤组织成长修复，bFGF主要是促进多种细胞增殖。bFGF活跃度越高血管生成速度就越快，从而会导致肿瘤血管形成，肿瘤血管形成后会为肿瘤转移提供机会，为细胞生长提供养分［4］。aFGF、bFGF之间有相似性，生物学功能、作用受体是相同的。在很多生物活性的分析当中，bFGF比aFGF更强。aFGF、bFGF在很多组织当中都有分布，在促进肿瘤细胞生长、繁殖期间具有重要作用。

很多学者在食管鳞状细胞癌、胰腺癌、子宫内膜癌、卵巢癌、乳腺纤维腺瘤、乳腺癌等组织中均可以检测到aFGF、bFGF与其受体表达。此次研究结果显示，aFGF mRNA与bFGFmRNA基因在宫颈癌、宫颈上皮内瘤样病变中存在过度表达现象，aFGF mRNA与bFGF mRNA基因表达在宫颈癌、宫颈上皮内瘤样病变中均高于对照组（均P＜0.05），Ⅲ、Ⅳ期aFGFmRNA与bFGFmRNA基因表达高于Ⅰ、Ⅱ期（均P＜0.05）。Ⅰ、Ⅱ期aFGF mRNA与bFGF mRNA基因表达高于宫颈上皮内瘤样病变（均P＜0.05），在高、中、低分化宫颈癌中aFGF mRNA与bFGF mRNA基因表达相比，差异无统计学意义（P＞0.05），故与肿瘤病理类型没有明显的关系。分期一样，aFGFmRNA的表达和bFGFmRNA的表达存在关系（P＜0.05），这就说明，在宫颈癌细胞异常分裂、增殖中，aFGF、bFGF可能以自分泌形式刺激细胞进行增殖、分裂。

综上所述，aFGF、bFGF因子在宫颈癌发生、增殖、浸入期间发挥着重要的作用，可以将其作为重要指标。

利益冲突：作者已申明文章无相关利益冲突。