蒸汽爆破预处理提高杜仲总黄酮产量的效果

2021-07-06 05:33丁欢欢杜庆鑫杜红岩刘攀峰孙志强
中南林业科技大学学报 2021年6期
关键词:种皮杜仲木质素

丁欢欢,张 宁,王 璐,杜庆鑫,杜红岩,刘攀峰,孙志强

(1.国家林业和草原局泡桐研究开发中心,河南 郑州 450003;2.南京林业大学,江苏 南京 210037;3.河南省科学技术信息研究院,河南 郑州 450003;4.经济林种质创新与利用国家林业局重点实验室,河南 郑州 450003;5.国家林业和草原局杜仲工程技术研究中心,河南 郑州 450003)

杜仲Eucommia ulmoidesOliver 是我国珍稀濒危二类保护植物之一,也是我国传统的名贵中药材和特有经济树种[1-2]。杜仲所含有效成分具有降血压、降血脂、降血糖、抗炎、保肝、抗肿瘤等功效[3-4]。黄酮类化合物是杜仲主要有效成分之一,其含量的高低是判断杜仲相关产品优劣的重要指标[5-7]。黄酮类化合物泛指以2-苯基色原酮为母体的一类化合物的总称,属于多酚类化合物的一大类,是植物代谢过程中产生的一类重要天然有机化合物,广泛存在于植物的根、茎、叶及花果等部位。目前,已经发现的黄酮类化合物超过了8 000 种[8-10]。黄酮类化合物具有清除活性氧自由基及抗脂质氧化等独特的药理效应,是国内外研究与开发利用的热点,已逐渐成为全球植物药制剂与保健食品的重要加工原料[11]。杜仲总黄酮在保健品、药品、日用化学品和食品添加剂等领域有广泛的应用[12]。

传统上,黄酮的提取方法主要有水提法和溶剂提取法。近年来,植物黄酮的提取方法不断改进,特别是一些辅助工艺和预处理方法,譬如超声、微波、超临界、酶、半仿生和蒸汽爆破等,使得杜仲总黄酮的提取率有所增加[13-15]。有学者采用超声波提取、微波提取和生物酶法提取绿原酸,虽然提取效果有所改善,但设备投资大,运行成本高,不适合工业生产[16]。蒸汽爆破(Steam explosion process,简称“汽爆”)是使高压水蒸汽气体通过植物组织表层微孔,渗透至植物组织细胞内,待植物组织内部压力与容器压力平衡后,瞬间将全部物料直接置于大气压下的一种热机械处理方法,不用或者少用化学试剂,能耗较低,对环境无污染[17-19]。蒸汽爆破可实现原料的组分分离、结构变化和化学分解等多种作用,可有效破坏木质纤维素结构,利于半纤维素、纤维素和木质素的降解,增加反应的有效比表面积,并进而加强了试剂的可及性,从而提高目标提取物产率[20-21]。譬如,蒸汽爆破预处理后,灵芝Ganoderma lucidum中的多糖和三萜提取率比未汽爆的提高10 倍[22];杜仲树皮经过蒸汽爆破预处理后,绿原酸得率与未经汽爆处理相比提高了4.88倍[23]。同时,在蒸汽爆破过程中加入催化剂可加速半纤维素的降解,有利于木质素酯键的断裂。实际上,在蒸汽爆破过程中,水也起到了酸的作用,而将稀酸作为催化剂与汽爆技术相结合不仅能够有效促进半纤维素和纤维素水解为单糖,而且能够降低汽爆强度(温度和压力)[24]。

笔者前期采用蒸汽爆破对杜仲树皮进行预处理后,半纤维素和纤维素含量分别较对照最高降低74%和62%。经过碱煮处理,汽爆后的固形物得率比对照降低了1.47 倍,而杜仲胶得率比对照提高了54%[25]。蒸汽爆破预处理后的材料经碱液加热处理,可有效去除木质素和未解聚的纤维素,其溶液中含大量的总黄酮、还原糖及碱溶性多糖类等成分[26];但有关碱煮后处理的溶液中总黄酮提取率的研究较少,尤其是植物材料经过蒸汽爆破预处理后,相关报道更少。本研究以杜仲叶片、树皮和种皮为材料,采用蒸汽爆破结合催化剂联合预处理工艺,一方面考察汽爆工艺对杜仲材料微观结构变化以及木质纤维素含量的影响,另一方面着重检测了经碱煮处理后溶液中杜仲总黄酮的产率,为实现杜仲全值化综合利用提供参考。

1 材料与方法

1.1 试验样品准备

杜仲叶片和树皮采自短周期杜仲矮林的当年生叶和树皮,种皮为当年采集的杜仲果实经脱壳机去除种仁后留存的果皮。杜仲矮林位于河南省孟州市中国林业科学研究院经济林研究开发中心孟州基地(112°42′58″E,34°51′38″N)。

1.2 蒸汽爆破条件

前期采用响应面设计,选取稳压时间、压强、浓度3 个因素,每个因素设置3 个水平,以木质纤维素含量为指标,开展了预实验。结果表明,杜仲叶片的最佳汽爆条件为维压时间220.93 s,压强1.60 MPa,催化剂盐酸浓度为2.90%;杜仲树皮最佳汽爆条件为稳压时间182.25 s,压强1.96 MPa,催化剂盐酸浓度2.97%。以此为参照,本实验设定的汽爆条件如表1所示。

表1 蒸汽爆破条件Table 1 Steam explosion conditions

杜仲材料经自然风干,以盐酸为催化剂,浓度分别为2%和3%(表1),于蒸汽爆破前48 h 采用喷雾器均匀喷洒在杜仲材料上,使湿度达30%,密封备用。采用QBS—2008 蒸汽爆破设备(汽爆容积5L,鹤壁正道生物能源有限公司)对杜仲材料进行爆破处理。

1.3 扫描电镜观察

为观察汽爆后样品表面和内部结构变化,试验材料60 ℃干燥至恒质量。取样固定于样品台。样品采用真空离子溅射方法镀金,然后用扫描电镜(Hitachi SU8010,XFlash610-H)进行扫描观察并拍照。选取叶片处理L2、树皮处理B3、种皮处理P2 以及各自的对照材料进行观察,其中对照材料未经汽爆处理。

1.4 比表面积测试

试验材料60℃烘干,使用加速表面积和孔隙率测量系统测定样品的比表面积(ASAP 2460)(Micrometrics Instrument Co.,Georgia,USA)。测定之前,所有试验样品在105℃真空中脱气6 h 除去水分,然后用氮气物理吸附-解吸分析,同时在液氮中冷却。吸附-解吸(P/P0)相对压(P/P0)为0.001~0.988。

1.5 木质纤维素含量测定

采用滤袋技术(ANKOM F57 滤袋;ANKOM Technologies Co.,Ltd.,Macedon NY,USA)分析中性洗涤纤维(ADF)、酸性洗涤纤维(NDF)和木质素含量[25],采用Alva 半自动化纤维分析仪(F1600;Jinan Alva Instrument Co.Ltd)开展测定。

样品50℃烘箱干燥,研磨后过40 目筛。准确称取样品1.000 g(±0.001 g),装入滤袋中,热封。样品在纤维分析仪反应器中用ADF 程序处理70 min,用NDF 程序处理80 min,全程保持微沸,之后,将ADF 或NDF 溶液从反应器中排出,并向反应器中加入94℃的自来水2 L,搅拌5 min,热水反复冲洗4 次。将冲洗过的滤袋取出并轻轻挤压以去除水分。然后,滤袋置于小烧杯中并用丙酮浸泡5 min,再次挤压以去除丙酮。样品在通风橱内风干后在60℃下干燥至恒质量,然后将滤袋在20℃下用72%硫酸溶液处理3 h,再水洗至中性,并经烘箱烘干后转移至坩埚中,放在电炉上烧约0.5 h。最后,将含有样品的坩埚在550℃的马弗炉中煅烧4 h,在干燥器内冷却至室温后称质量。灰分含量以及不溶于酸性木质素含量可用差重法测定。汽爆样品和对照均重复3 次。中性洗涤纤维(ADF),酸性洗涤纤维(NDF)和木质素含量采用以下公式计算:

1.6 碱煮后处理

分别取汽爆和未汽爆干燥后的样品,准确称量30.00 g(±0.01g),配制2% H2O2溶液量,加NaOH 调pH 到11.5,按w∶v=1∶20(样品重∶溶液量),将样品和试剂加入烧杯中,50℃水浴磁力搅拌2 h,冷却至室温,加酸调pH 至中性,抽滤后合并滤液,离心取上清液冷冻保存,用于总黄酮测定。将残渣水洗2~3 次,50℃烘干至恒质量,称质量。干物质损失率采用下式计算:

1.7 总黄酮含量测定

采用紫外分光光度法(北京普析通用TU1901)测OD 值,由芦丁标准曲线计算总黄酮含量[14]。

取50 uL 碱煮后中和的溶液,加950 uL 甲醇,加4 mL 水,再加入0.3 mL NaNO2溶液,室温静置5 min。再加入0.3 mL AlCl3溶液,静置6 min。最后加入2 mL NaOH,并定容至10 mL,静置15 min。510 nm 处测定吸光值X。每个样品重复测定3 次。总黄酮含量经标准曲线公式(6)计算后取平均值。

1.8 数据分析

所有测试均重复3 次,结果表示为平均值±标准偏差。采用单因素方差分析(P<0.05)检验叶片、树皮和种皮比表面积、木质纤维素含量、干物质损失率以及总黄酮的差异并进行Duncan 多重比较。使用SPSS 20.0 和 Excel 2007 软件进行数据分析。

2 结果与分析

2.1 汽爆前后材料结构形态分析

杜仲叶片、树皮和种皮经过蒸汽爆破后,其宏观形态发生了变化。汽爆后叶片、树皮颜色由绿色或黄色(图1A、C)变为深褐色(图1B、D),并因杜仲胶丝暴露和缠绕使分散的组织粘连在一起(图1B、D)。杜仲种皮汽爆后,破碎,胶丝暴漏,使得分离的种皮粘连在一起,形成了小块状,颜色变化不大(图1E—F)。

图1 蒸汽爆破前后杜仲器官的宏观形态Fig.1 Macroscopic morphology of E.ulmoides organs before and after steam explosion

通过扫描电镜对杜仲原料和汽爆后物料的微观结构进行观察,下图中左侧的均为汽爆后材料的SEM 显微照片,右侧为对照材料的SEM 显微照片。

叶片汽爆后表面褶皱多而密集,出现明显沟痕,凹凸不平,还有不少碎片(图2A),而对照表面的褶皱和沟痕均较浅,碎片很少(图2B)。经过放大,在汽爆后的材料中可观察到因高压蒸汽瞬间解压后冲击所形成的孔洞(图2C),未汽爆材料中无此现象(图2D)。截面图显示,汽爆对叶片组织结构造成了很大的破坏,形成了较多的空腔结构(图2E),而对照的细胞组织较为均匀(图2F)。

图2 蒸汽爆破前后杜仲叶片的微观形态Fig.2 Microscopic morphology of E.ulmoides leaves before and after steam explosion

从图3A 中可以看出,树皮汽爆后表面组织结构或细胞壁被打乱和破坏,形状变得不规则,有碎片附着(图3A),而对照组织排列整齐且形状规则(图3B)。截面图显示,汽爆后树皮出现了较大孔洞,且周围组织挤压在一起(图3C),而对照的截面孔洞小,组织分层较明显且无挤压(图3D)。对截面放大观察,从汽爆后材料截面图可看出断层组织已被打乱,进行了重排,堆积在一块形成了大量孔隙(图3E),未汽爆材料截面图中断层组织呈大块片状,层次较为清晰,孔隙主要存在于片层之间(图3F)。

图3 蒸汽爆破前后杜仲树皮的微观形态Fig.3 Microscopic morphology of E.ulmoides bark before and after steam explosion

汽爆后种皮表面褶皱和沟痕明显,变得凹凸不平,粗糙多壑(图4A),未汽爆种皮表面光滑整齐,虽有一些碎片黏附上面,但各细胞间排列紧密规则,无裂纹(图4B)。汽爆后种皮的截面图显示,细胞壁被打破,大量的纤维管暴露(图4C),对纤维管束的放大观察,可看到纤维管束表面造成了破坏,出现不少孔洞(图4E),对照中并看不到纤维管(图4D),放大后也观察不到纤维管(图4F)。

图4 蒸汽爆破前后杜仲种皮的微观形态Fig.4 Microscopic morphology of E.ulmoides pericarp before and after steam explosion

2.2 比表面积

单因素方差分析结果显示叶片(F=2 752.505,P<0.001)、树皮(F=1 703.618,P<0.001)和种皮(F=7 488.891,P<0.001)汽爆后的比表面积差异均达到极显著水平。

从图5中可以看出,叶片处理L2 的表面积值为0.338 4 m2/g,显著低于对照的0.577 9 m2/g,但L1 的比表面积值0.716 9 m2/g 显著大于对照,是对照的1.24 倍。树皮汽爆后比表面积随着压力的增大而增大,处理B2 和B3 的比表面积值分别是对照(0.142 7 m2/g)的3.42 和3.51 倍;未使用催化剂的处理B1 比表面积值为0.291 6 m2/g,高于对照,但低于喷洒催化剂的处理B2。汽爆后的种皮比表面积明显增大,P1 和P2 分别是对照(0.279 5 m2/g)的5.54 倍和4.80 倍。

图5 蒸汽爆破对杜仲器官比表面积的影响Fig.5 Impact of steam explosion on specific surface area of Eucommia ulmoides organs

2.3 木质纤维素含量的变化

方差分析结果显示,汽爆后杜仲叶片半纤维素、纤维素和木质素各处理间存在显著性差异(F=80.881,P<0.001;F=4.335,P<0.001;F=17.345,P<0.001)(图6)。杜仲叶片处理L1 和L2 的半纤维素含量分别为2.75%和3.85%,比对照的9.43%降低70.83%和59.17%;处理L1和L2 的纤维素含量分别为8.24%和6.75%,分别比对照的10.79%降低23.63%和37.44%,且差异性显著,而L1 和L2 之间差异不显著(P=0.068);处理L1 和L2 木质素含量分别为9.69% 和14.17%,均分别比对照的18.04%降低46.28%和21.45%,各处理间差异性显著。

图6 不同汽爆条件下杜仲叶片中木质纤维素的变化Fig.6 Changes of lignocellulose in Eucommia ulmoides leaves under different steam explosion conditions

方差分析结果可知,杜仲树皮各处理间的半纤维素和纤维素含量有极显著差异(F=292.491,P<0.001;F=548.802,P<0.001),而木质素含量无显著性差异(F=3.898,P=0.055>0.05)(图7)。汽爆后杜仲树皮处理B1,B2 和B3 的半纤维素含量分别为4.14%,8.59%和3.62%,比对照的13.74%降低69.86%,37.48%和73.65%;处理B1,B2 和B3 的纤维素含量分别为8.47%,14.35%和7.09%,比对照的22.07%降低61.62%,34.97%和67.87%;处理B1 和B2 木质素的含量分别为24.76%和27.27%,比对照的22.64%高出9.36%和20.45%,而处理B3 的含量为22.54%,仅比对照低0.44%。喷洒催化剂的处理B3 的半纤维素,纤维素和木质素含量均低于其他处理;未喷洒盐酸的处理B1 的木质纤维素含量整体低于喷洒盐酸的处理B2,但木质纤维素含量整体低于B3 处理。

图7 不同汽爆条件下杜仲树皮中木质纤维素的变化Fig.7 Changes of lignocellulose in Eucommia ulmoides bark under different steam explosion conditions

汽爆后种皮各处理的半纤维素和纤维素含量分别存在极显著性差异(F=205.091,P<0.001;F=97.847,P<0.001),而木质素含量均无显著性差异(F=0.823,P=0.483>0.05)(图8)。处理P1 和P2 的半纤维素含量分别为5.73%和3.62%,比对照的11.41%分别降低49.78%和68.27%;处理P1 和P2 的纤维素含量为8.59%和6.83%,分别比对照的16.74%降低48.68%和59.19%;然而,处理P1 和P2 的木质素含量均高于对照,分别为21.76%和21.54%,比对照的20.64%高出5.14%和4.17%。

图8 不同汽爆条件下杜仲种皮中木质纤维素的变化Fig.8 Changes of lignocellulose in Eucommia ulmoides pericarp under different steam explosion conditions

2.4 干物质损失率

杜仲叶片、树皮和种皮的干物质损失率处理组与对照均存在极显著性差异(F=241.72,P<0.001;F=418.987,P<0.001;F=1 000.899,P<0.001)。叶片碱煮后导致L1、L2 的干物质损失率分别为80.80%和80.99%,其是对照干物质损失率32.04%的2.52 倍。种皮碱煮后,处理P1、P2 干物质损失率分别为52.33%和55.47%,比对照的39.30%高出1.33 和1.41 倍。树皮B1、B2 和B3 碱煮后干物质损失率分别为59.42%,61.12%和65.25%,分别是对照的1.44,1.48 和1.58 倍(图9)。

图9 蒸汽爆破对杜仲干物质损失率的影响Fig.9 Impact of steam explosion on the dry matter loss rate of Eucommia ulmoides

2.5 总黄酮产率

与未汽爆的杜仲叶片、种皮和树皮提取液中总黄酮含量相比,蒸汽爆破预处理能显著提高杜仲叶片、种皮和树皮器官提取液中总黄酮含量(图10)。

图10 蒸汽爆破对杜仲器官中总黄酮含量的影响Fig.10 Impact of steam explosion on flavonoids content in Eucommia ulmoides organs

方差分析结果可知,杜仲叶片、种皮和树皮各处理间总黄酮含量差异极显著(F=12 969.25,P<0.001;F=31 252.52,P<0.001;F=1 934.037,P<0.001),且均显著高于对照(图10)。汽爆后的叶片处理L1 和L2 的提取液中总黄酮含量分别比对照(33.049 3 mg/mL)提高了2.81 倍和4.97 倍。汽爆后的种皮处理P1 和P2 提取液中总黄酮含量分别比对照(28.441 0 mg/mL)提高了5.69 倍和8.04 倍。不论汽爆前是否喷洒催化剂盐酸,汽爆后杜仲树皮提取液中总黄酮含量均比对照高,树皮喷洒盐酸后汽爆的处理B2 提取液中总黄酮含量最高,是293.409 0 mg/mL,比处理B3 的总黄酮含量高出29.953 0 mg/mL,它们分别是对照(16.921 0 mg/mL)的17.33 倍和15.56 倍;未喷洒盐酸处理B1 提取液中总黄酮含量为205.854 0 mg/mL,是对照的12.16 倍,但显著低于处理B2 和B3。

3 结论与讨论

本研究结果表明,蒸汽爆破不仅破坏了杜仲器官组织的内部结构,而且导致了器官中各种组成成分的变化。其中,叶片比表面积最大增加了1.24倍,树皮的增加3.51 倍,种皮的增加5.54 倍。汽爆后叶片、树皮和种皮中木质纤维素、半纤维素和纤维素的含量均发生显著变化,汽爆后叶片木质素比对照最高降低46.28%,而汽爆后树皮和种皮木质素含量均比对照高,最高分别高出20.45%和5.14%。叶片、树皮和种皮的半纤维素含量最高比对照分别降低70.83%、73.65%和68.27%;纤维素含量最高比对照分别降低37.44%、67.87%和59.19%;同时,叶片、树皮和种皮碱煮后干物质损失率最高分别为80.99%、61.12%和55.47%,分别是对照的2.52、1.58 和1.41 倍。经测定,叶片、树皮和种皮汽爆后总黄酮含量最高分别是对照的4.97、17.33 和8.04 倍。

许多研究证实,蒸汽爆破能改变植物组织的结构,特别是内部结构[28-29]。本研究观察到,蒸汽爆破后,杜仲材料的宏观形态和微观结构均发生了变化,与其他植物材料经蒸汽爆破后的结果相一致[30-32]。扫描电镜结果显示,汽爆过程打乱或破坏了杜仲内部原有的有序结构,使之成为无序或松散的结构,破坏了细胞壁,使组织器官破碎,形成孔隙或者空腔(图2B、D、F,图3B、D、F,图4B、D、F),这也是造成比表面积增大的主要原因。经蒸汽爆破后的沙柳Salix psammophila原料变成松散的细纤维状或者絮状,原有致密的天然纤维束结构被打碎断裂,原料比表面积大大增加[30];还有,蒸汽爆破后的秸秆表面破坏严重,形态结构发生明显变化,比表面积增大[33]。Ding等[25]的研究结果也表明,与对照相比,蒸汽爆破后的杜仲树皮遭到了破坏,比表面积显著增加。一般,比表面积会随着蒸汽压力的增大而增加。但另一方面,植物材料是一种以细胞壁和中间层为骨架的多孔介质,当遭到较高的蒸汽压力的压迫时会使一些孔洞被封闭,孔径发生改变,使得比表面积减小[34]。本研究的叶片处理L2 的比表面积值比对照低也印证了上述结论。

蒸汽爆破能使纤维网和细胞壁破碎,有利于木质纤维素生物质的分离[35-37]。本研究表明,蒸汽爆破对杜仲叶片、树皮和种皮中的木质纤维素有降解作用,尤其是半纤维素和纤维素。与李定国等人实验结果相似,蒸汽爆破预处理可促进竹原料中半纤维素的溶出和部分木质素的去除[38]。构树Broussonetia papyrifera(Linn.)L’Hér.ex Vent.树皮在蒸汽爆破预处理后,木质纤维素的含量都有不同程度的降低,半纤维素为主要降解部分,降解率为62.77%[39]。然而,本研究中,树皮处理B3 的木质素含量仅比对照降低0.44%,处理B1,B2 和种皮处理P1,P2 的木质素含量均比对照有所增加,这可能是伪木质素的存在[42,43]。汽爆后的毛竹Phyllostachysheterocycla(Carr.) Mitford cv.Pubescens和胡枝子Lespedeza bicolorTurcz 中,木质素含量的降低也不是很明显。毛竹在1.8 MPa维压10 min 时,木质素仅降低了4.34%;在为1.8 MPa 维压5 min 时,木质素含量略有升高[31]。在胡枝子汽爆过程中,酸不溶木质素的含量从17.00%提高到23.26%[40]。木质素在蒸汽爆破过程中也存在少部分的降解[41],形成小分子的芳香族物质溶解在水中,但是在木质素和糖以及木质素与糖的降解产物(糠醛)之间还存在着一定量的缩聚反应,形成所谓的伪木质素[42],使木素的质量保持稳定。

植物细胞壁含有大量的碳水化合物,这些碳水化合物形成纤维素纤丝的高度有序结构,纤维素纤丝嵌入在交联半纤维素、果胶、糖基化蛋白和木质素及木质化程度的复杂基质中[44]。蒸汽爆破后,植物细胞壁的木质纤维组织被破坏,木质纤维素降解,植物纤维原料中所含的部分无机盐类、糖、植物 碱、单宁、色素及多糖类物质(如树胶、黏液、果胶质 等成分)均能溶于碱液中,而且细胞基本被破坏,细胞器基本消失,淀粉、蛋白质等分子颗粒被破坏,细胞内溶物析出[45],因此,汽爆后碱煮样品的干物质损失率增加。本试验结果与此一致。损失的干物质溶于碱溶液中,被称为抽提物。蒸汽爆破使沙柳碱溶液中抽提物含量有所增加[31]。与传统的提取方法相比,蒸汽爆破可有效的破坏木质纤维素结构及木质素、半纤维素的结合层,使细胞壁破损,增加有效比表面积,利于溶剂的可及性,促进了植物材料内部物质的转化以及提高有效活性成分的提取率[20,34]。例如,张兵兵等[46]以银杏Ginkgo bilobaL.叶为实验材料,与传统有机溶剂提取法相比,经过蒸汽爆破后的银杏叶黄酮提取率提高了2.1 倍。漆树Toxicodendron vernicifluum(Stokes) F.A.Barkl.果实经过蒸汽爆破后的类黄酮产量比未处理的样品约高8 倍左右[47]。本实验结果也表明,汽爆后杜仲叶片、树皮和种皮提取液中总黄酮含量均高于对照。

蒸汽爆破破坏了杜仲器官的内部有序结构,增大了比表面积,降解了部分木质纤维素,提高了干物质损失率,使得溶剂可及性增大,利于杜仲叶片、树皮和种皮中总黄酮的提取。蒸汽爆破作为一种环境友好型,节约能源,仅有物理加工过程,无化学物质污染,可以进行大规模处理的预处理方法。合适的蒸汽爆破条件对植物活性成分提取和提取时间的缩短等方面均有积极的作用,蒸汽爆破必将得到更多关注和更广泛的应用。

本研究中仅测定了碱煮液中总黄酮的产率,并未检测其他成分含量的变化,比如还原糖、多糖、杜仲胶等。其次,本研究没有对汽爆后碱煮液和残渣进行实际性应用。故下一步将研究蒸汽爆破后碱煮液中其他有效活性成分的变化,并将提胶后的残渣以及碱煮液冷却干燥后的粉末作为饲料添加物,开展动物饲喂实验,为开发绿色、高效饲料提供一些参考。

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