温阳化痰贴对小儿哮喘TH1、TH2细胞因子免疫调节的临床研究

董艳，李静，辛德莉，徐荣谦，潘鸿，盛梦娟，付玉林，杨洁

1.北京市昌平区中西医结合医院儿科，北京 102208；2.首都医科大学附属北京友谊医院热带病研究所，北京 100050；3．北京东直门医院儿科，北京 101121；4．北京市海淀区中医医院儿科，北京 100086

支气管哮喘是一种以气道高反应性和慢性炎症性气道阻塞为特征的变态反应性疾病[1]。研究显示[2]，Th1/Th2细胞免疫可参与支气管哮喘发病，其可参与支气管哮喘患者多种炎症介质的调控。该研究选取2016年1月—2018年6月期间在该院治疗的123例支气管哮喘稳定期患儿，对其血清Th1/Th2细胞免疫平衡的变化进行研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取该院门诊接收和住院治疗的小儿哮喘缓解期的患儿123例，随机分为治疗组63例与对照组60例。治疗组男30例，女33例；年龄4～12岁，平均年龄（6.0±1.2）岁。对照组男31例，女29例；年龄4～12岁,平均年龄（6.2±0.8）岁。两组一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。患儿及家属知情同意下进行，且试验通过该院伦理委员会批准同意。纳入标准：均处于缓解期的4～14岁哮喘患儿；症状积分≥12分。

排除标准：①不符合哮喘缓解期诊断标准；②敷贴穴位局部皮肤有破损者；③在治疗过程中，出现发热、哮喘急性发作或肺炎及多种感染性疾病急性发作期；④不能坚持或不能配合治疗。

1.2 诊断标准

①西医诊断标准：参照中华医学会儿科分会2008年制定儿童哮喘防治指南[3]。中医诊断标准：小儿哮喘缓解期诊断标准参照中华医学会儿药管理局1994年颁发的《中医病症诊断疗效标准·中医儿科病症诊断疗效标准》的哮喘诊断依据及缓解期的分类标准[4]。

1.3 方法

1.3.1 治疗方法 对照组给予哮喘常规治疗 吸入舒利迭(沙美特罗50μg和100μg丙酸氟替卡松)（注册证号：H20150323）,口服孟鲁斯特钠4 mg或5 mg（注册证号：H20160440，批准文号：H20160441），治疗组在此基础上2016年和2017年夏季初伏、中伏、润中伏及末伏，连续2年进行温阳化痰贴（京药制字z20110007）穴位敷贴治疗，每伏贴3 d。

1.3.2 药物制备 温阳化痰贴（北京中医医院配制）：炒介子、细辛、百部、白芷、醋五味子、冰片。药膏0.5 g/帖。选穴根据经络辨证原则：分别选取肺俞穴、大椎穴、膻中穴、膏盲穴帖敷。用75%酒精消毒穴位处皮肤，待晾干后将敷贴固定在穴位上，根据患儿年龄，4～6岁留置2～3 h，6～14岁留置4～6 h。从2016年“三伏”起对符合标准的60例患者连续2年进行“三伏”贴敷。每伏贴3 d。贴敷当天不宜用凉水洗澡，禁食生冷、油腻、辛辣食品。

1.3.3 操作方法 患儿入组后采集清晨空腹静脉血6 mL，其中3 mL用于检测Th1、Th2表达情况，3 mL采用低温离心机4℃下2 500 r/min离心10 min，分离血清后分为2份，编号保存于深低温冰箱，ELISA法检测血清Th1细胞因子：干扰素-γ（IFN-γ），Th2细胞因子：白介素-4（IL-4）水平，操作步骤严格按照试剂盒说明书操作。

1.4 观察指标

抽取两组患儿治疗前后的静脉血，比较两组患儿治疗前后Th1/Th2型细胞因子和CD3+、CD4+、CD8+及CD4/CD8。Th1细胞因子，干扰素-γ（IFN-γ），Th2细胞因子，白介素-4（IL-4）的表达情况。

1.5 统计方法

采用SPSS 19.0统计学软件分析数据，计量资料用（±s）表示，组间比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患治疗前后Th1/Th2型细胞因子变化水平比较

治疗前两组患儿IFN-γ和IL-4比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；治疗后，同组患儿IFN-γ高于治疗前，IL-4低于治疗前，Th1/Th2型细胞因子均明显改善，差异有统计学意义（P＜0.05）。两组患儿治疗后比较，治疗组患儿改善明显，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

2.2 两组患儿治疗前后各项免疫指标比较

治疗前两组患儿CD3+、CD4+、CD8+及CD4/CD8比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；治疗后同组患儿CD3+、CD4+高于治疗前，CD8+低于治疗前，CD4/CD8免疫水平明显改善，差异有统计学意义（P＜0.05）。两组患儿治疗后比较，治疗组免疫指标改善明显，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表1 两组患儿治疗前后Th1/Th2细胞因子变化水平的比较（±s）Table 1 Comparison of Th1/Th2 cytokine levels of children before and after treatment in the two groups（±s）

表1 两组患儿治疗前后Th1/Th2细胞因子变化水平的比较（±s）Table 1 Comparison of Th1/Th2 cytokine levels of children before and after treatment in the two groups（±s）

注：治疗前两组比较，P＞0.05；同组治疗前后比较，P＜0.05；两组治疗后比较，P＜0.05

组别 Th1细胞因子IFN-γ（ng/L）Th2细胞因子IL-4（ng/L） Th1/Th2对照组（n=60）治疗前治疗后治疗组（n=63）治疗前治疗后t值25.51±6.65 35.53±4.67 65.76±5.76 51.54±6.76 0.38±4.43 0.68±4.87 23.72±5.43 48.79±7.98 1.930 60.87±4.98 38.45±3.56 3.210 0.38±4.88 1.26±5.76 2.150

表2 两组患儿治疗前后各项免疫指标的比较（±s）Table 2 Comparison of various immune indexes of children between the two groups before and after treatment（±s）

表2 两组患儿治疗前后各项免疫指标的比较（±s）Table 2 Comparison of various immune indexes of children between the two groups before and after treatment（±s）

注：治疗前两组比较，P＞0.05；同组治疗前后比较，P＜0.05；两组治疗后比较，P＜0.05

组别 CD3+（%） CD4+（%） CD8+（%） CD4/CD8对照组（n=60）治疗前治疗后治疗组（n=63）治疗前治疗后t值54.87±5.65 66.45±6.45 32.65±3.54 39.76±4.65 38.53±4.45 30.56±5.54 0.84±2.65 1.30±1.75 58.67±6.65 75.78±5.87 3.540 35.65±4.54 48.87±5.65 2.430 36.87±4.87 25.45±3.56 3.030 0.96±2.21 1.92±1.23 1.860

3 讨论

通过该课题的研究证实，治疗组的细胞因子IFN-γ、IL-4、Th1/Th2、免疫指标CD3+、CD4+、CD8+及CD4/CD8明显改善且优于对照组(P＜0.05)。证明温阳化痰贴敷对处于缓解期哮喘患者的IL-4和IFN-γ水平具有调节效果，考虑主要是通过对TH细胞的分化进行调节，也就是对TH细胞向Th1细胞分化进行调节，对向Th2分化进行抑制，达到对IL-4、IFN-γ的水平进行影响的目的。使Th1/Th2的平衡得到调节，从而使血清体液免疫水平得到调节和上升，使抵抗力得到加强，降低哮喘发作次数，同时也使哮喘发作的程度降低，对哮喘的发生进行控制。

在支气管哮喘的发病机制中，免疫失衡和炎症介质的过度表达起着重要作用。相关研究表明[5]，肿瘤坏死因子，白细胞介素，干扰等都参与了儿童支气管哮喘的发病机制。细胞免疫失衡与炎症介质的过度释放密切相关。 T淋巴细胞亚群中Th1和Th2的表达可以在疾病过程中释放机体的免疫能力和炎症介质的释放，这与支气管哮喘的发病机制密切相关[6]。 Th1细胞主要分泌IL-2、IFN-γ等，参与迟发型超敏反应炎症和细胞免疫的发展。

Th2细胞主要分泌IL-4、IL-5、IL-10、IL-13等，与体液免疫有关[7]。在支气管哮喘患儿中，IL-4和IL-10的表达上调，而IFN-γ的表达下降。 Th1细胞在激活和拮抗后可释放IFN-γ，并拮抗免疫球蛋白如IgE引起的过敏反应。释放炎性细胞因子，如IL-4和IL-10，引发IgE介导的免疫反应并形成一系列炎症反应[8-9]。因此机体的免疫状态与T淋巴细胞亚群（CD3+、CD4+、CD8+及CD4/CD8等）呈相关性，对T细胞亚群的鉴别有重要意义。

该课题应用温阳化痰贴（炒介子、细辛、百部、白芷、醋五味子、冰片）治疗小儿哮喘，在三伏天开始，有利于通经、逐痰、扶正祛邪。贴敷治疗方法能够调节机体免疫，促使丘脑-垂体-肾上腺轴的内分泌功能改善，使机体的抗病能力得到提高。临床结果证实，治疗组细胞因子变化及免疫指标改善情况均优于对照组（P＜0.05），治疗后的IFN-γ是（48.79±7.98）ng/L，IL-4是（38.45±3.56）ng/L与肖小芹等[10]研究显示，咳喘穴位敷贴对哮喘大鼠Th1/Th2免疫平衡也有改善作用，治疗后的IFN-γ是（51.11±4.21）ng/L，而IL-4是（32.21±6.21）ng/L的结果相似。

综上所述，应用温阳化痰贴外治法对支气管哮喘Th1/Th2免疫调节有明显优势。