一种国产全自动输血相容性检测仪器的性能验证分析研究

何欣，刘思琪，陈麟凤

首都医科大学附属北京世纪坛医院 输血科，北京 100038

引言

血型检测和交叉配血是输血相容性检测中的重要实验，结果准确性是临床用血安全的保障[1-4]。而检测仪器、试剂国产化，降低检测耗占比也是医院发展的趋势之一[5]。目前微柱凝胶法是全国各三甲医院进行血型鉴定和交叉配血的主要检测方法，实际工作中进口全自动分析仪已引入国内十几年[6-9]。为了满足本院临床备血检测和大量血型初筛及复检的需要，提高临床输血的安全性、高效性、精准性，同时实现仪器国产化的目的，本科室引进力博全自动血型配血仪，开展血型检测，Rh分型和交叉配血。根据实验室管理要求设计全自动血型配血仪的性能验证计划，根据力博全自动血型分析仪（AISEN120）的功能组成，对本实验室的ABO正定型、ABO反定型、Rh(D)血型、交叉配血等4个项目与已有的WADiana仪器进行符合性、重复性验证，以证实该检测体系是否能够满足临床工作的要求。此外还对其软件连接，结果的通讯传输进行升级，以减少人为差错。本研究首次将力博全自动血型配血仪器投入使用过程中的问题发现、处理流程进行报告，为引入或使用相关仪器的医疗机构输血相容性检测实验室提供新仪器性能验证方法，同时也为仪器生产厂家优化设备功能提供参考。

1 资料与方法

1.1 研究对象

临床符合输血适应症患者，由医护人员抽取患者新鲜抗凝全血送至输血科，审核后进行输血相容性检测实验。本研究共进行了300例血型和100例交叉配血的比对实验。根据《临床输血技术规范》要求，每位患者抽取4 mL EDTA抗凝血。标本排除条件：① EDTA抗凝管，采血量低于4 mL，离心后的标本，血浆、红细胞高度低于1.0 cm；② 存在乳糜血、溶血、凝块等有可能影响结果的标本；③ 因病人本身疾病因素血型和交叉配血有问题而无特殊抗体的患者；④ 怀疑细菌污染的标本。

1.2 仪器与试剂

1.2.1 仪器

WaDaina全自动配血仪（Diagnostic Grifols，S.A.，西班牙）和力博医药专用机（AISEN120）（烟台艾德康生物科技有限公司，中国）

1.2.2 试剂

两台仪器均使用配套试剂耗材。

WADiana：DaniaDG Gel Sol血型分析用稀释液，0.8%人ABO血型反定型红细胞试剂，0.8%红细胞抗体筛选细胞，抗人球蛋白检测卡（微住凝胶），ABO-Rh血型检测卡（微柱凝胶），洗液A和洗液B。

AISEN120：2%～4% ABO血型定型红细胞试剂，2%～4%不规则抗体筛选红细胞试剂，血型分析用稀释液，Rh血型分型检测卡（柱凝集法），抗人球蛋白（抗IgG+C3d）检测卡，ABO/Rh血型定型检测试剂卡（微柱凝胶法）、一次性吸头，96深孔板。血型鉴定和抗体筛查质控品。

1.3 试验方法

两台仪器每日开机后分别检测质控品，进行室内质量控制。

1.3.1 WADiana 检测

血型分析用稀释液，人ABO血型反定型用红细胞试剂盒，红细胞抗体筛选细胞室温放置30 min，DG Ge Coombs卡抗人球蛋白检测卡，DG Gel ABO-Rh血型检测卡（微柱凝胶法）离心后使用。按照仪器操作要求进行血型，抗体筛查和交叉配血试验。

1.3.2 AISEN120检测

ABO血型定型红细胞试剂，使用前进行稀释，即1 mL细胞+2 mL生理盐水配制终浓度为1%的细胞溶液。上机前再次检查标本量符合要求，无乳糜溶血和凝集，每份标本分别在两台仪器进行检测。

1.3.3 手工试管法

本研究仅限实验室内结果的两种仪器比对，血型结果不符情况均以手工试管法复检作为判断标准。试管法血型检测按照《实用血液免疫学血型理论和实验技术》相关操作进行。

1.4 双向传输设置

艾德康全自动血库系统的配套软件与我院检验之星和佰利亚软件相连接，设置两个软件的双向功能。即：计算机与仪器之间的双向通信，可通过条码识别和项目核收，既可以提高工作效率，也可以降低人工错误率。但是这些仪器和软件来自不同的厂商，存在着数据传输方式和数据格式不同的问题，所以本研究的双向设置依托两个软件共同完成。在使用双向功能时只可以开一个软件识别项目，实验完成传输时两个软件可以同时使用。

2 结果

2.1 血型比对结果

连续1周检测患者和献血员血型，累计检测300例标本。WADiana和AISEN120结果比对结果，见表1。

表1 Diana和AISEN120血型检测结果比对

将AISEN120仪器与Diana结果不符标本进行试管法复查并分析原因，结果显示照相判读、血型卡和反定标本干扰所占比例最大，分别为57%，24%和12%，其他原因如表2所示。

表2 AISEN120“问题”样本血型不符原因分析

2.2 交叉配血结果对比

连续1周对两台仪器进行交叉配血实验比对，共检测样本100例，结果及分析如表3～4所示。

表3 Diana和力博AISEN120交叉配血结果比对

表4 AISEN120与WADiana交叉配血不符原因分析

2.3 问题处理

两台仪器都是微柱凝胶方法，过仪器比对试验，本研究认为导致AISEN120仪器临床实验与WADiana不符的原因主要集中在照相判读、强度判读标准、血清加样量等几个方面，具体分析如下：① 照相判读，判读仪过于敏感，肉眼观测不到也会报出“？”或者“阳性”；② 血清加样量，标本反定的反应凝集强度达不到判读标准。检查仪器血清和红细胞的加样量，发现红细胞和血清的加样量均为50 μL；③ 试剂原因，用低离子配制反定细胞会加强反应体系，结果会有溶血导致判读结果为“？”；④ 耗材原因，试剂卡中有气泡和保养液分布不均；⑤ 纤维蛋白，凝块，标本中有纤维蛋白的影响，或者有凝集的样本加样枪吸走凝块影响结果；⑥ 抗体减弱，患者自身原因导致血型反定凝集强度偏弱。

分析原因后处理如下：① 协调仪器工程师根据实际情况调整判读系统；② 检查各个项目的实验参数，按照仪器要求参数设置了实验相对应的加样量（红细胞悬液50 μL+血清25 μL）；③ 使用生理盐水稀释国产反定试剂红细胞；④ 在使用前，实验室工作人员检查ABO血型卡和抗人球蛋白卡，离心后方可使用；⑤ 标本离心前和上机前，确认是否含凝块和纤维蛋白丝，避免影响仪器的判读造成的假阳性。

调整仪器和实验干扰因素后，本实验室分别进行了50例血型检测和交叉配血实验，两台仪器检测结果符合率分别为99%和100%，具体情况见表5～6。

表5 调整后血型鉴定比对结果

表6 调整后交叉配血比对结果

交叉配血验证50例标本，主次侧不一致5例均为次侧不一致，次侧不一致是因为两台仪器对凝集强度判读的原理不同造成，但并不影响对配血实验结果的判断及临床用血安全，故认为调整后AISEN120配血结果与WADiana相符率为100%。

3 讨论

西班牙Diagnostic Grifols，S.A.公司的WADiana全自动配血仪因操作方便快捷、结果准确，作为输血相容性检测仪器在不同级别医疗机构输血科广泛使用[10]。但由于进口仪器，尤其是试剂细胞在运输时间和检测成本等方面的限制，医疗机构选择引入适用于本机构日常工作需要的性能稳定的国产仪器和试剂，成为亟需解决的问题[11-13]。但新仪器引进投入临床使用过程中通常会遇到各种问题，本研究分类记录下遇到的问题，并分析判断问题是否可控以及如何对结果进行质量控制。

在本研究中，发现仪器照相判读是影响实验结果准确性的最大问题（分别占血型鉴定、交叉配血与WADiana不一致结果的57%和25.6%）。WADiana的照相系统判读仪组成包括透镜、透镜光源，卡支架、卡/微板照相机，卡/微板光源，检测器，玻璃微板支架，图像卡。原理如下：通过拍照反应图谱保存到计算机并自动判读。判读的敏感可设定，判读在胶卡中的免疫血清，凝血反应，通过条形码识别胶卡。AISEN120照相系统结果判读原理与其不同，为底部扫描成像，CCD数码相机记录反映图像，通过调节透镜光源读取图像体积面积反映凝集程度和敏感度，这可能导致凝集强度相似，而结果判读不一致的问题。与AISEN120工程师沟通后精准调节仪器照相系统解决了这一问题。

由于仪器报出的结果中“？”较多，与实验室现有成熟进口仪器相比，使得检测结果一致性较低。分析结果表明仪器报出的结果中“？”的原因有两种，一种就是判读不出结果，判读仪出现问题，另一种是出现溶血现象，导致结果判读“？”，手工复检和WADiana均未发生溶血，分别从仪器实验参数、加样量、试剂等方面进行分析。由于试管法鉴定血型中使用玻璃（试剂瓶中的吸头）或塑料移液器（塑料吸管），均未经校准而难以精确加样。加样量可能会随着施加到吸头的压力或滴管/移液器的加样角度改变而发生根本变化。全自动检测系统要求血清与细胞比例在规定的范围内。如果使用不正确的试剂加样的方式，结果不可靠。例如，对于使用低离子强度盐水的测试系统，血清与细胞比例至少应为40：1（血清体积×100/红细胞体积×浓度）。本研究发现，AISEN120全自动检测体系中使用低离子液配制反定细胞，并且血浆加样量为50 μL（仪器出厂默认体积），有加强反应强度效应，导致溶血，从而影响了判读结果。随后本研究改为使用生理盐水稀释国产反定细胞，将血清加样量调整25 μL，血型正反定结果不一致问题得以解决。

实验用耗材问题分析显示：试剂与耗材在运输过程中，会有不可避免的磕碰，凝胶卡就会产生气泡与保养液的散落，甚至保养液溅落在外。通过一段时间的观察，发现实验血型和抗人球卡确实会有干裂和气泡的问题，导致结果假阳性，提示工作人员在实验中必须仔细的去检查耗材质量，不仅检查实验耗材的有效期，还要检查外观是否完整，凝胶卡保养液是否足量，是否存在干裂，是否有气泡。通过离心卡片后，这些问题是可以避免的。

另外，本研究增设了仪器的双向功能，由机器来识别所需实验项目，双向功能不仅可以识别项目，还可以核收条码信息所需要的实验项目，减少人工差错，降低成本浪费[14-15]。在使用过程中，AISEN120全自动血型配血仪可以快速进行患者血型鉴定和交叉配血试验，并可以准确进行Rh血型分型，实现患者精准输血。具有如下：① 检测速度快，每小时360T测试，两针加样通道，双离心机；② 国产配套试剂成本低，降低我科耗占比；③ 可以同时进行大量标本的检测，一个标本可同时运行多个实验项目（抗体筛查，血型检测，Rh分型检测，DAT的检测，交叉配血试验）；④ 样本可连续装载，可同时装载120（24×5）个样本，12（2×6）瓶试剂，96张微柱凝胶卡，采样一次性加样吸头。只要有空余样本装载架，可随时加入样本进行各项实验；⑤ 可插入急诊样本；⑥ 保养操作简便。

综上所述，经过实际应用比对、查找问题、分析原因和优化检测关键点，本科室AISEN120全自动血型配血仪从仪器性能的稳定性，与进口仪器比对的重复性及每日检验结果的可靠性、准确性均得到了切实改进，可以替代进口仪器与试剂，保障临床用血安全。本研究中的新仪器性能验方法和问题处理流程能有效验证全自动血型分析系统的性能是否满足临床需求，可作为同类检测系统的性能验证和改进操作流程。