传染性鲑鱼贫血症研究进展

张丽文 丁钰洁 张秀梅 徐惠章 魏进 陈坤

摘要：通过对传染性鲑鱼贫血症研究进展进行综述，介绍了传染性鲑鱼贫血症病理学、传播途径、流行情况、检测方法等，并提出在实际中应采取的预防措施，为传染性鲑鱼贫血症的进一步研究提供参考。

关键词：传染性鲑鱼贫血症病毒;传染性鲑鱼贫血症;检测方法;预防措施

中图分类号：S94      文献标识码：A

传染性鲑鱼贫血症（Infectious Salmon Anaemia，ISA），是一种由传染性鲑鱼贫血症病毒（Infectious Salmon Anaemia Virus，ISAV）感染大西洋鲑鱼等鱼类并可能引起其死亡的病毒性传染病。该疾病于1984年在挪威首次被发现，随后在1996年加拿大的新布朗斯威克省、1998年苏格兰、2000年法罗群岛、2001年智利等地相继爆发。该病淘汰了数百万条鲑鱼，并给养殖户造成了极大的损失。

1  传染性鲑鱼贫血症

1.1  病理学

ISAV作为该病的病原，是正粘病毒科（Orthomyxoviridae）传染性鲑鱼贫血病毒属的成员。该病毒直径100～130 nm，由8条负链RNA片段组成，编码10种功能蛋白，其中编码血凝素酯酶（Hemaglutinin esterasc，HE）的基因节段6和编码神经氨酸酶（Neuraminidase，NA）的基因节段8常用于不同ISAV毒株的分类[1]。根据ISAV基因节段6高度多态性区域（Highly polymorphic region，HPR）的缺失情况，可将ISAV分为HPR缺失型和HPR非缺失型两类。根据地域位置分布，ISAV主要可分为欧洲型（基因型Ⅰ）和北美型（基因型Ⅱ）。

1.2  传播途径

ISAV传播途径有多种，一是可以通过鱼与鱼之间血液、尿液、排泄物和体液等的密切接触传播。通过在鲑鱼体内接种该病毒研究发现，血液和组织中存在ISAV病毒，被感染的鱼的残留组织具有传染性，ISAV可以在鲑鱼繁殖（5℃～15℃）的寒冷温度下更好地复制，在15℃下放置10天或在4℃下放置14天仍保持感染性;当温度高于25℃时，不会复制。二是可以通过间接的方式进行传播，比如养殖环境、中间媒介、加工过程等。如果鲑鱼接触到存在ISAV病毒的水域，那么通过被感染的鱼会将该病毒携带到新的水域。同时可以通过一些中间媒介传播，比如海虱等，这些寄生虫可以增加鱼类的易感性。在网箱中养殖的鲑鱼，并非与其他野生物种完全隔离，可以与其他小到穿网的动物接触，野生鱼可以充当中间媒介传播该病毒。在高密度的养殖区域，对鲑鱼进行屠宰加工，如果不对宰割设备和养殖网箱进行全面彻底的清洁消毒，携带的ISAV病毒可以感染这些区域，并将病毒传播到另一个新的区域，最终造成该疾病的爆发。

2  传染性鲑鱼贫血症流行情况与检测方法

2.1  流行情况

传染性鲑鱼贫血症可能在一年四季随时发生，初夏和秋季是死亡率的高峰季节。主要在海水鱼或接触到海水的鱼中发现。疾病通常开始于一或两个网塘，爆发开始时，可能只有几条鱼受到影响，最初的每日死亡率通常为0.5%～1%。如果病毒的传播不受控制，死亡率会逐渐增加或者突然增加，累计死亡率从可忽略不计到中等或严重，高毒力的毒株可以在几个月内杀死90%的鱼类。多种鱼类对该病易感，包括大西洋鲑鱼、银大马哈鱼、褐鳟、虹鳟等。

2.2  检测方法

首先通过临床症状做初步诊断，然后通过细胞分离、免疫学与分子生物学等实验手段进一步检查，以判断鱼类是否感染传染性鲑鱼贫血症。

2.2.1  临床症状

该病发病初期出现致死性全身临床症状，贫血、腹水、肝脾肿大变黑，腹膜上出现瘀斑，眼前方可见出血。

2.2.2  实验检测方法

目前ISAV的主要检测方法是病毒细胞分离并鉴定、间接免疫荧光检测（Indirect immunoinfluore-scene assay， IFA）、RT-PCR技术等。ISAV能够从SHK-1（大西洋鲑头肾）或ASK（大西洋鲑头肾白细胞）细胞系或其他易感系分离出来，但细胞分离鉴定费时费力，分离率低，有时实验结果并不准确，难以满足紧急情况下应急反应的要求。RT-PCR、Real-time RT-PCR是目前实验室应用的主要检测方法。杜雄伟[2]等建立了实时荧光RT-PCR探针检测方法，针对ISAV基因序列保守区域设计一对特异性引物和一条特异性探针，进行特异性、敏感性、重复性检测，检出ISAV最小拷贝数为13拷贝。该方法操作简单，花费时间短。史秀杰[3]等建立ISAV实时荧光环介导等温扩增检测方法，根据ISAV的基因保守序列，利用环介导等温扩增LAMP（Loop-mediated isothermal amplification）Designer软件设计了6条引物，采用新型的环介导等温扩增设备进行扩增和检测，分析所建立方法的特异性和灵敏度。研究表明，最适反应温度为64℃，反应10min可观察到明显的扩增。该检测方法比常规RT-PCR灵敏度高100倍，适用于无症状的ISA监测或者对可疑鱼组织的检测。同时实验能对整个扩增过程进行实时监测，可防止由于开盖跑电泳或加染料而导致的污染。徐淑菲[4]等建立SYBR-Green I实时荧光PCR方法，根据ISAV Y10404的序列合成部分基因片段，将其插入到T载体中，构建阳性质控品，并设计合成一对特异性引物，利用阳性质控品构建该检测方法，进行特异性和敏感性分析，该方法能够特异地检测出ISAV，灵敏度比传统RT-PCR高1000倍，且简单、快速。

3  传染性鲑鱼贫血症预防措施

3.1  控制

良好的管理和生物安全措施可以减少感染该病的风险。控制船舶、鱼类、物资和人员的流动，随时清洁船只、设备和工具。定期从网箱中清除死鱼，加强水质管理，每天排污、换水，正确处理废物、污水。鲑鱼养殖场应保持一定距离，禁止从发病区运出鱼和卵，一旦发病，将全场鱼销毁。

3.2  消毒

鲑鱼养殖常用工具消毒十分重要，病鱼用过的工具（如网箱等）不经过消毒而使用就会把病毒带入新的鱼池，造成病毒的再次传播。可用多种消毒剂将ISAV灭活，例如次氯酸钠，氯胺T，二氧化氯，碘伏，氢氧化钠，甲酸，甲醛和过氧一硫酸钾（Virkon?S）（2%的 溶液/10分钟），然后用水冲洗。同时需要对鱼池进行消毒，用一定浓度的生石灰或者漂白粉对鱼池进行消毒，以杀死病菌和有害微生物[5]。

4   结语

传染性鲑鱼贫血症病毒是一种传播较慢的弱性病毒，该病毒多方面与流感病毒类似。近年来，我国从国外进口的冰冻鱼类种类越来越多，ISAV病毒可存在于鲑鱼的鳃、货物包装材料、被接触的冰等中，成为该病毒传入我国的潜在危险因素。本文通过对传染性鲑鱼贫血症的病因学、传播途径、流行情况、检测方法等研究进展的综述，让大众对该疾病有更深入的了解和掌握预防措施，并为进一步的研究提供参考。

参考文献

[1]Tello M， Vergara F， Spencer E. Genomic adaptation of the ISA virus to Salmo salar codon usage [J]. Viral J. 2013，10：223.

[2]杜雄伟，李叶，庞艳华. ISAV实时荧光RT-PCR检测方法的建立.食品与发酵工业，2013，39（6）：205-207.

[3]史秀杰，于力，王津津，等.传染性鲑鱼贫血症病毒实时荧光环介导等温扩增检测方法的建立.[J].渔业科学进展. 2014，4：51-58.

[4]徐淑菲，孔繁德，高隆英，等. SYBR-Green I实时荧光PCR 检测传染性鲤魚贫血病[J].检验检疫科学，2007，117 （5） 27-30.

[5]田洁莉，杨成辉.几种鲑鳟鱼类养殖过程中的病害综合防治.[J]黑龙江水产. 2004，1：30-32.