我国生殖检验现状的初步调查*

伍细言，黄玲，彭新华，陆金春（.湖南省妇幼保健院生殖医学中心，长沙40008；.湖南省郴州市第一人民医院生殖医学中心，湖南郴州4000；.东南大学附属中大医院生殖医学中心，南京007）

生殖医学是现代医学中研究人类生殖健康的重要学科分支，关系到每一个家庭的幸福。从第一代试管婴儿（1978年全球首例试管婴儿在英国诞生），到第二代试管婴儿，即卵细胞质内单精子注射（intracytoplasmic sperm injection，ICSI），再到第三代试管婴儿，即胚胎植入前遗传学检测（preimplantation genetic testing，PGT），生殖医学经历了飞速发展。截至2020年6月30日，全国经批准开展人类辅助生殖技术的医疗机构达523家［1］。生殖医学的发展离不开生殖相关检验技术的支持。检验（examination）是以确定一个特性的值或特征为目的的一组操作［2］。生殖检验作为生殖医学与检验医学的交叉学科，为不孕不育患者的诊断和治疗提供了重要依据。本研究利用中国性学会生殖检验分会成立的机会，对开展生殖检验工作的实验室进行了初步调查。

1 资料与方法

1.1 调查表的设计 根据对我国生殖检验现状的了解，参考《人类精液检查与处理实验室手册》（第5版）［3］、《生殖医学实验室诊断》［4］，结合笔者自身经历，通过问卷星的形式，设计了“2020年全国生殖检验现状调查问卷”。该问卷包括6大方面140个问题，内容涉及实验室一般信息、精液常规分析与精子形态学分析的方法及质控、精液特殊检查及其他检验项目的方法及质控、实验室管理培训与科研等多个维度。

1.2 调查问卷的发放与填写 调查问卷通过生殖检验分会微信群，以问卷星二维码的形式发放。在填表说明中强调认真填写该问卷的重要性，要求所填写内容真实可靠，并建议被调查对象先浏览全部问卷，收集好所需要的数据后再一次性填写。截至统计分析时共收到75份调查表。

1.3 调查表的分析 对回收的调查表利用问卷星自带的统计功能对选择项进行分析；对数值型内容统计百分率并分组统计描述；对文本类内容进行分类描述。

2 结果

2.1 接受调查的实验室的一般信息 接受调查的实验室来自全国28个省、自治区和直辖市，共75家，具有一定的代表性。其所在医院按等级分：三级医院占86.67%（65/75）、二级医院占4%（3/75）、一级医院占4%（3/75）、其他包括计划生育科学技术研究院、健康服务中心等占5.33%（4/75）。按医院性质分：公立医院占94.67%（71/75）、私立医院占5.33%（4/75）。按医院类型分：综合性医院占57.33%（43/75）、妇幼保健院占33.33%（25/75）、生殖专科医院占5.33%（4/75）、其他占4%（3/75）。对问卷填写者进行分析，其中正高占10.67%（8/75），副高占41.33%（31/75），中级占42.67%（32/75），初级占5.33%（4/75）；博士占14.67%（11/75），硕士占50.67%（38/75），本科占34.67%（26/75）；男性占65.33%（49/75），女性占34.67%（26/75）；31～40岁占50.67%（38/75），41～50岁占41.33%（31/75），51～60岁占8%（6/75）。

2.2 精液常规分析和精子形态学分析 在被调查的75家实验室中，精液收集及常规分析方法统计结果见表1；精子形态学评估方法统计结果见表2；精液常规分析和形态学分析室内质控情况见表3；精液常规分析和形态学分析室间质控情况见表4。

表1 精液收集及常规分析方法统计结果

表2 精子形态学评估方法统计结果

表3 精液常规分析和形态学分析室内质控情况

表4 精液常规分析和形态学分析室间质评情况

2.3 精液特殊检查及其他检验项目 在被调查的75家实验室中，精液特殊检查项目统计分析结果见表5；其他独立开展的检验项目及质控情况见表6。

表5 精液特殊检查项目统计分析结果

续表5

3 讨论

本次调查基于中国性学会生殖检验分会成立，调查问卷由全国28个省推荐的生殖检验专业委员会委员所填写。所调查对象具有高学历、高职称、高年资等特点，具有一定的代表性和权威性。因此，该调查结果可信，能基本反映目前我国生殖检验实验室的真实状况，可为生殖检验的发展决策提供依据。

调查结果显示，精液分析的方法和报告方式与《人类精液检查与处理实验室手册》（第5版）推荐的方法尚有许多不一致。例如，关于禁欲时间，9.33%（7/75）的实验室严格要求禁欲3～5 d。当手淫法取精困难时，40%（30/75）的实验室建议体外射精方式获取精液，而该手册并不推荐体外射精，因为含有大量精子的精液初始部分可能遗失，且阴道内的酸性环境会对精子活力造成不利影响［3］。对于精子计数板的选择，使用Makler计数板（10μL）、一次性计数板10μL和20μL的实验室比例分别是50.67%、25.33%、10.67%。绝大多数实验室选择10μL Makler计数板，而《人类精液检查与处理实验室手册》（第5版）推荐20μL精子计数板计数精子活力的原因是涂片深度小于20μL会限制精子的旋转运动［3］。但也有研究显示，随着精子计数池深度的增加，前向运动精子比例逐渐降低，精子在显微镜下不同聚焦平面可呈现精子虚影［5］，并且计数的精子数也会加倍，从而导致精液需要稀释，增加计数误差和计数难度；提示精子计数板深度仍需统一。约92%（69/75）的实验室采用CASA法进行精液常规检测，而《人类精液检查与处理实验室手册》（第5版）推荐使用改良Neubauer血细胞计数板计数稀释后的精子［3］，该方法步骤繁琐，目前生殖实验室采用较少。采用相差显微镜的CASA分析精子浓度和活力的优点是：样本无需稀释、检测方便、速度快、重复性好、参数多［6］，更适合我国人口多、检测量大的国情，缺点是不同厂家的CASA检测数据差异大，没有统一标准，因而非常有必要制定相关的中国标准、指南或专家共识。

表6 其他独立开展的检验项目及质控情况

对于精子形态检查染色方法，以Diff-Quik染色法和改良巴氏染色法为主，分别占54.67%（41/75）和37.33%（28/75），Diff-Quik法和改良巴氏法均为《人类精液检查与处理实验室手册》（第5版）所推荐［3］。王彦芳等［7］比较Diff-Quik染色法与改良巴氏染色法对精子形态的染色效果，结果表明2种方法对正常形态精子百分率的评估具有一致性。与92%（69/75）的实验室采用CASA检测精液常规不同，对于精子形态判断方法，80%（60/75）的实验室采用显微镜人工阅片的方法进行，18.67%（14/75）通过CASA采集图片初步分析+人工复核的方法进行，只有1.33%（1/75）完全依赖CASA全自动分析。各实验室人员接受过精子形态学判断标准培训比例为93.33%（70/75），并且经常对精子形态判断标准进行探讨并趋于统一的比例为89.33%（67/75），这与CASA通过固定的精子形态学参数进行精子形态识别的准确率尚未达到临床要求有关。目前为了保证结果的准确性，只能通过严格培训，并就标准精子形态的判断进行探讨才能使其趋于统一。

精液白细胞检测方法以过氧化物酶染色后计数为主，占比54.67%（41/75），然而还有24%（18/75）的实验室通过直接涂片观察，该方法并不能分辨是精液中的白细胞还是生精细胞，需要进行方法学的改进；能进行精液脱落细胞（生精细胞）检查的实验室的比例是12%（9/75），与10年前陆金春等［8］的调查结果13.9%（15/108）接近，所用的染色方法同样很不统一，包括Diff-Quik染色、HE染色、瑞-吉染色、改良巴氏染色等。

开展精液常规和精子形态学检测室内质控的实验室为72%（54/75），而参加室间质评的实验室只有38.67%（29/75）。目前我国一些学者在探索精液分析室间质评的方法和模式，卢文红等［9］对来自全国23个实验室的技术人员进行理论与实际操作培训后，使用冷冻的混合精液、伊红-苯胺黑染色并封片的玻片、未经染色固定的形态学涂片，分别进行了精子浓度、精子存活率和精子形态学的室间质评。马明等［10］用液氮冻存精液的方法自制室内质控品，来监测CASA检测精子浓度及精子运动参数，并认为该法可行。周芳等［11］通过制作好的精子形态学玻片进行四省一市的室间质评，显示2个质控品的CV均在15%以上。盛慧强等［12］通过精子图像进行精子形态学的质量控制。由于精子是活细胞，对质控样本的保存及运输要求较高，目前常以自制的冻存精液和乳胶微球来做精子浓度质控，但精液来源有限，且反复冻融后精子易破坏和产生凝集，而乳胶微球与精子形态差异较大；精子形态学分析具有一定主观性，缺乏客观、统一的评判标准，一些质控方法并不能控制整个检测过程。

在本次调查中，绝大部分实验室对生殖检验专业的发展提出了很好的建议，包括：建议学会每年组织一次学术交流活动或一次培训活动、合作开展生殖检验实验室相关科研、组织实验室人员到先进的生殖检验实验室参观学习等。生殖检验作为生殖医学与检验医学的交叉学科，其范畴远比男科检验更广。目前，大部分实验室还局限在精液常规分析，其他项目大部分分散在多个地点执行，这不利于生殖检验形成统一的认识，也不利于生殖检验的学科发展。为提高生殖检验实验室结果的准确性，在规范管理、操作培训、质量控制、标准化等方面需进一步提升。