抗肿瘤中药青龙衣化学成分研究

付起凤,宋红娟,马丹娜,刘艳,于海龙,周媛媛*

(1.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨 150040；2.哈尔滨市食品药品检验检测中心，黑龙江 哈尔滨 150525)

核桃楸(JuglansmandshuricaMaxim)是胡桃科胡桃属落叶乔木，作为一种名贵树种，仅分布在亚洲东北部地区[1]。青龙衣为胡桃科植物核桃楸(JuglansmandshuricaMaxim)的未成熟果实的外果皮，该药最初记载于《开宝本草》，从《山东中草药手册》称之为“青龙衣”后，现一直延用此名称。味辛、苦，性涩、平，具有清热解毒、祛风疗癣、止痛止痢等功效，作为中草药应用已有千年的历史。现代药理研究表明青龙衣可以治疗白癜风、顽癣等皮肤疾患，具有显著抗肿瘤效果，尤其对胃癌、肝癌临床已取得了比较满意的疗效。目前已报道青龙衣主要化学成分类型有二芳基庚烷、萘醌、黄酮及苯丙素类等，后续又发现了三萜类成分。本实验对青龙衣中三萜类成分开展相关研究，分离得到14个化合物，分别鉴定为2α-羟基齐墩果酸(2α-hydroxy oleanolic acid,1)，2α,23-二羟基齐墩果酸(2α,23-dihydroxy oleanolic acid,2)，齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖(oleanolic acid-28-O-β-D-glucopyranoside,3)，阿江榄仁酸(arjunolic acid,4)，青钱柳酸A(cyclocaric acid A,5)，青钱柳酸B(cyclocaric acid B,6)，蒲公英萜醇(taraxerol,7)，2α-羟基熊果酸(2α-hydroxy ursolic acid, 8)，23-羟基熊果酸(23-hydroxy ursolic acid,9)，2α,3α,19α-三羟基熊果酸(2α,3α,19α-trihydroxy ursolic acid,10)，2α,3β,19α-三羟基熊果酸-12-烯-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(2α,3β,19α-trihydroxy urs-12-en-28-O-β-D-glucopyranoside, 11)，青钱柳苷I(cyclocarioside I, 2)，木栓酮(friedelin,13)，3-羟基-30-去甲基-20-酮基-28-羽扇豆酸(3-hydroxy-30-nor-20-oxo-28-lupanoic acid,14)。其中，化合物3～7、11～14首次从青龙衣中分离得到。

1 仪器与材料

AV-400型超导核磁共振仪(Bruker公司)；Q-TOF(ESI)高分辨质谱仪(Waters公司)；柱色谱硅胶(200～300目)和薄层色谱硅胶(青岛海洋化工厂)；其余均为分析纯。

青龙衣药材于2017年7月采自吉林省长白山地区，经黑龙江中医药大学药学院王振月教授鉴定为胡桃科植物核桃楸(JuglansMandshuricaMaxim)的未成熟外果皮，标本(20170715)保存于黑龙江中医药大学中药化学教研室。

2 提取与分离

将阴干的青龙衣药材(5.0 kg)适当粉碎，以95%乙醇回流提取3次，每次1 h，减压浓缩得到浸膏(695.5 g)。浸膏加适量蒸馏水分散后，依次用二氯甲烷、乙酸乙酯及水饱和的正丁醇进行萃取，萃取物减压浓缩，得各萃取部位。取二氯甲烷萃取部位270.2 g，乙酸乙酯萃取部位180.6 g，经硅胶柱色谱分离，二氯甲烷-甲醇系统梯度洗脱、反复硅胶柱层析及重结晶等方法共分离纯化得到14个化合物:1～14。

3 结构鉴定

化合物1：白色粉末(MeOH)。ESI-MSm/z：473 [M+H]+, 推测分子量为472，分子式为C30H48O4。1H-NMR谱的全部信号进行了相应归属(见表1)；13C-NMR谱的全部信号进行了相应归属(见表2)。与文献[2]对照，故鉴定化合物1为2α-羟基齐墩果酸。

化合物2：无色针晶(MeOH)。ESI-MSm/z：489 [M+H]+, 推测分子量为488，分子式为C30H48O5。1H-NMR谱的全部信号进行了相应归属(见表1)；13C-NMR谱的全部信号进行了相应归属(见表2)。与文献[3]对照，故鉴定化合物2为2α,23-二羟基齐墩果酸。

化合物3：白色粉末(MeOH)。ESI-MSm/z：641 [M+Na]+, 推测分子量为618，分子式为C36H58O8。1H-NMR谱的全部信号进行了相应归属(见表1)；13C-NMR谱的全部信号进行了相应归属(见表2)。与文献[4]对照，故鉴定化合物3为齐墩果酸-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物4：白色粉末(MeOH)。ESI-MSm/z：489[M+H]+, 推测分子量为488，分子式为C30H48O5。1H-NMR谱的全部信号进行了相应归属(见表1)；13C-NMR谱的全部信号进行了相应归属(见表2)。与文献[5]对照，故鉴定化合物4为阿江榄仁酸。

化合物5：白色结晶性粉末(MeOH)。ESI-MSm/z：455 [M+H]+, 相对分子质量为454，分子式为C30H46O3。1H-NMR谱的全部信号进行了相应归属(见表1)；13C-NMR谱的全部信号进行了相应归属(见表2)。与文献[6]对照，故鉴定化合物5为青钱柳酸A。

化合物6：无色粉末(MeOH)。ESI-MSm/z：487 [M+H]+, 推测分子量为486，分子式为C30H46O5。1H-NMR谱的全部信号进行了相应归属(见表1)；13C-NMR谱的全部信号进行了相应归属(见表2)。与文献[7]对照，故鉴定化合物6为青钱柳酸B。

化合物7：无色针晶(MeOH)。ESI-MSm/z：427 [M+H]+, 推测分子量为426，分子式为C30H50O。1H-NMR谱的全部信号进行了相应归属(见表1)；13C-NMR谱的全部信号进行了相应归属(见表2)。与文献[8]对照，故鉴定化合物7为蒲公英萜醇。

表2 化合物1～7的13C-NMR数据(C5D5N)

表1 化合物1～7的1H-NMR数据(C5D5N)

化合物8：白色粉末(MeOH)。ESI-MSm/z：473 [M+H]+, 推测分子量为472，分子式为C30H48O4。1H-NMR谱的全部信号进行了相应归属(见表3)；13C-NMR谱的全部信号进行了相应归属(见表4)。与文献[3]对照，故鉴定该化合物8为2α-羟基熊果酸。

化合物9：白色粉末(MeOH)。ESI-MSm/z：473 [M+H]+, 推测分子量为472，分子式为C30H48O4。1H-NMR谱的全部信号进行了相应归属(见表3)；13C-NMR谱的全部信号进行了相应归属(见表4)。与文献[3]对照，故鉴定化合物9为23-羟基熊果酸。

化合物10：白色粉末(MeOH)。ESI-MSm/z：489 [M+H]+, 推测分子量为488，分子式为C30H48O5。1H-NMR谱的全部信号进行了相应归属(见表3)；13C-NMR谱的全部信号进行了相应归属(见表4)。与文献[9]对照，故确定化合物10为2α,3α,19α-三羟基熊果酸。

化合物11：白色粉末(MeOH)。ESI-MSm/z：683 [M+Na]+, 推测分子量为664，分子式为C36H64O9。1H-NMR谱的全部信号进行了相应归属(见表3)；13C-NMR谱的全部信号进行了相应归属(见表4)。与文献[10]对照，故鉴定化合物11为2α,3β,19α-三羟基熊果酸-12-烯-28-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物12：白色粉末状结晶(MeOH)。ESI-MSm/z：777 [M+Na]+, 推测分子量为754，分子式为C41H70O12。1H-NMR谱的全部信号进行了相应归属(见表3)；13C-NMR谱的全部信号进行了相应归属(见表4)。与文献[11]对照，故鉴定化合物12为青钱柳苷I。

化合物13：白色粉末(MeOH)。ESI-MSm/z：427 [M+H]+, 推测分子量为426，分子式为C30H50O。1H-NMR谱的全部信号进行了相应归属(见表3)；13C-NMR谱的全部信号进行了相应归属(见表4)。与文献[12]对照，故鉴定化合物13为木栓酮。

化合物14：白色粉末(MeOH)。ESI-MSm/z：459 [M+H]+, 推测分子量为458，分子式为C29H46O4。1H-NMR谱的全部信号进行了相应归属(见表3)；13C-NMR谱的全部信号进行了相应归属(见表4)。与文献[13]对照，故鉴定化合物14为3-羟基-30-去甲基-20-酮基-28-羽扇豆酸。

表3 化合物8～14的1H-NMR数据(C5D5N)

表4 化合物8～14的13C-NMR数据(C5D5N)

4 讨论

化合物3～7,11～14首次从青龙衣中分离得到。目前已有文献[14-15]报道，三萜类化合物具有良好的抗肿瘤作用，且三萜皂苷抗肿瘤效果更为显著。但是国内外对于三萜皂苷抗肿瘤作用的构效关系的研究还不是很成熟。上述化合物为青龙衣抗肿瘤作用机制研究奠定了药效物质基础，并且这些化合物能否和青龙衣中抗肿瘤主要成分胡桃醌增效减毒还需更深入的探讨和研究。