嘧霉胺替代多菌灵在柑橘贮藏过程中的降解及防效研究

平新亮 林 媚 王天玉 徐程楠 姚周麟 张伟清 冯先橘

（浙江省柑桔研究所，浙江台州318020）

多菌灵是一种广谱性杀菌剂，对多种作物上由真菌（如半知菌、多子囊菌）引起的病害有防治效果[1～2]。多菌灵因其较好的防治效果和实惠售价广泛应用于柑橘种植、贮存过程。温州蜜柑是我国柑橘罐头的生产原料，我国柑橘罐头主要出口市场是美国和日本，占比高达70%。美国食品药品监督管理局 （FDA）从2011年开始对食品中多菌灵农药残留的限量标准进行修改，针对柑橘类产品多菌灵残留限量小于0.01 mg/kg[3～4]，远低于国际食品法典委员会（CAC）规定的1 mg/kg、日本3 mg/kg以及我国5 mg/kg 的限量标准[5]。2016年我国有出口美国的柑橘罐头被FDA 检出多菌灵农药残留超标而退货。为应对美国贸易壁垒、破解多菌灵农药残留超标难题，本文对嘧霉胺替代多菌灵在柑橘贮藏期使用的安全性及防治效果进行了研究。

一、材料与方法

（一）供试药剂50%多菌灵可湿性粉剂，江苏蓝丰生物化工股份有限公司生产； 400 g/L 嘧霉胺悬浮剂，德国拜耳公司生产； 色谱乙腈，霍尼韦尔公司生产； N－丙基乙二胺固相吸附剂 （PSA）、石墨化炭黑 （GCB）、十八烷基硅胶 （C18），美国安捷伦科技有限公司生产。

（二）主要仪器气相色谱－质谱联用仪（GCMS）7890A－5975C（美国安捷伦科技有限公司）；液相色谱 （LC）1200 （美国安捷伦科技有限公司）；旋涡混匀器IKA MS3 （德国IKA）；高速离心机ANKE TDL－40B （上海安亭科学仪器厂）；氮吹仪N－EVAP111TM111（美国ORGANOMATION 公司），匀浆仪FA25（上海弗鲁克流体械制造有限公司）。

（三）试验方案试验对象选择温州蜜柑以及红美人两个柑橘品种。依据农药产品施药说明，嘧霉胺防治灰霉病推荐使用浓度为1000～1500 倍，多菌灵用于水果病害防治推荐制剂用药量为500～1000 倍，所以试验设置嘧霉胺1000 倍液、嘧霉胺1500 倍液、多菌灵600 倍液以及空白对照4 个处理，每个处理重复3 次。

试验浸药处理： 柑橘装入浸药筐中，让果实保持浸入药液1 min 后取出，自然晾干药液后装入塑料筐，底部垫上报纸，置于阴凉通风处贮藏[6～7]。

嘧霉胺残留试验： 浸药后第0、1、2、3、4、5、7、14、21 d 取样检测柑橘果皮、全果以及果肉中嘧霉胺含量； 多菌灵残留试验： 浸药后第1、5、10、14、21、28、35、55 d 取样检测柑橘果皮、全果以及果肉中多菌灵含量； 嘧霉胺与多菌灵处理温州蜜柑贮藏防效试验： 于浸药后15、30 和60 d 调查果实腐烂率并计算防治效果。

（四）嘧霉胺残留检测方法

1.样品处理。准确称取柑橘样品10 g，加入20 mL 正己烷∶乙酸乙酯 （1∶1），加入1 g NaCl，4 g MgSO4，匀浆30 s，4000 r/min 离心3 min。移取上清液10～15 mL 至离心管； 加入100 mgPSA、100 mgC18、100 mg GCB、150 mgMgSO4旋涡混匀30 s，过膜，进行GC－MS 测定[8～9]。

2.气相色谱条件。采用不分流进样； 载气为氦气，纯度≥99.999%，恒流模式，载气流量为1 mL/min，进样口温度为250℃； 毛细管柱为VF 1701 （30 m×0.25 mm i.d.×0.25 μm d.f）； 程序升温，初温50℃保持1 min，以20℃/min 升至170℃保持1 min，以10℃/min 升至270℃保持7 min；进样量为1 μL。

3.质谱条件。电离方式为电子轰击电离（EI），电子轰击源能量70 eV，离子源温度230℃，四极杆温度为150℃； GC－MS 接口温度为280℃。选择离子监测方式（SIM）：选择1 个定量离子198，2个定性离子199 和200。

（五）多菌灵残留检测方法

1.样品处理。准确称取柑橘样品10 g 至50 mL 离心管中，加入5 mL 盐酸（0.1 mol/L）和10 mL乙腈，匀浆，超声10 min，用氢氧化钠 （1 mol/L，约0.7 mL）调节pH 值至7.5 左右； 加入5 g 氯化钠，摇匀并离心10 min，取上清液1 mL 加入吸附剂（50 mgPSA+50 mgC18），过0.22μm 膜，进样。

2.液相色谱条件。色谱柱为Agilent C18 不锈钢柱（4.6×250 mm i.d.，5 μm）；流动相A 为乙腈，B为10 mmol/L 乙酸铵； 流速为1 mL/min； 采用梯度洗脱，0～8.5 min，A 为20%～42%，8.5～15 min，A 为42%～70%，15～21 min，A 为70%～20%，进样量为20 μL； 柱温为35℃； 检测波长为280 nm； 以保留时间定性，外标法峰面积定量。

二、结果与分析

图1 红美人经1000 倍嘧霉胺浸药后的残留动态

图2 温州蜜柑经1000 倍嘧霉胺浸药后的残留动态

图3 红美人经1500 倍嘧霉胺浸药后的残留动态

图4 温州蜜柑经1500 倍嘧霉胺浸药后的残留动态

（一）经浸药后的红美人及温州蜜柑嘧霉胺残留动态红美人、温州蜜柑经嘧霉胺浸药后，其全果和果皮中嘧霉胺残留动态曲线如图1～图4 所示。结果表明，经嘧霉胺1000 倍液与1500 倍液处理后，红美人和温州蜜柑果实中嘧霉胺残留动态趋势相似，浸药后前5 d，嘧霉胺快速降解，之后进入缓慢降解过程，最终稳定在1 个较低浓度。嘧霉胺在柑橘中的农药残留主要集中在果皮中，且红美人果皮中嘧霉胺含量显著高于温州蜜柑，其中，红美人果皮中嘧霉胺含量约为全果的7 倍，而温州蜜柑果皮中嘧霉胺含量约为全果含量的5 倍； 浸药后的红美人及温州蜜柑全果嘧霉胺含量处于较低含量水平，其最高含量小于0.5 mg/kg，全果中嘧霉胺降解规律与果皮中嘧霉胺含量变化曲线一致； 红美人、温州蜜柑经1000 倍嘧霉胺浸药后，果肉中嘧霉胺含量始终低于0.01 mg/kg。

（二）经浸药后的温州蜜柑果肉中的多菌灵残留动态经多菌灵600 倍液浸药后，温州蜜柑果肉中多菌灵残留动态如图5 所示，多菌灵在温州蜜柑果肉中含量呈现先增后减[10]，浸药后14 d 果肉中多菌灵达到峰值，随后逐渐降低，35 d 后进入缓慢减少阶段，60 d 后果肉中多菌灵含量仍处于相对较高值，含量为0.116 mg/kg。

图5 温州蜜柑经多菌灵600 倍液浸药后的残留动态

（三）多菌灵与嘧霉胺浸药处理对温州蜜柑及红美人柑橘的防效温州蜜柑、红美人的浸药防治效果如表1 所示，由结果可见，温州蜜柑和红美人经嘧霉胺1000 倍液、嘧霉胺1500 倍液以及多菌灵600 倍液处理后，在药剂处理30 d 内，3 个处理对温州蜜柑均有较好防治效果[11]，其防效比较结果为嘧霉胺1000 倍液处理＞多菌灵600 倍液处理＞嘧霉胺1500 倍液处理，而3 个处理的60 d 防治效果均不理想，其中多菌灵600 倍液处理防效相对较好，防效为52.6%。3 个处理对红美人防治效果不佳，处理后30 d 内防效顺序为嘧霉胺1000 倍液处理＞嘧霉胺1500 倍液处理＞多菌灵600 倍液处理，60 d 防治效果以多菌灵600 倍液处理相对较好。

表1 多菌灵与嘧霉胺浸药处理对温州蜜柑及红美人的防治效果

三、结论

本研究结果表明，从柑橘浸药处理后30 d 内的短期保鲜效果看，嘧霉胺1000 倍液处理略好于多菌灵600 倍液处理，各处理在60 d 以上的保鲜效果均不理想。残留动态试验表明，嘧霉胺在浸药处理后快速降解，5 d 后其残留就降到1 个较低水平，之后进入缓慢降解过程，且各处理的嘧霉胺在果肉中含量均低于0.01 mg/kg； 多菌灵在柑橘果肉中含量呈先增后减，浸药后14 d 达到峰值，60 d后果肉中多菌灵含量仍有0.116 mg/kg。

以对出口美国柑橘制品规定的残留限量应低于0.01 mg/kg 为参照，加工用柑橘原材料应严禁多菌灵用于保鲜，若使用后可能会导致多菌灵残留超标。嘧霉胺浸药处理不仅在30 d 内的防治效果优于多菌灵，且使用后迅速降解，5 d 后嘧霉胺残留到达较低水平，且在果肉中含量始终低于0.01 mg/kg。综上所述，嘧霉胺可作为替代多菌灵的柑橘短期保鲜农药。