不同种类杀菌剂对6种葡萄致腐病菌的室内毒力测定

尹向田 杨立英 王超萍

摘要：为研究不同种类杀菌剂对葡萄致腐病菌的室内抑菌活性，采用菌丝生长速率法，测定了18种生产中常用的杀菌剂对6种葡萄致腐病菌的室内毒力，以筛选出适合防治葡萄致腐病菌的杀菌剂。结果表明，18种杀菌剂对病原菌均具有一定的毒力，不同病原菌对杀菌剂的敏感性存在差异。己唑醇、氟硅唑、烯唑醇的抑菌能力较强，其EC50分别介于0.042～4.11、0.068～19.82、0.20～11.46 mg/L。多菌灵对灰霉菌、镰刀菌、交链格孢霉的抑菌活性较低，EC50均大于700 mg/L，代森锰锌对炭疽病菌的抑菌活性较低，EC50为1 621.06 mg/L。不同种类杀菌剂对6种病原菌的毒力为白腐病菌>溃疡病菌>交链格孢霉>灰霉病菌>炭疽病菌>镰刀菌。研究结果可为防治葡萄果实腐烂药剂的田间应用提供理论支持。

关键词：葡萄;致腐病菌;杀菌剂;药剂筛选;毒力测定

中图分类号： S436.631.1 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2021）03-0099-06

近年来，随着葡萄种植面积的不断扩大，在葡萄的成熟过程中容易出现果实腐烂问题，严重影响了葡萄产业的发展[1-2]。葡萄果实腐烂病往往是多种病原菌混合侵染导致的，几乎在各个生育期均有发生，防治较为困难[3-4]。葡萄白腐病和葡萄炭疽病是引发葡萄果实腐烂最重要的2种病害，除了危害果穗，还能侵染枝干和叶片，并且发病迅速[5-6]。在果实成熟期遇到阴雨天，灰霉病的发生也很严重，并且可在健康果实内部高频检出，具有潜在致病性[7]。链格孢和镰刀菌是一种常见的腐生菌，在果粒、果梗和穗轴上均有发生，田间借伤口侵染后，也容易造成腐烂，并且在储藏期间仍能继续繁殖导致果实腐烂[8-9]。葡萄溃疡病也是导致葡萄果实腐烂的重要病害之一，引起世界范围内葡萄溃疡的病原菌有20多种，危害我国的溃疡病菌主要有Botryosphaeria dothieda、Neofusicoccum parvum、Lasiodiplodia theobromae、Diplodia seriata等。其中，B. dothieda是优势病原菌，可侵染葡萄枝干和果实，造成果实、果梗腐烂，导致严重减产[10-11]。除此之外，霉菌也会引起的腐烂，酸腐病也能引起葡萄生長后期烂果[12]。

目前，对葡萄果实腐烂相关病原菌的报道较多，但多局限于单一病害的研究，系统研究较少，目前化学防治仍是最常用的病原菌的防治方法，但报道较少，缺乏用药方面的指导，前期研究中，笔者在腐烂葡萄果穗中筛选出了白腐病菌、炭疽病菌、溃疡病菌、交链格孢霉、灰霉病菌、镰刀菌6种致病性较强的病原真菌，本试验选用18种田间常用的杀菌剂对6种病原菌进行毒力测定，以期筛选出对致腐病菌有综合防控效果的杀菌剂，为田间用药提供相关理论支持。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 葡萄白腐病菌（Coniella diplodiella）、葡萄炭疽病菌（Glomerella cingulata）、葡萄灰霉病菌（Botrytis cinerea）、交链格孢霉（Alternaria alternata）、葡萄溃疡病菌（Botryosphaeria dothidea）、尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum）分离自济南南部山区腐烂葡萄果实，由山东省葡萄研究院良种与栽培研究室保存，试验于2019年5月至2019年12月在山东省葡萄研究院良种与栽培研究室进行。

1.1.2 培养基 马铃薯葡萄糖琼脂（potato dextrose agar，PDA）培养基：马铃薯200 g、葡萄糖20g、琼脂粉20 g、蒸馏水1 000 mL。

1.1.3 供试药剂 80%代森锰锌可湿性粉剂，山东省济南一农化工有限公司生产;50%福美双可湿性粉剂，山东百农思达生物科技有限公司生产;25%嘧菌酯悬浮剂，利民化工股份有限公司生产;40%腈菌唑可湿性粉剂，江西禾益化工股份有限公司生产;40%氟硅唑乳油，陕西恒润化学工业有限公司生产;15%亚胺唑可湿性粉剂，日本北兴化学工业株式会社生产;10%苯醚甲环唑水分散粒剂，山东百农思达生物科技有限公司生产;80%戊唑醇可湿性粉剂，浙江威尔达化工有限公司生产;50%己唑醇水分散粒剂，江西禾益化工股份有限公司生产;50%多菌灵可湿性粉剂，四川润尔科技有限公司生产;12.5%烯唑醇可湿性粉剂，四川国光农化股份有限公司生产;50%腐霉利可湿性粉剂，日本住友化学株式会社生产;50%异菌脲悬乳剂，美国富美实公司生产;75%百菌清可湿性粉剂，利民化工股份有限公司生产;50%啶酰菌胺水分散粒剂，京博农化科技股份有限公司生产;50%氟啶胺可湿性粉剂，深圳诺普信农化股份有限公司生产;50%嘧菌环胺水分散粒剂，先正达南通作物保护有限公司生产;20%抑霉唑水乳剂，江西禾益化工股份有限公司生产。

1.2 试验方法

1.2.1 毒力测定 将药剂配成合适的浓度，在无菌条件下，向冷却至50 ℃的100 mL PDA培养基中加入适当药剂母液稀释成5个梯度（不同药剂终浓度见表1），摇匀，倒入9 cm的灭菌培养皿中制成含药平板，用5 mm打孔器打取病原菌菌饼，接种病原菌，以只加无菌水的培养基作为对照，每个处理3个重复，将培养基置于25 ℃培养箱中培养，5 d后采用十字交叉法测量菌落直径，计算抑菌率，将药剂浓度转化为对数值，为横坐标，抑菌率转化为几率值，为纵坐标。求出毒力回归方程和EC50。

抑菌率=[对照菌落直径（mm）-处理菌落直径（mm）]×100%/[对照组菌落直径（mm）-5 mm]。

1.3 数据处理

试验结果使用Microsoft Excel软件进行分析。

2 结果与分析

2.1 不同种类杀菌剂对灰霉病菌的抑制作用

18种杀菌剂对葡萄灰霉病菌的室内毒力测定结果见表1，己唑醇的抑制效果最好，EC50为 0.083 mg/L，其次为戊唑醇、腐霉利、异菌脲、氟啶胺的EC50均小于1 mg/L，氟硅唑、亚胺唑、苯醚甲环唑、烯唑醇、啶酰菌胺、抑霉唑的EC50在1～5 mg/L之间，福美双、嘧菌酯、腈菌唑、百菌清、嘧菌环胺的EC50均小于100 mg/L，代森锰锌抑菌效果较低，多菌灵对灰霉病菌抑菌效果最差。

2.2 不同种类杀菌剂对炭疽病菌的抑制作用

18种杀菌剂对葡萄炭疽病菌的室内毒力测定结果见表2，氟硅唑对炭疽菌的抑制作用最强，EC50仅为0.068 mg/L，苯醚甲环唑、多菌灵、氟啶胺的抑制作用也较好，EC50值低于1.0 mg/L。戊唑醇、己唑醇、烯唑醇、嘧菌环胺、抑霉唑、嘧菌酯、百菌清的EC50值低于10.0 mg/L，福美双、腈菌唑、亚胺唑、腐霉利、异菌脲的EC50值在11.46～57.59 mg/L之间，啶酰菌胺的抑制效果较差，代森锰锌的抑制效果最差。

2.3 不同种类杀菌剂对溃疡病菌的抑制作用

18种杀菌剂对葡萄溃疡病菌的室内毒力测定结果见表3，亚胺唑对炭疽菌的抑制作用最强，EC50仅为0.06 mg/L，氟硅唑、苯醚甲环唑、戊唑醇、多菌灵、烯唑醇、氟啶胺、抑霉唑的抑制作用也较好，EC50值低于1.0 mg/L。代森锰锌、福美双、嘧菌酯、腈菌唑、己唑醇、腐霉利、异菌脲、百菌清的EC50值低于10.0 mg/L，啶酰菌胺抑制效果相对较低，为 267.56 mg/L。

2.4 不同种类杀菌剂对葡萄白腐病菌的抑制作用

从表4可以看出，18种杀菌剂均能较好地抑制葡萄白腐病菌的生长，氟啶胺、己唑醇的抑制效果最好，EC50值分别为0.004 4、0.042 mg/L，氟硅唑、苯醚甲环唑、多菌灵、烯唑醇的抑制作用也较好，EC50值低于1.0 mg/L。福美双、戊唑醇、腐霉利、异菌脲、百菌清、抑霉唑的EC50值低于10.0 mg/L，代森锰锌、嘧菌酯、腈菌唑、亚胺唑、啶酰菌胺、嘧菌环胺的EC50值在10.68～91.71 mg/L之间。

2.5 不同种类杀菌剂对镰刀菌的抑制作用

18种杀菌剂对葡萄溃疡病菌的室内毒力测定结果见表5，己唑醇、烯唑醇对镰刀菌的抑菌活性较好，EC50值分别为0.104、0.74 mg/L，福美双、嘧菌酯、腈菌唑、氟硅唑、苯醚甲环唑、百菌清、抑霉唑抑菌活性较好，EC50值在2.04～5.93 mg/L之间，其次为代森锰锌、戊唑醇、氟啶胺，EC50值小于200 mg/L，亚胺唑对镰刀菌的抑菌活性最差，EC50值高达 138 872.66 mg/L，多菌灵、 异菌脲、 啶酰菌胺、嘧菌环胺抑菌活性也较差，EC50值大于3 000 mg/L。

2.6 不同种类杀菌剂对交链格孢霉的抑制作用

18种杀菌剂对交链格孢霉的室内毒力测定结果见表6，亚胺唑对葡萄穗轴褐枯病菌的抑菌活性较好，EC50值为0.045 mg/L，代森锰锌、己唑醇、腐霉利、异菌脲、啶酰菌胺、 嘧菌环胺的EC50值均小于1 mg/L，其次嘧菌酯、苯醚甲环唑、氟啶胺、抑霉唑的EC50值在1～10 mg/L之间，福美双、腈菌唑、氟硅唑、戊唑醇、烯唑醇的EC50值在11.46～54.25 mg/L 之间，百菌清较其他杀菌剂效果较低，为336.90 mg/L，多菌灵的抑制效果最低。

3 结论与讨论

化学防治是控制葡萄果实腐烂的主要措施，目前，对于防治葡萄致腐病菌的杀菌剂已有较多研究，市场上的杀菌剂种类比较多，防治对象和作用方式都有很大差异[13]。本研究采用菌丝生长速率法测定了葡萄致腐病菌对有机硫类杀菌剂（福美双、代森锰锌）、取代苯类杀菌剂（百菌清）、二甲酰亚胺类杀菌剂（腐霉利）、苯丙咪唑类杀菌剂（多菌灵、异菌脲）、甲氧基丙烯酸酯类杀菌剂（嘧菌酯）、三唑类（氟硅唑、苯醚甲环唑、戊唑醇、腈菌唑、亚胺唑、己唑醇、烯唑醇）杀菌剂、吡啶类（氟啶胺）杀菌剂、嘧啶胺类（嘧菌环胺）杀菌剂、烟酰胺类（啶酰菌胺）杀菌剂、咪唑类（抑霉唑）等10类18种杀菌剂的室内毒力，结果表明，18种杀菌剂对病原菌均具有一定的毒力，其中，三唑类杀菌剂抑菌效果优于其他类型的杀菌剂。杀菌剂对6种病原菌的毒力为白腐病菌>溃疡病菌>穗轴褐枯病菌>灰霉病菌>炭疽病菌>镰刀菌。

己唑醇、氟硅唑、烯唑醇3種三唑类杀菌剂的抑菌能力最强，其EC50分别介于0.042～4.11、0.068～19.82、0.20～11.46 mg/L之间。同一杀菌剂对不同的病原菌防治效果不同[14]，如亚胺唑对溃疡病菌、交链格孢霉的抑制作用最强，EC50分别为0060、0.045 mg/L，但对镰刀菌基本没有抑菌活性;代森锰锌对炭疽病菌的抑菌活性较低，EC50为 1 621.06 mg/L，但对交链孢菌的抑菌活性较好，EC50为0.14 mg/L;多菌灵对溃疡病菌、白腐病菌、炭疽病菌的抑菌活性较强，EC50在0.22～0.70 mg/L之间，但对灰霉菌、镰刀菌、交链格孢霉的抑菌活性较低，EC50均大于700 mg/L。葡萄炭疽病、葡萄灰霉病及链格孢属真菌都有研究表明，已经对常用的杀菌剂如多菌灵、百菌清产生了抗药性，防效较差[15-16]。蔡欣楠等研究表明，百菌清和多菌灵对葡萄白腐病菌抑菌活性较强[17]。徐成楠等研究表明腐霉利对辽西地区葡萄灰霉病菌的毒力较高，EC50为0.520 9 mg/L，百菌清和异菌脲的毒力分别为2546 4、2.954 4 mg/L[18]。

葡萄灰霉病在花期及整个果实生长期均有发生，白腐病、炭疽病、溃疡病在果实成熟期发病较重[19-20]。在防治过程中应当根据葡萄的生育期合理进行施药。除了化学防治，还应加强农业防治手段，及时清除田间菌源、加强栽培管理都能有效改善葡萄果实腐烂病的发生。本试验仅对病原菌进行了室内的毒理试验，将药剂应用于田间还需进一步验证。

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