高效液相色谱法在检测中成药物中糖精钠含量的应用

河南省驻马店市食品药品检验所（463000）薛毅博 孙红涛 王佳佳

附图1 标准曲线

附图2 高效液相色谱法色谱图

糖精钠学名叫邻磺酰苯酰亚胺钠，其甜度是蔗糖的200倍左右。这种物质除了能够在味觉上能够尝出甜的味道之外，不会参与到机体代谢中，也不会对人体产生营养价值。虽然服用糖精钠不会引起任何不适，但是服用较多会在一定程度上影响其肠胃消化酶的分泌，从而降低小肠吸收，导致食欲不佳。因此需要限制其应用，通过对中成药物中的糖精钠含量检测，控制糖精钠含量，能够保证不会影响患者的消化功能[1]。现阶段临床应用高效液相色谱法检测具有分离快、灵敏度高等优势，能够显著提升中成药品检验的工作效率。本研究仅以三金片为载体探讨了中成药物中糖精钠含量检测中高效液相色谱法的应用，现报道如下。

1 样品、仪器与试药

1.1 样品 三金片粉碎，委托第三方制作不同糖精钠含量的样品5个。样品1糖精钠含量0.05mg/g，样品2糖精钠含量0.10mg/g，样品3糖精钠含量0.25mg/g，样品4糖精钠含量0.50mg/g，样品5糖精钠含量0.80mg/g。1.2 仪器 高效液相色谱（型号：安捷伦1260型）、离心机（型号：CH12型）、KQ-250型超声波振荡仪、称量天平（型号：赛多利斯MSA225S，规格：200g/0.1mg）。

1.3 试药 亚铁氰化钾500g分析纯，天津市大茂化学试剂厂；乙酸锌500g分析纯，天津市大茂化学试剂厂；甲醇500ml色谱纯，山东西亚化学工业有限公司。

2 方法与条件

2.1 色谱条件 应用安捷伦1260型高效液相色谱系统，配备可变波长紫外可见检测器，C18色谱柱（150mm×4.6mm，5μm）；将标准使用液在190～370nm的波长下进行光谱扫描，确定最大检测波长为230nm；流动相：CH30H（色谱纯）-0.02mol/L乙酸铵（7.5∶92.5）。流速为0.8mL/min；柱温35℃；进样量：10μL。

2.2 标准溶液制备 糖精钠标准储备：称取经过120℃烘干4h后的糖精钠（来源：中国食品药品检定研究院 500mg/支），精密称取0.1172g，置100ml容量瓶加纯化水定容，混匀，将其作为标准储备溶液。糖精钠中间标准溶液：将储备溶液用纯化水进行稀释，配成浓度为200mg/L的中间标准溶液。糖精钠标准使用溶液：将糖精钠中间标准溶液配置成浓度为0mg/L、1.00mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、50.0mg/L、100mg/L、200mg/L的标准使用溶液。

2.3 样品溶液制备 取样品1至样品5，分别精密称取5g的样品加入至50ml容量瓶中，超声提取10分钟，加入亚铁氰化钾（江苏采薇生物科技有限公司）溶液（0.25mol/L）2ml，乙酸锌溶液（上海康朗生物科技有限公司，250ml）（1mol/L）2ml，用水稀释至刻度混匀，用0.45μm微孔滤膜进行过滤。取空白三金片，精密称取5g的样品3份分别置50ml容量瓶中，分别添加10.0mg/L、5.0mg/L及2.5mg/L不同浓度的标准溶液10ml，命名为糖精钠1、糖精钠2及糖精钠3。

2.4 线性关系考察 将糖精钠中间标准溶液配置成浓度为0mg/L、1.00mg/L、5.00mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、50.0mg/L、100mg/L、200mg/L的标准溶液，进样，以样品峰面积为纵轴、标品浓度为横轴，绘制标准曲线。

2.5 回收率测定 糖精钠1、糖精钠2及糖精钠3进行回收实验，应用外标法定量，每个添加水平单独测3次，测定回收率。

2.6 准确度测定 对样品1到样品5，含不同浓度糖精钠的样品进行了平行分析，准确度以回收率计算。

2.7 检出限和定量限 测定方式：应用基线噪音方式测定。

3 结果

3.1 标准曲线 将标准溶液进样，以样品峰面积为纵轴、标品浓度为横轴，绘制标准曲线，得到Y=24.72x+11.57，R2=0.999，见附图1。样品中糖精钠的图谱见附图2（保留时间7.782分钟为糖精钠峰）。

3.2 准确度 对5份样品进行测定，计算回收率，详见附表1。

附表1 准确度对比

3.3 回收率 分别加入不同浓度标准溶液的同一样品，平均回收率为100.2%。详见附表2。

附表2 回收率实验

3.4 检出限和定量限 将标准溶液逐步稀释进样，以3倍信噪比为检出限，10倍信噪比为定量限，确定检出限为0.3μg/ml，定量限为0.8μg/ml。

4 讨论

三金片具有清热解毒、利湿通淋以及补虚益肾等作用，多应用于治疗急慢性肾盂肾炎、慢性肾盂肾炎急性发作及尿路感染等。但是长期以来因缺乏稳定特异的标准对照物质，中成药物很少有以糖精钠为标准物质的定量质控标准。临床有研究显示，通过对动物进行研究发现，糖精钠可以诱发癌症，但是并没有相关研究显示糖精钠能够诱发人类致癌[2]。但是大量使用也会导致身体出现不适，因此控制中成药物糖精钠的含量十分重要。

目前药品含量和有关物质测定多采用高效液相色谱法检测，这种方法是将液体当成流动相，然后使用高压输液系统检测[3]。而且在药品生产中，若生产环境产生一定变化，极有可能导致其原料中出现一些附加成分，产生有害物质，一旦超出相关标准就会降低药品中的有效成分，致使中成药的质量不合格[4]。因此需严格控制药物附加成分，通过应用高效液相色谱法检验其含量具有常规检验方法不具备的优势。此外，高效液相色谱法在质量检测中起到了十分重要的作用，有利于为中成药物质量提供一定的保障[5]。

目前高效液相色谱法应用于食品、药品等行业的监测中，有研究表明，高效液相色谱法在鉴别曲安奈德和头孢拉定具有良好的效果。而且对于相似药物难以区分时，应用高效液相色谱方法检测可以有效进行区分，如云防风、水防风等药物，经检测后发现，其药理作用存在显著差异[6][7]。通过应用高效液相色谱法对中成药物中的糖精钠进行检测可以保证药物的安全性。本研究的结果显示，取样量5g，定容至50ml的条件下，进样量10μL，柱温35℃，糖精钠含量0.05mg/g～0.8mg/g的范围内，测量结果有较高的准确度。表示应用高效液相色谱法可以有效检测出糖精钠含量，其检测结果可靠。由于中成药物成分较为复杂，糖精钠检验难度也比较大，应用高效液相色谱法能够降低中成药物的分离难度，有效测定中成药物中的有效成分。本研究检测三金片中的糖精钠可以有效实现中成药物各成分的分离，有利于推动中成药物质量检验工作的规范化发展。

通过应用高效液相色谱法检测中成药物中的糖精钠含量，避免中成药物中的复杂成分对其产生的干扰，其检测具有较高的准确度和回收率，对临床应用具有十分重要的意义[8]。在本研究中通过对中成药物的糖精钠含量进行检测，其准确度、回收率都比较高。这也在一定程度上说明使用高效液相色谱法具有优势，而且使用高效液相色谱法其操作简便、效果可靠，本次研究通过这种方式对中成药中糖精钠进行了含量测定，测定结果稳定且准确度高，能够作为糖精钠质量控制的指标。

综上所述，高效液相色谱法在检测中成药物中的糖精钠含量具有较高的准确度和回收率，而且该方式操作比较方便，在临床药物检验中值得大力推广。