胃癌患者血清miRNA-647水平及临床意义

刘 倩，王宗艳

陕西省人民医院消化二科，陕西 西安 710068

胃癌为常见的消化道肿瘤之一，具有高发病率、高病死率，严重威胁人类的生命健康，胃癌发生与否受生活条件、饮食习惯、幽门螺杆菌(Hp)的影响[1]。我国胃癌发病率和病死率约占全球45.0%，而诊治率低于10.0%，胃癌患者就诊时大多已到中晚期，所以及早进行胃癌筛查、早诊早治对于胃癌患者具有重要意义，而检测胃癌生物标志物特别是血清标志物是改善胃癌患者预后的关键。微小核糖核酸(miRNA)是胃癌患者血清中存在的一种肿瘤标志物，能够调控细胞生长、凋亡[2]。本研究选取在本院行手术治疗且术前未进行过放疗、化疗的60例胃癌患者作为研究对象，探讨其血清miRNA-647水平及临床意义，现将结果报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2018年6月至2019年8月在本院行手术治疗且术前未进行过放疗、化疗的60例胃癌患者作为观察组。纳入标准：(1)症状及临床诊断均符合胃癌诊断标准者；(2)临床资料完整者；(3)患者及家属签署书面知情同意书。排除标准：(1)全身性疾病，包括严重肝、肺、心、肾功能不全者；(2)预计生存期不足3个月者；(3)严重精神疾病患者；(4)合并其他系统恶性肿瘤患者。同期选取本院胃溃疡患者60例作为胃溃疡组，以及体检健康者60例作为对照组。观察组男39例，女21例；年龄34～78岁，平均(56.17±5.36)岁；Hp阳性34例，阴性26例；TNM分期：Ⅰ期11例，Ⅱ期22例，Ⅲ期20例，Ⅳ期7例；病灶直径≥5 cm 37例，<5 cm 23例；分化程度：低分化27例，中分化22例，高分化11例。胃溃疡组男30例，女30例；年龄32～74岁，平均(55.81±5.69)岁；Hp阳性32例，阴性28例。对照组男32例，女28例；年龄35～75岁，平均(56.09±5.18)岁；Hp阳性35例，阴性25例。3组患者性别、年龄等一般资料比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。本研究经医院伦理委员会批准。

1.2方法 空腹抽取4 mL静脉血，室温下放置1 h，4 000 r/min离心10 min，取1.5 mL上清液转至无RNA酶离心管，于-80 ℃冰箱中保存。血清miRNA提取采用长沙维尔公司试剂盒，根据说明书进行操作，再根据北京康为生物公司提供的试剂盒说明书进行miRNA逆转录反应，反应条件：16 ℃ 30 min，42 ℃ 30 min，85 ℃ 5 min。采取TRIzol法提取总RNA，逆转录为cDNA，根据美国Thermo Forma公司相关试剂盒操作进行实时荧光定量PCR检测，反应条件：95 ℃ 10 min，95 ℃ 15 s，60 ℃ 1 min，共40次循环。miRNA-647上游引物为5′-GCTACACAGAGGCCATTGAA-3′,下游引物为5′-TCCCGGAGTTCATCTATGTG-3′；内参GAPDH上游引物为5′-TGCGACTTCAACAGCAACTC-3′，下游引物为5′-CTTGCTCAGTGTCCTTGCTG-3′。根据2-ΔΔCt计算miRNA-647相对水平。观察比较各组研究对象血清miRNA-647水平及其与胃癌临床病理参数的关系。

2 结 果

2.1两组患者血清miRNA-647水平比较 观察组血清miRNA-647相对水平(5.06±1.48)高于胃溃疡组(1.85±0.73)和对照组(0.97±0.49)，且胃溃疡组高于对照组，差异均有统计学意义(P<0.05)。

2.2血清miRNA-647水平与胃癌临床病理参数的关系 血清miRNA-647水平与胃癌患者年龄、性别、分化程度等无相关(P>0.05)，与患者肿瘤大小、TNM分期、Hp感染有相关(P<0.05)。见表1。

2.3血清miRNA-647、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原199(CA199)诊断胃癌的效能比较 ROC曲线分析显示，血清miRNA-647诊断胃癌的曲线下面积(AUC)高于CEA、CA199。见表2。

表1 miRNA-647相对水平与临床病理参数的关系

表2 血清miRNA-647、CEA、CA199诊断胃癌的效能比较

3 讨 论

胃癌早期症状不明显，容易复发、转移，预后差，胃镜检查可诊断胃癌但不适应于早期胃癌筛查，而血清学标志物检测作为新型、无创的检测手段，对胃癌的诊断有重要意义[3]。

miRNA由19～25个核苷酸构成，为非编码小分子RNA，长度约为22个核苷酸，可折叠形成前体转录物再合成为成熟的miRNA。miRNA配对结合靶mRNA致使其降解、翻译改变蛋白质，转录后水平负性调节基因转录，在细胞生长、细胞分化、新陈代谢、增殖及凋亡等生物学进程中发挥重要的调控作用。血清miRNA与肿瘤的发生与发展有关，不同生物体、不同疾病类型、不同细胞生长周期，miRNA表达情况不同。在乳腺癌、肝癌、结肠癌等恶性肿瘤中miRNA-647水平较同，而关于胃癌组织miRNA-647水平的研究较少，调控机制尚不明确。有研究表明，胃癌组织miRNA-223水平较癌旁组织明显升高[4]。血清miRNA的来源有3种：凋亡细胞破损后释放；外泌体、穿梭囊泡运输，细胞膜包裹传导；分泌中与RNA结合蛋白结合后释放。miRNA可长期储存于人体血清、血浆中，可适应酸碱变化、温度变化。不同恶性肿瘤特异性miRNA不同，起源的组织或器官可由低分化肿瘤组织的miRNA水平确定，miRNA是检测恶性肿瘤的理想血清标志物[5]。

本研究结果显示，观察组血清miRNA-647水平显著高于胃溃疡组和对照组(P<0.05)，说明miRNA-647水平在胃癌患者血清中较胃溃疡患者和体检健康者明显升高。本研究结果还显示，血清miRNA-647水平与胃癌患者年龄、性别、分化程度等无相关性(P>0.05)，与患者肿瘤大小、TNM分期、Hp感染有相关(P<0.05)，这与徐娟等[6]、周欣亮等[7]研究结果一致。

综上所述，血清miRNA-647水平与胃癌肿瘤大小、TNM分期、Hp感染有关，对胃癌有较好的诊断效能。