HPLC-ELSD法测定注射用阿奇霉素含量及有关物质

＊王殿奎 李婷 范桂强

（衡水市食品药品检验检测中心 河北 053000）

阿奇霉素一种半合成的十五元环大环内酯类的抗生素，呈白色粉末或者晶体，具有吸收效果好，生物利用高、副作用低、抗菌范围广等效果。在食入时无异味，偏苦，有轻微的引湿性。在临床上主要用于治疗呼吸道、支气管炎、皮肤软组织感染以及尿道炎等等。根据相关资料显示：注射阿奇霉素可以有效抑制细菌的转肽，抑制蛋白质的合成，抗菌效果好。不同的药物搭配阿奇霉素有不同的治疗效果，若使用药物超标导致出现不良反应应及时根据患者的病情采取有效的治疗措施。根据有关注射用阿奇霉素用量分析等相关知识，按照《国家药品标准》测定其含量等，影响因素较多、手续较复杂。相关报道表示：采用HPLC-UV法测定注射用阿奇霉素含量及有关物质，手续简单方便、专业性强，但因为阿奇霉素只在末端进行吸收，而大大降低该方法的准确度[1]。为了进一步控制阿奇霉素含量以及有关物质的检测，本实验展开HPLC-ELSD法测定注射用阿奇霉素含量及有关物质的研究分析，具体报告如下：

1.资料与方法

(1)仪器与试剂

仪器设备选择Agilent 1200安捷伦的高效液相色谱仪（生产企业：南京利尔实验仪器设备有限公司，型号：1200）；其中包括脱气机（绵阳世诺科技有限公司）；智能进样器（郑州安诺科学仪器有限公司）；柱温箱（生产企业：大连依利分析仪器有限公司，型号：ZW1201）；四元梯度泵（生产企业：天津琛航科苑科技发展有限公司，型号：Q-Grad）等。检测器可使用美国SofTA公司生产的Model300sELSD型；选择上海精密仪器仪表有限公司生产的pH计酸度计；电子天平（生产企业：上海精天电子仪器有限公司，型号：NDJ-1C）；超声波清洗器（生产企业：北京众益中和生物技术有限公司，型号：QL-100S）；智能溶出仪（生产企业：天津诺雷信达科技有限公司，型号：ZRS-3ST）。

(2)试药与试剂

药物选取：阿奇霉素对照品（生产企业：上海广锐生物科技有限公司，型号：ZRS-3ST）；阿奇霉素标准品（生产企业：深圳生物科技有限公司，CAS型号：117772-70-0）；注射用阿奇霉素、乙腈、三蒸水以及其他试剂均为分析纯。

(3)溶液的制备

①对照品溶液：在准确的精密度下选取适量的阿奇霉素对照品，放于50ml的容器内加入适当数量稀释液，使用超声进行溶解，后使用稀释液进行定容，溶度为0.5mg/ml。将制作完成的对照品材料放置专门储存的器材内，精密量在对照品储备液中的5ml，将以上放置在与20ml的容器内，使用加上稀释液溶解、稀释、摇匀均匀即可[2]。

②在准确精密度下选取适量的阿奇霉素，放于100ml的容器内，采用超声进行溶解，选取适当数量稀释液，后使用稀释液进行定容，溶度为0.5mg/ml。将制作完成的对照品材料放置专门的供试品储存的器材内，精密量在对照品储备液中的5ml，将以上放置在与20ml的容器内，使用加上稀释液溶解、稀释、摇匀均匀即可。

③在精密称取下使用适量注射用阿奇霉素，放于100ml的容器内，采用超声进行溶解，选取适当数量稀释液，后使用稀释液进行定容。制作成溶度约7.5mg/ml的溶液[3]。

2.方法与结果

(1)色谱条件和系统适应性试验

色谱为Boston pHIex-C18（4.6mm×250mm，5μm）；流动相为0.03mol/L乙酸铵-乙腈。柱温箱温度为40℃；漂移管温度为60℃，以空气载气，气压为50psi。在符合色谱条件下进行系统适应性试验，阿奇霉素的理论塔板数计算值将高于4000。

(2)专属性实验

在准确的精密度下选取适量的阿奇霉素对照品，将样品分为4份。取1份样品加入，5ml稀释液溶解，加入1mol/L的盐酸，在室内放60min后加入1mol/L的氢氧化钠混合稀释、摇匀后稀释到25ml，作为酸降解产物；5ml稀释液溶解，加入1mol/L氢氧化钠，在水浴内放置20min后，取出冷却。后加入1mol/L的盐酸，稀释到25ml后作为碱降解产物；5ml稀释液溶解，加入30%的过氧化氢，在室内放60min加入稀释液稀释到25ml后作为氧化降解产物；在130℃的高温破坏60min。液稀释到25ml后作为高温破坏降解产物。根据实验结果表明：阿奇霉素和酸降解产物、碱降解产物、氧化降解产物以及高温破坏降解产物所出现的降解产物可以很好的进行分离、分解，降解产物以及主成分自己的鉴定不出现混淆，扰乱等情况。通过此实验结果总结：该方法的专属性良好。

(3)线性关系考察

在准确的精密度下根据：“1.3.1”的对照品储存液中的0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.5ml以及5.0ml的容器分别放于10ml的容器瓶内，加入稀释液进行摇晃均匀，制作成对照品溶液。面积以峰表示，常用对数（lgY）为纵坐标，质量的常用对数以（lgX）作为横坐标，在实验过程中需绘制出精准的曲线。

实验结果回归方程：lgY=1.3095lgX＋2.85933r=0.9995。根据本次实验结果表明：阿奇霉素在0.51124-5.10229ug的范围内表示其内线性的关系优好。

(4)采取以自身进行对比法

选择在准确的精密度下的相关物质进行测试的供试品溶液中的0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.5ml以及5.0ml的容器分别放于100ml的容器瓶内，使用稀释液进行摇晃均匀得到供试品的0.5%、1.0%、1.5%、2.5%以及4.0%的对照品溶液。在实验过程中进行色谱图绘制来记录。面积以峰表示，常用对数（lgY）为纵坐标，质量的常用对数以（lgX）作为横坐标，在实验过程中需绘制出精准的曲线。

实验结果回归方程：lgY=1.2396lgX＋2.8194r=0.9997。

根据本次实验结果表明：相关物质在进行检测时在0.7509-6.5989ug的范围内表示峰面积的对数与样品原本的溶度相比，质量对数显示有良好的线性关系。

(5)重复性分析

在准确的精密度下与选择6份相同编号的样品，根据以上的实验方式制作成供试品溶液，后进行色谱图记录以及分析，可得出结果：阿奇霉素的平均含量在标识量的99.4%左右。根据本次实验结果可知：本实验的重复性完全符合要求。

3.讨论

（1）流动相的选择：选择美国SofTA公司生产的Mode l300sELSD型检测器进行质量检测，在相对的测定条件下通过漂移管为蒸发完成的气体、固体或者颗粒都会出现相对的反应。在持续性下通过漂移管的流动相来全部挥发，主要挥发化合物的溶剂或者改性剂。在本实验过程中流动相为0.03mol/L乙酸铵-乙腈。柱温箱温度于40℃；漂移管温度为60℃，以空气载气，气压为50psi。结果中阿奇霉素的峰型良好，保持时间合理，分离效果也非常好[4]。

（2）有关物质的测定：因为阿奇霉素的相关杂质无法直接获得，因此本文选择采用自身对照法进行测定，注射用阿奇霉素中存在的保留时间较小的杂质量也在1.0%以下，对于保存时间较长的杂质量在0.5%以下，杂质的总数量小于1.5%。

（3）色谱柱的选择：阿奇霉素是碱性药物，流动相所要求的pH值较高，对色谱柱具有一定的损坏性。本次实验选择Boston pHIex-C18（4.6mm×250mm，5μm）色谱柱，其pH值的可承受范围较大（为1.0～12.0），具有耐碱性，分离的重现性良好。

综上所述，本实验方法简单方便、操作手续轻松并且准确可靠，运用测定注射用阿奇霉素含量及有关物质以及质量控制，具有较高的应用价值，值得推广。