血清Spry2基因表达水平与非小细胞肺癌根治术后复发的关系

谢鹏

（平顶山市第一人民医院呼吸内科，河南 平顶山 467000）

肺癌是临床最常见的恶性肿瘤之一，非小细胞肺癌约占所有肺癌的80%，由于该疾病预后性差，病死率高[1-2]。目前，对于早期非小细胞肺癌，临床上常采用非小细胞肺癌根治术进行治疗，但术后复发率较高，30%左右的患者因术后癌症复发而死亡[3-4]。因此，对非小细胞肺癌根治术的复发进行准确预测以及探究影响复发的相关因素是临床的重要课题之一。Spry2（sprouty2）是由sprouty2基因编码的一种Ras/丝裂原激活蛋白激酶信号通路特异性抑制蛋白。研究显示，血清Sprouty蛋白包括4亚型,有负向调控作用，Spry2基因已被证明对卵巢癌、肝癌等多种癌细胞的增殖有关[5-6]，因此，Spry2基因的表达情况已成为肿瘤治疗以及预后的研究热点。但对于非小细胞肺癌细胞的影响以及术后复发情况研究较少。因此，本研究探讨了血清Spry2基因表达水平与非小细胞肺癌根治术后复发的关系，以期为临床非小细胞肺癌根治术后复发预测提供新方法，。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2018年2月至2019年2月在我院进行非小细胞肺癌根治术患者106例进行研究，男69例，女37例，年龄56～79岁，平均年龄（68.14±10.26）岁。纳入标准：⑴符合《中国非小细胞肺癌放射治疗临床指南(2020版)》中的非小细胞肺癌诊断标准[7]；⑵经影像学及组织学活检确诊为非小细胞肺癌，在我院接受非小细胞肺癌根治术患者；⑶相关临床资料完整且患者、家属知情并同意；⑷经医院伦理委员会通过。排除标准：⑴合并多种恶性肿瘤患者；⑵严重心脏病高血压患者。术后随访2年，根据术后复发情况分为复发组和未复发组。根治切除术后发现病灶残端、同侧胸腔、余肺叶等局部肿瘤复发以及对侧肺组织、纵膈、肺门淋巴结远端等远端复发为复发，未见肿瘤转移为未复发。复发组42例，男25例，女17例，年龄56～79岁，平均年龄（67.32±11.06）岁，未复发组64例，男44例，女20例，年龄56～79岁，平均年龄（68.67±10.02）岁。

1.2 观察指标

1.2.1 非小细胞肺癌根治术后复发临床特征 通过随访调查以及门诊调查，记录患者的年龄、性别、吸烟史、病理类型、住院时间、手术时间、肿瘤分期、用力呼气容积（forced expiratory volume in certain second，FEV）%、置管时间。

1.2.2 Western Blot检测两组患者血清S-CD105、MMP9、Spry2表达情况比较 术前，取患者空腹静脉血3 ml，分离血清后，加入细胞裂解液裂解，采用提取细胞总蛋白，严格按照操作说明进行（西宝生物科技(上海)股份有限公司）。采用二喹啉甲酸试剂盒进行蛋白定量（上海康朗生物科技有限公司），提取10 g/孔蛋白进行聚丙烯酰胺凝胶电泳（JY-SPC型，北京君意东方电泳设备有限公司），转膜至聚偏二氟乙烯膜，加入5%脱脂牛奶室温封闭2 h，采用洗膜缓冲液洗膜并加一抗（S-CD105、MMP9、Spry2蛋白，稀释比例均为1:500），于4℃孵育过夜，洗膜加二抗，于室温下孵育2 h。电化学发光显影，用凝胶图象处理系统（JY04S-4C，北京君意东方电泳设备有限公司）分析对比条带强弱，选用β-actin作为内参。所有抗体均购自美国CST生物有限公司。

1.3 统计学处理 采用SPSS 18.0统计学软件进行数据分析，满足正态分布且方差齐的计量资料采用（±s）表示，采用两样本独立t检验比较组间差异，计数资料用率表示，采用χ2检验，采用Logistic回归分析影响非小细胞肺癌根治术后复发的独立危险性因素；非小细胞肺癌根治术后复发的预测采用受试者工作特征（Receiver operating characteristic，ROC）曲线分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 非小细胞肺癌根治术后复发临床特征比较非小细胞肺癌根治术后复发与患者的年龄、性别、病理类型、住院时间、置管时间、术后化疗、肿瘤大小、手术时间无关（P＞0.05），与患者的癌症肿瘤分期、肿瘤大小、吸烟史、FEV%有关（P＜0.05），见表1。

表1 非小细胞肺癌根治术后复发临床特征比较（n，%）

2.2 Logistic回归分析影响非小细胞肺癌根治术后复发的独立危险因素 筛选2.1中影响非小细胞肺癌根治术后复发的差异变量进行二分类Logistic回归分析，检验水准α=0.05。肿瘤分期Ⅰ=0，肿瘤分期Ⅱ=1；FEV%≥70=0，FEV%<70=1；肿瘤<3 cm=0，肿瘤≥3 cm=1；肿瘤中低分化=0，肿瘤高分化=1；无吸烟史=0，有吸烟史=1。Logistic回归分析显示，肿瘤分期、FEV%是影响非小细胞肺癌根治术后复发的独立危险因素（P＜0.05），见表2。

表2 非小细胞肺癌根治术后复发的Logistic回归风险预测模型

2.3 两组患者S-CD105、MMP9、Spry2表达情况比较 复发组S-CD105、MMP9表达水平明显高于未复发组，Spry2表达水平明显低于未复发组（P<0.05），见图1、表3。

图1 两组患者S-CD105、MMP9、Spry2表达情况比较

2.4 血清S-CD105、MMP9、Spry2表达水平预测非小细胞肺癌根治术后复发的ROC特征S-CD105、MMP9、Spry2表达水平预测非小细胞肺癌根治术后复发的AUC为0.727、0.761、0.772Spry2表达水平预测效，见表3，ROC曲线分析见图2。

图2 血清、S-CD105、MMP9、Spry2水平预测非小细胞肺癌根治术后复发的ROC曲线分析

表3 两组患者水平比较（±s）

表3 两组患者水平比较（±s）

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3 讨论

非小细胞肺癌早期症状不明显，发病隐匿[8]，大部分患者确诊时病情已进中晚期，即使接受手术治疗，由于术后复发，远期疗效较差，患者5年生存率仍不超过50%，避免术后复发是提高患者生存率的主要方式之一[9-10]。非小细胞肺癌发病是多因素结果，与遗传、环境因子、患者个人生活习惯密切相关[11-12]。本研究结果显示，非小细胞肺癌根治术后复发与患者的年龄、性别、病理类型、住院时间、置管时间、术后化疗、肿瘤大小、手术时间无关，与患者的癌症肿瘤分期、肿瘤大小、吸烟史、FEV%有关。肿瘤分期、FEV%是非小细胞肺癌根治术术后复发的独立危险因素。一般来说，小细胞肺癌根治术一般对于早期癌症患者治疗效果较好，肿瘤分期＞Ⅱ的患者，病情已恶化较严重，术后复发的可能性较大。FEV%代表患者的肺功能情况，FEV%低于70，置管时间较长，说明患者肺功能损伤较严重，术后病情恢复较困难，增加了疾病复发的可能性[13-14]。结合本研究说明，吸烟、癌症发展程度、肺功能损伤情况与非小细胞肺癌根治术术后复发密切相关。

表4 血清S-CD105、MMP9、Spry2水平预测非小细胞肺癌根治术后复发的ROC特征

本研结果显示，复发组S-CD105、MMP9表达水平明显高于未复发组，Spry2表达水平明显低于未复发组。既往研究显示，内皮糖蛋白（endoglin，CD105）可用于标记微血管密度、拮抗转化生长因子-β（transforming growth factor-β，TGF-β）对血管内皮细胞发挥抑制作用，S-CD105是血管生成的必需蛋白之一，癌细胞的增殖和转移需要大量SCD105以促进血管生成[15-16]，临床已发现多种癌症的发生与S-CD105高表达相关，因此，常使用SCD105作为肿瘤血管生成的指标，检测癌症发展情况[17-18]。肿瘤细胞发生转移时，会促进蛋白酶分泌，导致细胞外基质降解，基底膜受损，由此完成癌细胞的转移。MMP蛋白可以降解细胞外基质，进一步增强肿瘤细胞转移和侵袭。MMP-9是MMP家族中最重要的蛋白酶之一，在多种恶性肿瘤中可检测到MMP-9过表达[19-20]。Spry2是一种重要的抑癌基因，在多种癌症中发现，Spry2表达下调可激活与调控癌细胞增殖、迁移的信号通路有关的激酶以及正向调节炎性因子诱导癌细胞形成，SPRY2表达下调可以导致癌症发生以及癌症术后复发，Spry2表达情况与肿瘤患者预后存在相关性[21-22]。结合本研究说明，非小细胞肺癌患者体内SCD105、MMP9表达水平升高，Spry2表达水降低，与其术后复发情况有关。在本研究中，S-CD105、MMP9、Spry2表达水平预测非小细胞肺癌根治术后复发的AUC为0.727、0.761、0.772，说明临床可根据S-CD105、MMP9、Spry2水平变化预测非小细胞肺癌根治术后复发情况。