芩连翘皮方对感染大肠埃希菌小鼠的预防和治疗作用

李静，刘祎，崔冰漪，刘秀玮

目前，兽医界已极为广泛地对细菌性疾病防治中的中药作用进行了研究[1-3]。通常情况下，在大肠埃希菌病的防治中，清热类药物疗效良好[4-6]。本研究建立小鼠模型并予以不同处理，以观察芩连翘皮方对感染大肠埃希菌小鼠的防治作用，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料来源 (1)动物：SPF级KM小鼠120只，由华北理工大学实验动物中心提供。(2)试药试剂：中药饮片黄芩、黄连、黄柏、连翘、白芨由唐山市中医医院中药房提供。芩连翘皮方提取液制备：黄芩10 g，黄连5 g，黄柏10 g，芒硝20 g，皂角刺15 g，连翘20 g，白芨20 g，水煎醇沉法制备原方提取液并浓缩至含1 g/ml的生药量。配制1.3×107cfu/ml的大肠埃希菌菌悬液。(3)仪器设备：12号灌胃针由北京合力科创科技发展有限公司生产，722G型分光光度计由上海仪电分析仪器有限公司生产，FW100型高速万能粉碎机由天津市泰斯特仪器有限公司生产。

1.2 实验方法

1.2.1 芩连翘皮方的预防实验：将60只小鼠采用随机数字表法分为空白对照组、阳性对照组、阴性对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，每组10只，雌雄各半。空白对照组小鼠灌服生理盐水1 ml，阳性对照组小鼠灌服氟苯尼考溶液1 ml，低剂量组、中剂量组、高剂量组小鼠分别灌服0.25 g/ml、0.50 g/ml、1.00 g/ml芩连翘皮方提取液1 ml，连续给药5 d，最后1次给药后3 h给予阳性对照组、阴性对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组小鼠腹腔注射1.3×107cfu/ml的大肠埃希菌菌悬液0.1 ml，给予空白对照组小鼠注射生理盐水0.1 ml。

1.2.2 芩连翘皮方的治疗实验：将60只小鼠采用随机数字表法分为阳性对照组、阴性对照组、空白对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组，每组10只，雌雄各半。给予阳性对照组、阴性对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组小鼠腹腔注射1.3×107cfu/ml的大肠埃希菌菌悬液0.1 ml，空白对照组小鼠注射生理盐水0.1 ml。3 h后给予阳性对照组小鼠灌服氟苯尼考溶液1 ml，阴性对照组、空白对照组小鼠灌服生理盐水1 ml，低剂量组、中剂量组、高剂量组小鼠分别灌服0.25 g/ml、0.50 g/ml、1.00 g/ml芩连翘皮方1 ml，连续给药5 d。

1.3 观察指标 攻毒前后分别采用温度传感器测量预防实验和治疗实验各组小鼠肛门周围体表温度。

2 结 果

2.1 预防实验小鼠攻毒前后肛门周围体表温度比较 空白对照组小鼠攻毒前后肛门周围体表温度比较差异无统计学意义(P>0.05)，阴性对照组、低剂量组小鼠攻毒后肛门周围体表温度均高于攻毒前(P<0.01)，但阳性对照组、中剂量组、高剂量组小鼠攻毒前后肛门周围体表温度比较差异均无统计学意义(P>0.05)。攻毒前，6组小鼠肛门周围体表温度比较差异均无统计学意义(P>0.05)；攻毒后，阴性对照组、低剂量组小鼠肛门周围体表温度均高于空白对照组、阳性对照组、中剂量组、高剂量组(P<0.05)。见表1。

表1 预防实验6组小鼠攻毒前后肛门周围体表 温度比较

2.2 治疗实验小鼠攻毒前后肛门周围体表温度比较 空白对照组小鼠攻毒前后肛门周围体表温度比较差异无统计学意义(P>0.05)，阴性对照组、低剂量组小鼠攻毒后肛门周围体表温度均高于攻毒前(P<0.05)，但阳性对照组、中剂量组、高剂量组小鼠攻毒前后肛门周围体表温度比较差异均无统计学意义(P>0.05)。攻毒前，6组小鼠肛门周围体表温度比较差异均无统计学意义(P>0.05)；攻毒后，阴性对照组、低剂量组小鼠肛门周围体表温度均高于空白对照组、阳性对照组、中剂量组、高剂量组(P<0.05)。见表2。

表2 治疗实验6组小鼠攻毒前后肛门周围体表 温度比较

3 讨 论

相关医学研究表明[7-10]，中药治疗细菌感染性具有较好疗效。芩连翘皮方是我院自拟方剂之一，组成成分包括连翘、黄芩、芒硝、皂角刺、黄连、白芨及黄柏等，具有燥湿泻火、消炎镇痛、清热疏风、解毒散热等功效。现代药理学研究认为，芩连翘皮方可抗炎、促进组织再生及血管生成[11]。因此，有学者认为芩连翘皮方治疗大肠埃希菌感染具有一定临床意义。为明确芩连翘皮方对大肠埃希菌感染的具体作用，本文通过建立小鼠模型并予以不同处理后，预防实验和治疗实验均显示，小鼠攻毒后阴性对照组、低剂量组小鼠肛门周围体表温度均高于空白对照组、阳性对照组、中剂量组、高剂量组。提示，芩连翘皮方最显著的药理作用为调节机体免疫平衡，可能与大肠杆菌的内毒素起着重要的作用有关[12]。内毒素具有使小鼠体温升高，出现全身炎性反应综合征(SIRS)，导致机体功能衰竭的作用。

转化生长因子-β1(TGF-β1)、表皮细胞生长因子(EGF)及碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)等因子均在创面愈合的不同阶段有重要作用。TGF-β1可有效提升创面的修复进程，对纤维细胞的增殖进程具有积极的促进作用，同时可对胞外基质中Ⅰ型前胶原的合成产生一定的刺激作用，从而加快创面的愈合进程，缓解大肠埃希菌症状。EGF对某些因子的生成具有一定的诱导作用，例如血管内皮生长因子，从而加快新血管的生成。bFGF的生物学功能具备多样性与复杂性的特征，对新血管的生成具有积极的促进作用[13]。bFGF还与组织再生、创面愈合等具有紧密的关联性。笔者既往研究发现，治疗后，与对照组比较，应用芩连翘皮方进行治疗的治疗组TGF-β1、EGF及bFGF表达量均明显提高，且呈现逐渐递增的增长趋势，但接受治疗12 d后，芩连翘皮方治疗组的TGF-β1、EGF及bFGF的表达量均略有下降[14]。芩连翘皮方中，黄芩、连翘等药材均属于君药，具备清热消炎、解毒泻火、疏散风热、燥湿等功效；黄连也具备解毒清热、燥湿泻火的功效。方中诸药协同作用，有助于消炎生肌，对组织再生、血管生成具有重要意义。

综上所述，芩连翘皮方可有效防治小鼠感染大肠埃希菌，值得临床推广应用。