反相高效液相色谱法测定盐酸普萘洛尔片中盐酸普萘洛尔的含量

郑风敏，王繁华，李 彬

（鹤壁市食品药品检验检测中心，河南 458030）

盐酸普萘洛尔作为非选择性的β 受体阻断剂，临床上常用做高血压、心绞痛、心率失常等疾病的常用药［1，2］。随着我国人口老龄化的到来，特别是老年性高血压的增加，该药用量呈增加的趋势。《中国药典》2015年版中规定，盐酸普萘洛尔片中的含量测定采用紫外-可见分光光度法［3］，该方法没有高效液相色谱法的分离功能，所测定的结果容易受片剂中的各种辅料的影响，因此，采用高效液相色谱法可以有效去除辅料的干扰，更准确地测定盐酸普萘洛尔的含量。本试验通过采用反相高效液相色谱法来测定盐酸普萘洛尔片中盐酸普萘洛尔的含量，方法简单，回收率高，重复性好，可以做为一种测定盐酸普萘洛尔含量的方法。

1 仪器和试药

1.1 仪器 Waters e2695 高效液相色谱仪，waters 2998 二极管阵列检测器，Agilent 20Rbax C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），赛多利斯CPA225D 电子分析天平，FRQ-1008HT 型超声波清洗机（杭州法兰特超声波科技有限公司），赛多利斯mini 超纯水系统（德国赛多利斯集团）。

1.2 试药 盐酸普萘洛尔对照品（中国食品药品检定研究院，批号100783-201202，100%）；色谱纯乙腈（德国默克），色谱纯磷酸（天津市科密欧化学试剂有限公司），分析纯磷酸二氢钾（天津市科密欧化学试剂有限公司），水为试验室自制超纯水。盐酸普萘洛尔片（江苏亚邦爱普森药业有限公司，10 mg，批号200102、190915、190806）。

2 方法和结果

2.1 色谱条件 Waters e2695 高效液相色谱仪，waters 2998 二极管阵列检测器，Agilent 20Rbax C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为乙腈-水（含1%庚烷磺酸钠）（45∶55），检测波长为290 nm，进样体积：20 μl，流速：1.0 ml/min，柱温：35 ℃。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品贮备液与对照品溶液的制备 精密称取盐酸普萘洛尔对照品约20 mg，置于20 ml 棕色量瓶中，加入流动相10 ml，超声使溶解，自然放冷，继续加流动相并定容至刻度作为对照品贮备液。精密量取对照品贮备液2 ml，置于100 ml 的棕色量瓶中，加流动相稀释并定容至刻度，作为对照品溶液，备用。

2.2.2 供试品溶液的制备 取重量差异项下的盐酸普萘洛尔片20 片，研细，精密称取约20 mg，置于100 ml棕色量瓶中，加流动相60 ml，超声使溶解，自然放冷，继续加流动相并定容至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液10 ml，置于100 ml 的棕色量瓶内，用流动相稀释至刻度，作为供试品溶液，备用。

2.2.3 阴性对照溶液制备 按该药的处方，取各辅料适量，按照该药处方比例和制备方法制成阴性对照药品。取此种药品，按照文中上述“2.2.2”项下方法制成阴性对照溶液。

2.3 系统适用性试验 取文中上述的对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液，按照“2.1”项下设置的色谱条件分别进样，根据试验的色谱图可知，该试验条件下的色谱峰峰形较好，出峰时间较短，理论板数为17 488，试验结果所得的参数符合《中国药典》2015 年版的相关规定。色谱图见图1。

图1 阴性对照（A）对照品（B）供试品（C）高效液相色谱图

2.4 线性关系试验 分别精密量取“2.2.1”项下的对照品贮备液0.5、1 和2 ml，分别放置于100 ml 的量瓶中，另取对照品贮备液3 和5 ml 分别放置于20 ml 的量瓶中，用流动相稀释并定容，按照“2.1”项下色谱条件进行试验，记录其色谱图。以峰面积（Y）对浓度（X）进行线性回归分析，计算可得回归方程为Y=7 368 X+14 587（r=0.999 9），结果表明盐酸普萘洛尔在5.84～246.47 μg/ml 的浓度内线性关系良好。

2.5 精密度试验 取文中上述“2.2.1”项下制备的对照品溶液，按照“2.1”项下色谱条件连续进样6 次，记录色谱图，通过计算可得其RSD 为0.84%（n=6），结果表明，在该色谱条件下，盐酸普萘洛尔的精密度较高。

2.6 重复性试验 取批号200102 的供试品6 份，按“2.2.2”项下的条件制成供试品溶液，按照“2.1”项下色谱条件进样，分别记录其色谱图。盐酸普萘洛尔峰面积的RSD 为0.84%（n=6）。计算结果表明，在该色谱条件下供试品重复性良好。

2.7 稳定性试验 取批号200102 的供试品配置成的供试品溶液，室温下避光放置。分别在0、1、3、5、8、12和24 h 分别取样，取样后立即检测，分别记录其液相色谱图，根据盐酸普萘洛尔的峰面积计算其RSD 为0.94%。结果表明，供试品溶液室温避光放置24 h 内稳定。

2.8 回收率试验 取批号200102 的供试品（含量已知）9 份（每份约含盐酸普萘洛尔20 mg），分别加入盐酸普萘洛尔对照品适量，按“2.2.2”项下方法制成供试品加标回收溶液1～9，按文中“2.1”项下的色谱条件进样，以盐酸普萘洛尔的峰面积计算其回收率。结果盐酸普萘洛尔的平均回收率为99.92%，RSD 为0.17%。见表1。

表1 盐酸普萘洛尔回收率试验结果

2.9 样品含量测定对比 取批号为200102、190915、190806 的3 批供试品各2 份，按照“2.2.2”项下方法分别制成供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件进样。另取批号为200102、190915、190806 的3 批供试品各2份，按照2015 年版《中国药典》中规定的方法测定盐酸普萘洛尔的含量。分别计算其含量，对结果进行比较。见表2。

表2 不同试验方法测定盐酸普萘洛尔含量结果

3 讨论

3.1 流动相的选择 通过查询相关文献，笔者发现有采用甲醇-盐、甲醇-乙腈-盐、甲醇-磷酸二氢钾等系统［4-6］作为流动相，本文也对这些条件进行了试验，但结果没有在笔者设置的条件下峰形对称，出峰时间也没有该条件下的快。本文设置的条件下，出峰时间快，峰形对称，理论板数较高，因此，流动相最后采用了乙腈-水（含1%庚烷磺酸钠）（45∶55）。

3.2 检测波长的选择 按照“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，对其进行了紫外-可见扫描检测，最后发现在290 nm 的波长处有最大吸收，因此选用290 nm 为最后的检测波长。

3.3 结果分析 通过含量测定结果比较，发现紫外和液相所测得结果基本相同，但是高效液相色谱法可以有效地去除药品中辅料的干扰，自动化程度也高。因此，本文通过试验所得到的高效液相色谱方法可以作为测定盐酸普萘洛尔片含量的一种方法。