一种晒后修复组合物的研制

童星

关键词：晒后修复;玫瑰茄花;金花葵

紫外线属于太阳光中的不可见光，根据波长分为UVA、UVB、UVC、UVD，其中对皮肤有危害的主要是UVA和UVB。当人体皮肤受到超过耐受量的UVA和UVB照射后，会促使细胞释放炎症介质，导致真皮毛细血管扩张充血、皮下组织水肿并激发炎症，出现刺痛、红斑、脱屑等不适症状[1]。在阳光的强烈照射下，即使做了防晒措施也无法完全避免紫外线的伤害，所以，晒后对皮肤进行修复尤为重要。

玫瑰茄花又名洛神花，具有抗氧化、抗肿瘤、降血脂、降血压等生物活性。黄琼等[2]研究发现，玫瑰茄多糖具有较好的还原能力，能够有效清除·OH、O₂^-·和DPPH自由基。金花葵是秋葵属草本植物，具有抗氧化、镇痛消炎、降血脂、免疫调节等药理作用。研究发现，其富含的黄酮类化合物具有较强的抗氧化活性和良好的抗炎作用，对酪氨酸酶活性也有一定的抑制作用[3]。本研究以玫瑰茄花提取物、金花葵提取物为主要修复成分，研制了一种晒后修复组合物，并对所研制样品的晒后修复效果进行了测试。

1 实验试剂与设备

实验试剂：无水乙醇、邻二氮菲、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、硫酸亚铁、30%过氧化氢（分析纯，国药集团化学试剂有限公司），DPPH（优级纯，Sigma），2，4-二硝基氯苯（99%，Aldrich），组氨酸ELISA试剂盒（上海一研生物科技有限公司）。

设备：电子天平（上海天美天平仪器有限公司），水浴恒温振荡器（常州市亿能实验仪器厂），旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂），数控超声机（昆山禾创超声仪器有限公司），实验专用微波炉（南京杰全微波设备有限公司），紫外分光光度计（上海仪电分析仪器有限公司），真空冷冻干燥器（上海叶拓仪器仪表有限公司）。

2 实验方法

2.1 玫瑰茄花提取物的制备

玫瑰茄花自然干燥，碾磨成粉，加入75%乙醇，使玫瑰茄花粉和乙醇的质量比为1∶50，300 W微波处理5 min，再用500 W超声提取15 min，过滤收集提取液，真空冷冻，干燥过夜。

2.2 金花葵提取物的制备

金花葵自然干燥，碾磨成粉，加入水，使金花葵粉和水的质量比为1∶20，加热回流提取1.5 h后，再加入5倍质量的水，加热回流提取1.0 h，过滤，合并收集两次提取液，真空冷冻，干燥过夜。

2.3 晒后修复组合物的制备

按表1配制组合物，以5%（质量分数）组合物的水溶液作为待测样品。

2.4 晒后修复组合物自由基清除效果测试

2.4.1 羟自由基清除实验

在具塞试管中加入0.5 mL、0.75 mmol/L的邻二氮菲无水乙醇溶液，分别加入2.0 mL、0.20 mol/L的磷酸盐缓冲液（pH=7.4）、1.0 mL待测样品，充分混匀后，加入0.5 mL、0.75 mmol/L的FeSO₄·7H₂O溶液，再次混匀后加入0.5 mL、0.01%（体积分数）的H₂O₂，37 ℃水浴1.0 h，测定536 nm处的吸光度值，计算羟自由基清除率。

式中：A_x为待测样品吸光度值，Ab为以蒸馏水替代H₂O₂的损伤组吸光度值，A_n为以蒸馏水为空白组的吸光度值。

2.4.2 DPPH自由基清除实验

在比色皿中加入3.0 mL、0.20 mmol/L的DPPH无水乙醇溶液，再加入1.0 mL待测样品混匀，室温避光反应30 min，测定其在517 nm处的吸光度值，记为A_x;以3.0 mL无水乙醇和1.0 mL待测样品作为空白对照，测定吸光度值，记为A_b;以3.0 mL DPPH无水乙醇溶液和1.0 mL无水乙醇溶液作为对照组，测定吸光度值，记为A_n，按公式计算DPPH自由基清除率。

2.5 晒后修复效果测试

选取300～350 g的SD大鼠，雌雄各半，随机分为空白组、模型组、实验组，每组20只。实验前24.0 h，将大鼠背部去毛，面积约为3.0 cm×3.0 cm，除空白组外，其余各组用2，4-二硝基氯苯在大鼠背部皮肤造模，并用紫外线照射12.0 h，在造模成功后（皮肤出现干燥、脱屑、肿胀、红斑等症状）的0、8 h，实验组取按配方1～8制备的待测样品0.5 mL，涂抹大鼠背部的脱毛区，涂抹面积约2.5 cm×2.5 cm，空白组、模型组用去离子水涂抹，连续14天每天给药一次，于第15天观察，按表2的评价标准记录，并检测各组的血清组氨酸（HIS）质量浓度。

2.6 多次皮肤刺激性实验

选取2.5～3.0 kg的健康兔子，雌雄各半，实验前将兔子背部脊柱两侧被毛剪掉，去毛面积为3.0 cm×3.0 cm，涂抹面积为2.5 cm×2.5 cm。取按配方1～8制备的样品约0.5 mL，涂抹在兔子一侧皮肤上，另一侧以去离子水作为对照，连续14天每天涂抹1次。从第二天开始，每次涂抹前应剪毛，用水清除残留受试物，1.0 h后观察结果，参照《化妆品安全技术规范（2015年版）》进行皮肤刺激性反应评价[4]。

3 实验结果

3.1 自由基清除效果

由表3可见，按配方1～3制备的晒后修复组合物样品均含有玫瑰茄花、金花葵提取物，对羟自由基和DPPH自由基的清除率均在80%以上;配方4和配方5所制备样品含单一的玫瑰茄花提取物或金花葵提取物，自由基清除率都低于50%，表明玫瑰茄花、金花葵提取物具有一定的自由基清除效果，且两者组合使用效果更佳;配方6以等量的金缕梅提取物代替了金花葵提取物，自由基清除率都低于60%，表明金花葵提取物的自由基清除效果优于金缕梅提取物;与配方1相比，配方7、8不含酪朊酸钠，样品自由基清除率低于60%，表明酪朊酸钠可以增强玫瑰茄花、金花葵提取物的相容性，提高组合物的自由基清除效果。

3.2 組合物晒后修复效果

由表4可见，将配方1～3制备的晒后修复组合物样品涂抹在造模成功后0 h的受损皮肤上，可以显著降低HIS质量浓度，减轻炎症反应，改善受损皮肤的干燥、脱屑、肿胀、红斑症状;配方4～8制备所得组合物样品对炎症和皮肤情况的改善效果明显低于配方1～3制备所得样品。将配方1～3制备的晒后修复组合物样品涂抹在造模成功后8.0 h的受损皮肤上，仍然可以显著降低HIS质量浓度，减轻炎症反应，改善受损皮肤的干燥、脱屑、肿胀、红斑症状;配方4～8制备所得组合物样品对炎症和皮肤情况的改善效果较差。

3.3 多次皮肤刺激实验结果

由表5可见，对于配方1～3制备的晒后修复组合物样品，在观察期内，受试兔子皮肤未见红斑、水肿等异常反应，表明所制备样品对皮肤无刺激性;对于配方4～8所制备的样品，在涂抹1.0 h后，有轻度红斑和水肿症状，24.0 h后可以消除。

4 结语

研制的晒后修复组合物具有一定的自由基清除、晒后修复效果，可以起到抗炎、消肿、清除自由基的作用，对皮肤无刺激，作为功效成分添加到晒后修复化妆品中，具有广阔的应用前景。