犬口腔增生物的病理变化观察

陈瑾,冯秉福

(青海畜牧兽医职业技术学院,西宁 812100)

随着畜牧业和宠物行业的发展，动物疾病临床发生率的报道也在逐年上升，然而对有关犬口腔增生物的诊断、治疗方面的基础性研究仍然较少。犬产生口腔增生物的原因有很多，主要有物理性因素[1]、化学性因素和生物因素。还有一些增生物的产生是由病毒引起的接触性传染病，患犬多于数周乃至数月内自然康复，但由于在口腔粘膜形成的大量增生物，可直接影响动物的采食，而增生物表面的破损，可继发细菌感染，导致口腔炎症、异臭等不良后果[2]。

犬口腔增生物在临床上时有发生，它不仅影响宠物的美观，个别严重者则引起进食困难。单纯的外科手术切除很难根治，复发率很高。犬口腔增生物主要有炎性增生物、口腔粘膜息肉、口腔肿瘤等。其中口腔肿瘤有恶性和良性之分。最常见的犬口腔恶性肿瘤为磷状上皮细胞瘤、黑色素瘤、纤维肉瘤。黑色素瘤和磷状上皮细胞瘤是最常见的恶性肿瘤，为犬的两大多发口腔肿瘤[3]。

犬口腔增生物通常会导致局部口腔黏膜上皮增厚隆起，随着病程发展，会逐渐转变成瘤体状。在这过程中，病变上皮组织细胞出现一系列形态、结构变化。大多数病例随着其机体免疫系统的完善，抵抗力的增强，而使增生物退化转归，少数出现癌化[4]。口腔增生物的诊断方法包括触诊、X线、技术机断层扫描、磁共振、细针抽吸、切开活检[5]。

口腔增生物常用的治疗方法是手术切除，放射疗法，化学疗法，或者联合应用。单纯的放射疗法和化学疗法不能对口腔增生物起到根治的作用，通常需要进行手术切除[6]。

口腔增生物是很普遍的一种犬类疾病，对犬只的健康有很大的潜在危害。随着对犬口腔增生物研究的深入，人们越来越重视它对犬类的影响[7]。因此，需要对犬口腔增生物的病理变化作更加深入的研究[8]。为提高临床诊断的准确率，本实验以病理学的切片实验为基础，对犬的口腔增生物的病理形态学进行观察，旨在为兽医临床治疗提供理论的依据，提高诊断效果[9]。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1材料来源

患有犬口腔增生物的病犬，由湖南农业大学动物医院提供。

1.1.2仪器与试剂

乙醇、二甲苯、苏木素、伊红染色素、切片石蜡、中性树胶、福尔马林、碳酸锂饱和液等。Motic奥林巴斯显微摄影系统、石蜡切片机、计算机等。

1.2 方法

1.2.1临床症状观察

观察患犬的临床症状，主要观察患犬其发育情况、精神状态、饮食状况、排便状况、体温，以及可视粘膜的检查等。

1.2.2增生物的眼观病理变化观察

观察口腔内部及增生物的眼观病理变化，主要观察增生物的大小、颜色、部位以及其表面破损状况等。

1.2.3病理组织学观察

1.2.3.1取病变组织

1.2.3.2固定：将所取病料置10%的福尔马林固定液中固定 48h，在固定6h后，对组织块进行修块。将修好的组织块放于白色的小包埋盒中，按设定好的程序进行脱水、透明、浸蜡，其具体的程序步骤为水洗→80%酒精1h→90%酒精 1.5h→95%酒精 2h→95%酒精 2h→100%酒精1h→100%酒精1.5h→100%酒精1.5h→二甲苯0.5 h→二甲苯1h→石蜡2h→石蜡2h。

1.2.3.3包埋：将小包埋盒的盖子去掉，将组织块从包埋盒中用小镊子轻轻取出，取出时注意仍将要切的面朝下，平放在已滴满石蜡的不锈钢包埋盒的中央位置，这一点非常重要，否则会将要切的面切不完整，放好组织块后，将白色的小包盒底部镶嵌在不锈钢包埋的上方，再在其上滴满石蜡。随后将已包埋好的不锈钢小包埋盒冷却使其凝固。当组织块已完全与石蜡凝固结合在一起时，将不锈钢包埋盒轻轻从要切的组织块底部轻轻去掉，将留有组织块的白色小包埋盒侧面的石蜡轻轻刮去。

1.2.3.4切片：将保留在白色小包埋盒的组织块固定在石蜡切片机上，先行修片，当修到完整的组织时，将切片的厚度调到 5-7μm，再行切片，切片时注意用力均匀，进行连续切片。

1.2.3.5展片、摊片与烘片：将切好的组织薄片用毛笔刷轻轻挑起，同时用小镊子轻轻将切好的组织薄片的起始部夹起，放入水浴锅展片，温度为45～50℃。温度过高可将切片熔化，过低则切片不宜伸展。切片放入展片槽中时，立即用小镊子轻轻在其上面将其有皱缩的地方展平，此时将已准备好的载玻片垂直伸入液面下在载玻片的1/3处将薄层切片缓缓涝起，切片可自动贴附于载玻片上，将载玻片放在切片架上，再将其放在摊片架上。最后再将切片架移到烘片箱中烘干(烘片箱中的温度为76℃)，一般持续时间为 40min。

1.2.3.6脱蜡、染色与封藏：将放有载玻片的染色架放入二甲苯 Ⅰ 中浸泡10min →二甲苯 Ⅱ 中浸泡10min(以充分脱蜡)→100%酒精5min→100%酒精5min→95%酒精5min→85%酒精5min→80%酒精 5min→苏木素染液染色5min→水洗(将切片架放入事先准备好的清水中冲洗5min)→1盐酸酒精分化(这一步骤相当关键，它的主要目的是脱去胞浆的着色，时间过长可使胞核的着色脱去。)放进去后要迅速取出，时间一般掌握在4-6s→自来水缓缓冲洗15～30min→伊红染液染色1～3min→95%酒精3s→100%酒精3s→100%酒精3s→二甲苯Ⅰ3s→二甲苯 Ⅱ3s。至此HE染色过程全部结束，将染色架上的载玻片取出，用干净的纱布将二甲苯液体蘸去，并在上面滴上中性树胶，将盖玻片封好，贴上标签作好标记后放入切片盒中，观察增生物的病理变化。

2 结果与分析

2.1 临床症状

患犬发育完全，体格偏瘦，精神沉郁，面容出现轻微畸形；食欲、饮欲旺盛，二便正常；听诊心音，呼吸音和肠音未见异常，体温正常；天然孔(口、鼻、肛门)黏膜颜色粉红色。口腔感觉过敏，拒绝检查口腔，呼出的气体常带有难闻的恶臭，流涎并吞咽困难。口腔增生物严重影响动物的正常采食，采食量减少。触诊增生物质地较硬，粉红色，表面有破损、触碰容易出血。增生物大小为1.6cm×1.5cm×1.5cm，根部与左下犬齿处的牙龈相连。增生物周围牙齿状态良好。触诊附近淋巴结(下颌，咽后，颈浅)状态未见异常。X-ray检查，胸部X-ray检查未发现异常病灶。头部的背腹位、右侧位及斜位均可见增生物的软组织阴影，牙齿及牙槽骨未见异常。

2.2 眼观病理变化

由图1和图2可看出该增生物大小为1.6cm×1.5cm×1.5cm，粉红色，表面有破损出血，增生物根部与左下犬齿处的牙龈相连，与周围组织分界明显，增生物周围牙齿状态良好。

图1 犬口腔增生物图2 犬口腔增生物

2.3 病理组织学变化

由增生物病理组织切片显微图像3、4、5、6可看出：增生组织侵润性增长，细胞聚集成团。主要为棘细胞层高度或显著不规则增生，中间夹杂结缔组织和血管的增生，可见增生物间质内有大量炎性细胞浸润，主要为淋巴细胞和巨噬细胞。棘细胞向上增生形成明显的肥厚层，内部填充以间质以及大量炎性细胞，且接近正常组织处炎性细胞呈团存在。这表明该增生物主要属于一种假瘤样增生，常见于慢性感染灶周边，并且会反复发生，切除后易复发，时间长也可能有导致肿瘤的发生。

图3 犬口腔增生物显微图像(×40)图4 犬口腔增生物显微图像(×100)

图5 犬口腔增生物显微图像(×100)图6 犬口腔增生物显微图像(×400)

3 讨论与小结

该患病犬的口腔增生物显微图像中可见到有许多形状不等、密度很高的颗粒[10]。增生物中可见到嗜碱性颗粒存在，而在正常上皮的相同部位并未见此结果，说明它是增生组织异常代谢的产物。主要为棘细胞层高度或显著不规则增生，中间夹杂结缔组织和血管的增生，可见增生物间质内有大量炎性细胞浸润，主要为淋巴细胞和巨噬细胞。棘细胞向上增生形成明显的肥厚层，内部填充以间质以及大量炎性细胞，且接近正常组织处炎性细胞呈团存在。所以该增生物属于一种假瘤样增生。

肿瘤是在各种因素的作用下，机体局部组织的细胞的基因发生改变，导致异常增生而形成的新生物[11]，这种新生物多表现为局部肿块。肿瘤的发生非常广泛，根据生物学特征及其对机体的危害性不同，一般将其分为良性和恶性两大类[12]。良性肿瘤对机体的影响一般较小，可对周围组织器官产生压迫和阻塞作用。但生长在颅内或椎管内的良性肿瘤可因压迫神经组织而产生严重后果，发生在内分泌腺的良性肿瘤可因引起某种激素分泌过多而产生全身性影响[13]。而恶性肿瘤对机体的影响极大。不论生长在任何部位，如不及时治疗可引起严重后果。恶性肿瘤除可以产生压迫和阻塞作用外，还可以破坏组织、器官的结构和功能，引起出血，并发感染。犬口腔肿瘤为犬类常见病症，引起疼痛，造成恶病质，引起副肿瘤综合征等影响[14]。而恶性肿瘤在HE染色时可见到肿瘤细胞形态和组织结构上出现如下异型性：组织结构的异型性，表现为瘤细胞排列紊乱，失去正常的层次和结构；细胞形态的异型性，表现为瘤细胞及其核的多形性和病理性核分裂象，细胞核体积增大，出现巨核、多核或奇异核，多见不对称性、多极性等病理性核分裂象[15]。

因为该患犬诊断为口腔增生物并未出现癌化所以没有发现核分裂现象，但长时间发展下去可以转变。在这种情况下，如果患犬免疫能力不足或存在缺陷，不能使增生物正常回归，那么这些过度增生的异常结构就很可能成为口腔肿瘤的诱因。

关于该患犬口腔增生物的治疗，为防止增生物的复发不应采取放射疗法和化学疗法，应采取手术切除的方法将其根治。其中手术治疗应首先进行术前准备，对患犬皮下注射 0.5mL 的硫酸阿托品，以肌肉注射鹿眠灵做常规麻醉，将其麻醉后徒手打开患犬口腔，以0.01%高锰酸钾水溶液清洗消毒[16]，然后进行手术切除。用有齿镊将增生物夹住，以暴露增生物根部，再用手术刀从增生物的根部将其切除。手术用明胶海绵填充止血，止血后应立即用少量高锰酸钾粉放于创面，氧化处理3min左后，然后用生理盐水彻底冲洗创面[17]。冲洗时用棉签挡住，以免倒流入食道发生烧伤。术后 12h 给予饮水，未发现饮水过程中有出血，术后 24h 给予流质食物。为防止感染每天皮下注射氨苄西林钠一次，连续注射一周即可。

综上所述，该增生物属于一种假瘤样增生，常见于慢性感染灶周边，并且会反复发生，切除后易复发，时间长也可能有导致肿瘤的发生。