载脂蛋白E基因多态性、血浆同型半胱氨酸水平与阿尔茨海默病患者睡眠障碍相关性分析

马珊珊， 邢艳晖， 王瑞萍， 王秀芳， 彭 菲， 李 哲

辽宁省金秋医院 1.神经内科；2.耳鼻喉科，辽宁 沈阳 110016；3.廊坊师范学院教育学院，河北 廊坊 065000

阿尔茨海默病(Alzheimer′s disease，AD)是发生于老年和老年前期，以进行性认知功能障碍和行为损害为特征的中枢神经系统退行性疾病[1-5]。同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)是一种含硫氨基酸[6]，体内Hcy异常增高可损伤血管内皮细胞，促进血管平滑肌细胞增殖，破坏凝血和纤溶平衡，导致脂代谢紊乱、动脉粥样硬化等，影响机体微循环，最终造成认知与神经功能障碍[7-8]。本研究旨在探讨载脂蛋白E(apolipoprotein E,ApoE)基因多态性及Hcy水平与AD患者睡眠障碍的相关性。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取自2016年12月至2019年12月于辽宁省金秋医院神经内科就诊的65例AD患者纳入AD组。纳入标准：年龄60～90岁；均符合美国国立神经疾病语言障碍卒中研究所和AD及相关疾病协会制定“可能的AD”诊断标准及排除标准(2010版)。另选取38例健康体检者纳入健康组。本研究经医院伦理委员会批准。所有研究对象及家属均签署知情同意书。

1.2 研究方法

1.2.1 临床资料采集 所有研究对象均完成头颅CT或头颅海马检查、简易精神状态检查量表(mini-mental state examination，MMSE)评分。匹兹堡睡眠质量指数量表评分≥7分，且多导睡眠监测结果提示有睡眠紊乱，则诊断为睡眠障碍，不符合上述条件的为无睡眠障碍。

1.2.2 ApoE基因型的鉴定 取清晨空腹EDTA抗凝全血2 ml，应用血液基因组DNA提取试剂盒提取DNA。采用Primer Premier 5软件设计引物(北京华大基因科技有限公司合成)。对ApoE基因进行目的片段扩增。聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)体系：1 μl的DNA模板、PCR Super Mix、引物F(10p)、引物R(10p)，12 μl的蒸馏水，共30 μl。反应条件：96℃预变性5 min，10个循环程序(96℃变性20 s，62℃～52℃退火20 s，72℃延伸30 s；每个循环下降1℃)；再进行35个循环(96℃变性20 s，52℃退火30 s，72℃延伸30 s)；完成后，72℃ 10 min，16℃ forever。对PCR产物进行电泳、纯化，利用DNA测序仪(3730XL型，美国ABI公司)进行基因型鉴定。

2 结果

2.1 两组研究对象一般资料比较 AD组低密度脂蛋白胆固醇、Hcy水平及合并睡眠障碍比例高于健康组，两组比较，差异均有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组研究对象一般资料比较

2.2 ApoE基因型分布及比较 ApoE基因型在AD组和健康组的分布均符合H-W平衡(χ2=3.000、0.686；P>0.05)。AD组携带ε4等位基因比例为30.8%(20/65)，明显高于健康组的13.2%(5/38)，两组比较，差异有统计学意义(P<0.05)。

2.3 AD合并睡眠障碍患者与未合并睡眠障碍患者各临床指标比较 AD合并睡眠障碍组患者的低密度脂蛋白胆固醇、高同型半胱氨酸血症比例明显高于AD无睡眠障碍组，MMSE评分明显低于AD无睡眠障碍组，差异有统计学意义(P<0.05)。见表2。

表2 AD合并睡眠障碍与未合并睡眠障碍患者各临床指标比较

2.4 AD合并睡眠障碍患者危险因素分析 校正后Logistic回归分析结果显示，ε4等位基因、高同型半胱氨酸血症是AD合并睡眠障碍的独立危险因素。见表3。

表3 AD合并睡眠障碍患者危险因素分析

3 讨论

ApoE基因有ε2、ε3、ε4共3种等位基因、6种基因型[9-11]。其中，ε2具有神经保护作用，而携带ε4的人群患AD的风险显著增加[12-13]。ApoE4基因参与调解脑中Aβ聚集和清除，影响脑中脂质转运、葡萄糖代谢、神经元信号传导、神经炎症的发生、线粒体功能[14-15]，但其机制尚未完全清楚。有研究报道，ε4在AD患者中的分布频率为15%～30%[16-17]。本研究结果显示，ε4在AD患者中的分布频率为15.4%，显著高于健康组，提示携带ε4等位基因可能为AD的危险因素。

本研究中，AD组的Hcy水平明显高于健康组。有研究发现，Hcy可预测轻度认知功能障碍向AD转化及认知功能的进行性衰退[18]。当患者发生高同型半胱氨酸血症时，体内产生超氧化物，不仅损伤血管内皮细胞，增加血栓形成，干扰细胞的发育、分化，而且还增加Aβ的神经毒性，诱导Tau蛋白磷酸化，损害神经元功能和突触传递，最终导致认知功能障碍[19]。有研究报道，睡眠时间的缩短、睡眠质量下降均与老年人体内Aβ的增加相关[20-21]。本研究将AD合并睡眠障碍和无睡眠障碍的患者进行比较发现，AD合并睡眠障碍患者的低密度脂蛋白胆固醇水平、高同型半胱氨酸血症的比例明显高于无睡眠障碍的AD患者，且MMSE评分也明显低于无睡眠障碍的AD患者；Logistic回归分析结果显示，ε4等位基因、高同型半胱氨酸血症是AD合并睡眠障碍患者发病的独立危险因素。这提示，ε4、高同型半胱氨酸血症与AD合并睡眠障碍的发病和疾病进展密切相关，可以作为临床监测指标。

综上所述，携带ε4等位基因可增加AD发生睡眠障碍概率，且高同型半胱氨酸血症也是AD合并睡眠障碍的独立危险因素。本研究的不足：纳入患者数量有限，没有纳入痴呆前期患者进行分层研究，没有进行随访数据的采集分析，针对患者睡眠障碍的数据没有进行足够的挖掘分析。因此，仍需继续扩大样本量进行更深入的研究。