矾根叶片组培技术研究

陈 琳,卢秋霜

(河南省安阳市园林绿化科研所,河南 安阳 455000)

1 引言

矾根(Heucheramicrantha)又名珊瑚铃，虎耳草科矾根属，多年生耐寒草本花卉。叶基生，阔心型，叶色有红色、绿色、花叶等；花期4～10月份，粉色小花钟状，花径0.6～1.2 cm，复总状花序。由于其耐寒耐阴，是极好的阴生耐寒性地被植物。其叶片颜色鲜艳，外观迷人，花期较长，具有较高的观赏价值，园林中多用于林下花境、花坛、花带、地被、庭院绿化等。另外，在环境价值上，矾根对环境有着一定的优化作用，据报道，在光照比较充足的时候，矾根可以增加空气的含氧量，还具有吸收空气中大量的有毒物质，为空气增湿，吸取辐射等作用。

2 选材与方法

2.1 选材

2018年，引进莱姆里基、太阳黑子、烈焰等5个品种，通过栽培发现，莱姆里基品种在安阳市过夏困难，在高温下生长不良，易发生病害，致使繁殖困难，栽培两年以来，未见其花芽分化，且所剩无几。与其它品种相比，该品种叶色嫩绿，是室内盆栽观赏的佳品。故本研究以矾根品种莱姆里基为对象，取带病植株上部健康叶片进行组织培养，开展快速繁殖技术研究。

2.2 方法

2.2.1 外植体灭菌

资料上显示，升汞灭菌效果显著[3]，但从保护环境上考虑，对环境污染严重。李川[2]等采用75%酒精进行外植体灭菌灭菌,经探讨研究，采用75%酒精和95%酒精灭菌各50瓶做对比实验。

外植体选取植株上部健康叶片，采用500倍洗洁精清洗，1000倍多菌灵浸泡1 min，1500倍洗衣粉清洗，流水冲洗1 h。然后到无菌操作台上用不同浓度的酒精清洗30 s，灭菌水清洗3～5次，9%次氯酸钠清洗1 min，灭菌水冲洗3～5次，双氧水清洗30 s，灭菌水清洗3～5次，不同浓度的酒清洗30 s，灭菌水清洗3～5次，见图1。结果发现，95%酒精灭菌效果明显优于75%酒精。

图1 灭菌后准备接种的叶片

2.2.2 组织培养

以MS培养基为基础培养基，设置9组6-BA和NAA的不同用量，均添加3%，琼脂0.7%，pH值5.5～6.0， 培养温度：22±2 ℃[3，4]，光照时间为12 h/d,比较芽诱导率，筛选出最适初代培养基。同样，将丛生芽发出较好的初代切分为带3～4片叶的芽簇，转接入9组继代培养基中。观察不同激素浓度对继代生长的影响。试验方案见表1。

表1 培养基编号及激素水平组合

3 结果分析

3.1 外殖体灭菌实验分析

外植体采用75%酒精灭菌，污染率达40%～60%。外植体采用95%酒精灭菌，污染率达5%～15%。比对结果显示，95%酒精灭菌效果明显高于75%酒精的灭菌效果。

3.2 培养基分析

根据表2可以看出，第3组最佳，第6组次之，适合莱姆里基叶片初代培养基为MS+6-BA 3 mg/L+NAA 0.5 mg/L。根据数据显示，6-BA达到5 mg/L后，严重抑制了叶片的出芽率，因此6-BA用量不能过高，见图2。

表2 初代结果

图2 叶片愈伤组织出芽

根据表3可以看出，继代试验第3、6、9组的激素配比相对较好些。其中第3组达到70%。在此基础上，继续对激素配比进行优化，经过筛选，调整继代第3、6、9组激素用量，获得出芽率在85%～99%的激素组合，结果见表4。

表3 继代培养结果

表4 优化后的激素组合及出芽率

经观察调整后的3组培养基发现，第一组分生出芽率高，长势较好，无玻璃化现象。第2组分生出芽率低，长势一般，且有玻化现象。第3组分生出芽率略高于第二组，但长势不如第一组，伴有畸形率升高，玻化现象比第2组严重的现象。

4 讨论

本次实验研究，为抢救性解决矾根品种莱姆里基的扩繁问题，采用叶片进行组培研究。矾根叶片组织培养，虽然在培养周期上较茎尖慢，但在抢救性扩繁上有明显优势，见图3、图4。

图3 继代扩繁瓶苗

图4 叶片生根瓶苗进行分栽

在实验研究中，器皿也是重要因素。生产中常用筒状玻璃瓶或塑料瓶。普通玻璃瓶甁壁厚，在一定程度上影响植物对光的吸收，容易引起玻化现象。同时，筒状玻璃瓶瓶口大，会增加污染几率。而塑料瓶透光性差，重复使用，在清洗过程中导致甁壁模糊，透光性更差。对愈伤组织诱导和增殖方面影响严重，某种程度上还影响植物性状表现。光对植物细胞、组织、器官的生长和分化有着极其重要的作用。不同光质对愈伤组织诱导的效应因植物种类或外植体类型的不同而存在差异。有实验表明，随着玻璃厚度增加，可见光透射比都有不同程度的下降。故而器皿的透光性影响着植物对光的利用率。作为实验研究，还是玻璃三角瓶比较合适。玻璃三角瓶甁壁薄，可见光透射比高，有利于组织培养的各个阶段对光的利用。

4 结论

在试验过程中发现，用95%酒精进行外植体灭菌可以进一步推广应用领域。以叶片为外植体时易出现玻化现象和叶片畸形情况，有待进一步优化激素及培养条件，以获得更好的培养效果。在生根培养时也发现发根点集中在培养基表面，叶片偶有焦边现象，需要深入探索。