超高效液相色谱三重四极杆质谱联用测定食品汤汁中的毒品

王 华，罗达龙，覃 蓝

(梧州市食品药品检验所，广西梧州 543002)

苯丙胺（AMP）、甲基苯丙胺（MA）、3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺（MDMA）、3,4-亚甲二氧基-N-乙基-苯丙胺（MDEA）和3,4-亚甲基二氧基苯丙胺（MDA）为具有苯丙胺结构的物质，该类化学组分具有中枢兴奋的作用，服用后会产生致幻、精神依赖性、食欲不振和拟交感能效应等药理与毒理学特征。在我国，该类物质是受管制的精神活性物质，故滥用潜力较大[1]。氟胺酮（2F-DCK）为氯胺酮苯环上的氯元素被氟元素所取代，在我国氟胺酮不属于管制类药物，在公安侦办的涉毒案中也屡屡查获该物质[2-4]。王世玉等[5]于1987年报道了氟胺酮的合成方法，并证明了化合物氟胺酮具有与氯胺酮类似的麻醉作用。氟胺酮能被归为麻醉活性物质的一种，也存在被滥用的潜力。

为保障人们舌尖上的安全，有必要建立一种操作简单、定性/定量准确、测试灵敏度高的检测方法。对于上述物质目前可用的方法有快检法、高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）和动态液相微萃取（Gas Chromatography/Mass Spectrometry in the Selected Ion Monitoring Mode，GC/MS-SIM)等方法。由于火锅汤中存在的基质种类较多，如净化不完全会使杂质带入系统，产生基质干扰，影响试验回收率，甚至会引起检验结论判断错误和仪器耗损严重。

本研究将乙腈作为提取溶液，使用Captiva EMRLipid固相萃取柱进行净化，并结合UPLC-MS/MS、ACE C18-苯基色谱柱，通过多反应监测（Multiple Reaction Monitoring，MRM）对火锅汤汁中的AMP、MA、MDMA、MDEA、MDA和2F-DCK进行检测。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

安捷伦超高效液相色谱仪1290-三重四极杆液质联用仪6470（美国安捷伦公司），超纯水器（赛多利斯Arium Comfort Ⅱ）；超声仪；高速冷冻离心机；Captiva EMR-Lipid固相萃取柱（1 mL，40 mg，安捷伦科技有限公司）。

乙腈（质谱级，欧姆尼公司）；检验用水为经赛多利斯Arium Comfort Ⅱ纯水机制备的去离子水；苯丙胺类混合标准品购自于安捷伦科技有限公司，质量浓度100 μg/mL；氟胺酮标准品质量浓度100 μg/mL，购买于阿尔塔公司。

1.2 色谱条件

分析用色谱柱：ACE C18-苯基柱（2.1 mm×100 mm，2 μm）；流动相：0.2%甲酸-15 mmol/L乙酸铵（A）-乙腈（B）；流速：0.35 mL/min；进样体积：2 μL；柱温箱温度：35 ；液相色谱流动相洗脱程序：0～ 1.50 min，10% ～ 20% B；1.50～ 3.50 min，20%～35% B；3.51～4.50 min，95% B，后运行时间：1.00 min。

1.3 质谱条件

ESI离子源正模式采集，干燥气体温度与干燥气体流量：150 ，12 L/min；鞘气加热温度与鞘气流量：350 ，12 L/min；喷雾器压力：25 Psi；毛细传输管电压：3 500 V；化合物离子对、碰撞能量AMP：136→ 119（5 V）91（17 V）；MA：150→ 91（17 V）119（5 V）；MDMA：194→ 163（9 V）105（25 V）；MDEA：208→105（25 V）163（9 V）；MDA：180→163（5 V） 135（18 V）；2F-DCK：222→163（20 V） 109（40 V）。

1.4 标准溶液的制备

精密吸取苯丙胺类标准品和氟胺酮标准品各1 mL，置于10 mL经标定合格的容量瓶中，用乙腈溶剂稀释标品溶液至刻度，得到浓度为10 μg/mL的对照品保存液。用乙腈将对照品保存液进行梯度稀释，得到浓度分别为S1：0.02 ng/mL、S2：0.1 ng/mL、S3：0.2 ng/mL、S4：1.0 ng/mL和 S5：2.0 ng/mL的标准溶液。

1.5 供试样品的制备

取火锅汤样品，在9 000 r/min，4 条件下离心4 min，吸取离心后的上层清汤液体5.00 mL至25.00 mL容量瓶，用乙腈溶剂定容至刻度，摇匀。取稀释液约3 mL，在15 000 r/min，4 条件下离心3 min。吸取经离心后的上清液1 mL过EMR净化柱，收集后用有机滤膜过滤，上机测定。

2 结果与分析

2.1 线性关系考察

取本文“1.4”节中配制的S1～S5，按“1.2～1.3”条件，上仪器进行测定，通过仪器采集软件采集各物质的峰面积。以配制的标准曲线浓度（x，ng/mL）为横坐标，采集所得的峰面积（y）为纵坐标，使用仪器自带工作站进行线性回归，各物质线性回归方程如下。AMP：y=34 524.298 821x-755.830 859，r=0.999 2；MA：y=53 280.726 060x-986.025 191，r=0.999 6；MDMA：y=55 132.373 168x-1 236.319 062，r=0.999 7；MDEA：y=34 724.761 291x-761.259 699，r=0.999 2；MDA：y=22 939.079 908x-538.973 499，r=0.999 2；2F-DCK：y=4 1025.108 859x-765.748 774，r=0.999 6,各物质在线性浓度范围0.02～2.00 ng/mL时，物质线性的相关系数均不小于0.995 0。

2.2 回收率试验

将标准溶液加入至空白火锅汤样品中，采用本文“1.5”节方法进行处理，测定AMP、MA、MDMA、MDEA、MDA和2F-DCK 6个物质的回收率，6个物质在0.1～5.0 ng/mL的加标水平下，样品的回收率为83.2%～94.0%，RSD为3.1%～4.6%，见表1。

表1 基质加标回收率结果（n=3）

2.3 定量限与检出限试验

取本文“1.4”节下的标准溶液，进行级别稀释，按“1.2色谱条件、1.3质谱条件”进样测定。当工作站计算被测定物质的信噪比不小于10∶1时，即为定量限；当工作站计算被测定物质的信噪比不小于3∶1时，即得出检出限。由表2可知，6个物质的定量限均为0.1 ng/mL，检出限均为0.03 ng/mL。

表2 定量限与检出限试验结果

2.4 仪器精密度试验

取本文“1.4”节下的标准溶液S3，按“1.2～1.3”条件连续进样检测6次，各物质峰面积的RSD见表3。AMP：RSD=1.5%；MA：RSD=1.6%；MDMA：RSD=1.4%；MDEA：RSD=1.1%；MDA：RSD=1.6%；2F-DCK：RSD=1.6%，表明仪器精密度良好。

表3 精密度试验结果（n=6）

2.5 色谱柱与流动相的考察

方法考察中选择水与乙腈体系、0.2%甲酸水溶剂与乙腈混合体系、0.2%甲酸-15 mmol/L乙酸铵与乙腈溶剂混合体系等组成进行流动相适用性考察，分别在C18色谱柱与C18-苯基柱进行试验。结果发现在0.2%甲酸-15 mmol/L乙酸铵-乙腈作为流动相时，能有效促进6个化合物的电离，6个化合物的峰面积达到最大，且得到更优的灵敏度。而在C18-苯基柱上测定6个化合物得到的色谱峰峰形优于C18色谱柱。因此，选择0.2%甲酸-15 mmol/L乙酸铵-乙腈作为本次试验的流动相，选用C18-苯基柱作为本试验的色谱柱。6个化合物的色谱图见图1。

图1 化合物色谱图

2.6 样品测定

购买市售的火锅汤汁共15份按“1.2～1.5”条件进行前处理并测定，结果15份样品中均未检出AMP、MA、MDMA、MDEA、MDA 和 2F-DCK 6种物质。

3 结论

本研究建立了运用Captiva EMR-Lipid固相萃取柱对火锅汤中的基质进行净化前处理，通过使用液质联用仪的多反应监测模式，结合C18-苯基色谱柱对苯丙胺、甲基苯丙胺、3,4-亚甲基二氧基甲基苯丙胺和3,4-亚甲二氧基-N-乙基-苯丙胺、3,4-亚甲基二氧基苯丙胺和氟胺酮进行定性定量检测。从被测样品的前处理到检验完成整个试验耗时约30 min。本方法具有操作简单、快速、定性与定量准确及灵敏度高等特点，能用于日常检验。本方法使用的固相萃取柱具有高选择性，能有效去除样品基质中的脂质，所含技术为体积排阻和疏水性相互作用的原理对脂质进行净化。脂质的去除能减少对质谱电喷雾离子化的影响，使待测组分在分析过程中不受干扰，以进一步提高检测方法的稳定性与数据的可靠性，减少了仪器的维护成本。