益气扶阳方对高尿酸血症大鼠降尿酸作用的研究*

2021-02-06 10:41陈云梦李弘飞秦慧钊杨保林
中国中医急症 2021年1期
关键词:扶阳益气尿酸

陈云梦 刘 兴 李弘飞 秦慧钊 李 颖 杨保林

(1.北京中医药大学,北京 100029;2.北京中医药大学东直门医院,北京 100700)

高尿酸血症(HUA)是一类由尿酸异常引起的疾病,尿酸盐在体内蓄积可引发多种症状,是多种疾病的发病因素,与痛风、肾结石、慢性肾病、心脑血管疾病的发生、发展密切相关[1],HUA防治越来越受到临床关注。本课题组通过临床观察,发现HUA存在气虚阳虚型,提出HUA气虚阳弱病机[2],并自拟“益气扶阳方”,该方由黄芪建中汤化裁而来,由黄芪、桂枝、芍药、茯苓组成。本实验通过益气扶阳方治疗HUA大鼠,探究益气扶阳方疗效,旨在为临床治疗HUA提供新思路。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康SD成年大鼠,雄性,36只,体质量(268±10)g,由维通利华提供,生产许可证号:SCXK(京)2016-0006,合格证编号:1100111911036818,饲养于北京中医药大学SPF级动物房(温度为25℃,湿度47%,气压在适宜范围内),实验室光照节律,自由饮水及饮食。

1.2 试药与仪器 益气扶阳方,组方:黄芪、桂枝、茯苓、芍药(均购于亳州市佰世信中药饮片有限公司,生产批号分别为180905、190410、181104、181004)。4味药材按比例混合,清水漂洗2次,加蒸馏水2 500 mL,浸泡30 min后,煎煮30 min,收集煎煮液,药渣再加水1 000 mL,煎煮20 min,合并2次滤液,分为3份,分别水浴加热浓缩至含生药0.12、0.24、0.48 g/mL,灭菌,4℃保存备用。腺嘌呤(规格型号:1090725 g,上海源叶生物科技有限公司);乙胺丁醇片(生产批号:T19B030190224,杭州民生药业有限公司);别嘌醇(合肥久联制药有限公司,生产批号:HFJLB0601058092);10%水合氯醛(规格型号:R00 625~100 mL;北京雷根生物技术有限公司);血尿酸(UA)测定试剂盒[生产批号:AUZ5947;货号:OSR6198;Beckman Coulter Laboratory Systems(Suzhou)CO.,Ltd];尿素氮(BUN)测定试剂盒[生产批号:AUZ6219;货号OSR6134;Beckman Coulter Laboratory Systems(Suzhou)CO.,Ltd];肌酐(CRE)测定试剂盒(生产批号:2587;货号:OSR6178;Beckman Coulter,Inc,Brea,CA 92821 USA)。

1.3 分组与造模[3-5]将36只大鼠适应性喂养7 d后,随机分为6组:正常组、模型组、别嘌醇组和益气扶阳方低、中、高剂量组(1.2、2.4、4.8 g/kg),每组6只。在实验过程中,除正常组外,其余各组每天上午以腺嘌呤10 mg/mL+乙胺丁醇25 mg/mL灌胃给药制备HUA模型,每天下午进行药物干预,正常组与模型组给予生理盐水,其余各组给予等体积相应药物,灌胃容积按照体质量换算为10 mL/kg,灌胃21 d,实验期间自由饮食。

1.4 标本采集与检测 1)表征观察:每日观察大鼠一般体征,如毛色、精神状态、四肢关节是否肿胀等,观察并记录。于每周一上午称体质量,记录变化情况。2)UA、CRE、BUN测定:末次给药后第2日使用10%水合氯醛溶液麻醉大鼠行腹主动脉取血,3 500 r/min离心10 min,分离血清,采用全自动生化分析仪检测UA、CRE、BUN水平。3)肾脏组织病理学观察:末次给药后,取大鼠同侧肾脏组织,纵向取材,标本置于4%甲醛溶液中固定48 h,逐级乙醇脱水,二甲苯透明,浸蜡,石蜡包埋,常规制片,行HE染色,光学显微镜观察病理组织变化。

1.5 统计学处理 应用SPSS20.0统计软件。计量资料以()表示。各组UA、CRE、BUN、体质量的总体均数符合正态分布且方差齐,采用单因素方差分析,各组间有差异后组间两两比较采用SNK-q检验。检验水准a=0.05。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 各组表征观察结果 见表1。实验第3周,与正常组相比,模型组、别嘌醇组出现脱毛、毛质粗糙无光泽,蜷卧少动、反应能力差等表现;中药低剂量组、中剂量组、高剂量组大鼠毛质光泽、分布均匀,反应灵敏。各组大鼠均未出现关节肿胀。实验开始前各组大鼠组间体质量比较无统计学差异(P>0.05);造模第2周,各组间体质量出现差异,与模型组相比,各组均有增长;造模第3周,模型组可见体质量下降明显,中、高剂量组大鼠体质量均增长,与模型组相比,差异具有统计学意义(P<0.01);与别嘌醇组相比,中剂量组、高剂量组体质量显著增高(P<0.05或P<0.01)。

表1 各组大鼠体质量比较(g,±s)

表1 各组大鼠体质量比较(g,±s)

注:与正常组比较,*P<0.05;与模型组比较,#P<0.05,##P<0.01;与别嘌醇组比较,▲P<0.05。下同。

组别正常组模型组低剂量组中剂量组高剂量组别嘌醇组n6 6 6 6 6 6第1周270.00±12.24 270.83±8.01 265.00±11.40 265.83±8.61 275.00±10.00 266.67±12.11第2周340.00±23.02 270.00±8.94**308.33±22.50##295.00±13.04 300.83±20.35#295.83±33.82#第3周387.50±17.81 256.67±9.31**305.00±16.43 312.50±19.93##▲315.00±13.80##▲▲286.67±20.41

2.2 各组大鼠血清UA、CRE、BUN水平比较 见表2。UA方面,与正常组相比,模型组明显高于正常组(P<0.05);与模型组相比,益气扶阳低、中、高剂量组和别嘌醇组UA水平显著降低(P<0.01)。CRE、BUN方面,与正常组相比,模型组明显高于正常组(P<0.01);与模型组相比,益气扶阳方中剂量组CRE水平显著降低(P<0.01);与别嘌醇组相比较,益气扶阳方中剂量组CRE、BUN水平降低(P<0.05)。

表2 各组大鼠血清UA、CRE、BUN水平比较(±s)

表2 各组大鼠血清UA、CRE、BUN水平比较(±s)

组 别n UA(μmol/L)CRE(μmol/L)BUN(mmol/L)117.79±18.71 142.96±9.59*101.14±15.62##100.35±4.98##98.27±9.94##94.45±26.87##正常组模型组低剂量组中剂量组高剂量组别嘌醇组6 6 6 6 6 6 16.68±3.04 52.68±4.80**47.20±11.83 37.27±5.97##▲45.50±8.10 47.53±10.16 5.08±0.44 13.27±2.39**12.30±3.19 9.07±1.20##▲10.98±1.78 12.21±1.79

2.3 各组肾脏病理切片比较 见图1,图2。模型组、别嘌醇组大鼠肾小球体积增大,内皮细胞及系膜细胞增生,炎性细胞浸润明显,肾小管内出现蛋白质渗出,部分肾小球内出现空泡样改变;益气扶阳低剂量组可见炎性细胞浸润,中药中、高剂量组未见明显异常。

3 讨 论

图1 各组肾脏组织病理切片(HE染色,200倍)

图2 各组肾脏组织病理切片(HE染色,400倍)

HUA的尿酸临界值尚无确定说法,一般以血清尿酸水平>420 μmol/L,或女性血清尿酸水平>360 μmol/L,男性尿酸水平>420 μmol/L时定义为HUA,部分指南将HUA作为痛风无症状期出现[6]。HUA使用药物干预的时机及目标尚未明确,有研究认为除放射或化疗的恶性肿瘤患者预防性用药、遗传性酶缺乏致尿酸升高、罕见尿酸持续升高(男性>774 μmol/L,女性>595 μmol/L)等特殊情况可采用药物治疗,大部分患者以改变生活方式及观念为主[7]。有学者提出无症状时尿酸水平大于8 mg/dL(476 μmol/L)时,即采用别嘌醇干预[8]。别嘌醇在痛风发作时从低剂量逐渐加量使用,有利于减少痛风发作次数,是痛风发作时的一线用药[9],但别嘌醇干预无症状HUA存在争议[10],因别嘌醇在降尿酸的同时还有严重的过敏反应综合征,以及药疹、发热、肝肾损害甚至出现死亡等不良反应,且随着用药的时间增长易造成蓄积[11]。非布司他较别嘌醇安全,但亦存在肝肾损伤、恶心、皮疹等副作用[7]。对于无症状性HUA,确诊后需干预,采用药物治疗的患者是否获益还需进一步药理研究及循证依据[6],鉴于目前西医治疗方案尚不完善,中医药本着整体辨证论治的原则,具有副作用小,疗效确切等优势。

对于无症状HUA,中医无相应病名、病因及病机的记载,在伴发痛风时归入“历节”“历节”或“热痹”等范畴,多数医家认为无症状HUA病属虚实夹杂,虚为脾肾亏虚,实为痰、瘀、湿热等[12],治疗时以清热利湿,活血通络为基本原则,在此基础上予健脾化痰、补益肝肾[13]。笔者认为HUA属本虚标实证,虚以气虚阳虚为主,后期可见寒、湿、痰等浊毒为害,提出HUA气虚阳微的病机。因课题组在临床中发现部分HUA患者早期尚未发展为明显湿、热、瘀的表现,反而见舌质淡红、舌体微胖、舌苔薄白、脉应指无力等典型气虚表现[14]。气是促进和维持机体正常运行的精微物质,对各脏腑的功能活动及津液的生成、输布、排泄等都起着促进、推动作用,气虚时脾胃运化水液无力,造成水液积聚而成湿、痰、瘀。同时气耗损到一定程度还会导致阳气的虚损,《内外伤辨惑论·饮食劳倦论》云“既脾胃有伤,则中气不足,中气不足,则六腑阳气皆绝于外,故经言五脏之气已绝于外者,是六腑之元气病也”。另一方面随着年龄的增长,阳气会越来越虚弱,故治疗HUA时应注意扶助阳气,阳者生之本,如《医法圆通》云“人活一口气,气即阳也,火也,人非此火不生……阳气流通,阴气无滞,阳气不足,稍有阻滞,百病丛生”[15]。一旦气虚阳弱的病理状态形成,机体既可招风、寒、湿等外邪侵袭,又可内生寒、湿、痰等浊毒之害,这些病理产物浸淫入血后,形成“污血”为害[2],导致HUA,临证应益气扶阳以助增强机体代谢及自御能力[2]。

益气扶阳方由黄芪建中汤化裁而来,其中黄芪、桂枝益气温阳,不仅可使脾的运化水谷精微功能健旺,气血化源充盛,还可温化水湿痰饮,有利于尿酸代谢,更重要的是,益气温阳有助寒、湿、痰、瘀等产物的温化,以防邪留关节、病久及肾。现代药理研究发现,益气扶阳方中4味药均有降低尿酸的作用。黄芪具有抗氧化、促进细胞代谢、利尿消肿、减少尿白蛋白排泄等功效,对缺血性的肾脏有保护作用[16],还可通过改善胰岛素抵抗从而降低尿酸的作用[17]。芍药具有消炎保肝、降压镇痛、抗氧化、免疫调节等作用,吴宗修等[18]根据体质用芍药甘草汤治疗HUA虚证患者,发现芍药甘草汤不仅降低血尿酸浓度,还可调节HUA患者自主神经平衡状态。茯苓中起主要作用的是茯苓多糖和茯苓三萜类化合物,张双金等[19]发现茯苓水提物可通过调节肾脏转运体表达,促进HUA大鼠尿酸的排泄。

本研究运用别嘌呤+乙胺丁醇灌胃造大鼠HUA模型后,模型组相对于正常组,尿酸升高(P<0.05),同时CRE、BUN皆升高(P<0.01);病理切片可见肾小球、肾小管出现病理改变,符合HUA的病理表现,造模成功。本实验结果表明益气扶阳方不同剂量皆有降尿酸的效果,效果与目前降尿酸一线药物别嘌醇相当;生理机能保护方面,益气扶阳方各组大鼠毛质光泽、分布均匀,反应灵敏,中、高剂量组体质量增长明显优于别嘌醇组(P<0.05或P<0.01),中剂量模型大鼠CRE、BUN水平降低(P<0.05),中、高剂量组病理切片与模型组、别嘌醇组比较未见明显肾损害,表明益气扶阳方在清除尿酸时对肾功能有一定保护作用。

本实验验证了益气扶阳方降尿酸的有效性及安全性,其降尿酸的有效性与别嘌醇相当,而对肾脏的保护作用则明显优于别嘌醇,但益气扶阳方降尿酸及保护肾功能的作用机制尚不清楚,还需进一步研究。

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