妊娠高血压综合征患者MTHFR基因C677T多态性与Hcy及肾功能指标的相关性研究*

何丽梅，李海川，仲伟国，傅启华，龚 波△

上海市长宁区妇幼保健院:1.检验科；2.妇产科，上海 200050；3.上海交通大学医学院附属上海儿童医学中心检验科，上海 200127

妊娠高血压综合征(简称妊高征)是妊娠期女性常见的产科疾病之一。妊高征在我国的发病率为9.4%～10.4%[1]，其导致的孕产妇死亡约占妊娠相关性死亡的10%。5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR)是叶酸代谢途径的催化剂，对DNA甲基化和基因调控具有重要作用[2]。研究表明，MTHFR基因C677T突变位于1号染色体(1p36.6)第4外显子，使第222密码子处缬氨酸转化为丙氨酸，可导致血浆叶酸水平下降和同型半胱氨酸(Hcy)水平升高[3]。本研究通过分析MTHFR基因C677T多态性、Hcy以及肾功能指标在妊高征患者中的表达，探讨以上指标对妊高征的诊断价值，以期为临床诊疗提供更为可靠的依据，改善不良妊娠结局。

1 资料与方法

1.1一般资料 选择2018年2月至2019年10月在长宁区妇幼保健院产科住院的妊高征患者86例(疾病组)，按中华医学会妇产科学分会妊娠高血压疾病学组发布的《妊娠期高血压疾病诊治指南(2012版)》的相关诊断标准[4]，即妊娠20周以后出现的高血压，收缩压≥140 mm Hg和(或)舒张压≥90 mm Hg(2次间隔至少4 h，1 mm Hg=0.133 kPa)，同时排除其他妊娠合并疾病，根据病情轻重程度分为妊娠高血压组(30例)、轻度子痫前期组(26例)、重度子痫前期组(30例)3个亚组。妊高征患者年龄21～41岁，平均(31.19±3.93)岁；孕周22～41周，平均(35.91±3.93)周。随机选择同期到该院产检的健康妊娠女性(正常妊娠组)200例，年龄20～42岁，平均(29.72±3.34)岁；孕周22～42周，平均(37.18±3.17)周。选择到该院体检的健康非妊娠女性(健康对照组)150例，年龄22～39岁，平均(30.32±3.58)岁。所有入选对象均无肝、肾疾病及血栓性疾病，半年内未服用影响凝血功能的相关药物，均签署知情同意书。本研究经医院伦理委员会批准。

1.2方法 嘱受试者空腹10 h，采集未抗凝静脉血4 mL，分离血清后在西门子ADVIA Chemistry XPT仪器上采用酶法进行Hcy、尿酸(UA)、肌酐(Cr)及尿素氮(BUN)水平检测，具体操作参照仪器配套试剂盒说明书。采集EDTA-K2抗凝血2 mL收集白细胞层提取DNA，利用Primer Premier 6.0 软件设计MTHFR C677T基因引物序列：正向引物5′-GTGCTGTGCTGTTGGAAGGT-3′，反向引物5′-TCAGC GAACTCAGCACTCC-3′，从NCBI网站获取健康人群的基因序列，预期位置：rs1801133；预期序列：TTGAAGGAGAAGGTGTCTGCGGGAG[C/T]CGATTTCA TCATCACGCAGCTTTTC。将DNA标本送上海允晟医学检验所进行基因测序[采用ABI测序仪(3730×1 DNA Analyzer)]，利用Chromas软件分析测序结果，并与健康人群序列进行比对，找出多态性位点。

2 结 果

2.1不同人群以及不同严重程度妊高征患者Hcy、肾功能指标水平比较 与健康对照组、正常妊娠组相比，疾病组Hcy、UA、Cr和BUN水平明显增高，差异均有统计学意义(P<0.05)。与健康对照组相比，正常妊娠组UA水平增高，Hcy、Cr和BUN水平降低，但差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。与妊娠高血压组、轻度子痫前期组相比，重度子痫前期组Hcy、UA、Cr和BUN水平明显增高，差异均有统计学意义(P<0.05)。与妊娠高血压组相比，轻度子痫前期组Hcy和UA水平增高，差异有统计学意义(P<0.05)，而Cr和BUN水平虽有增高，但差异无统计学意义(P>0.05)，见表2。

2.2MTHFR基因C677T多态性 利用Chromas软件分析测序结果，MTHFR基因C677T有3种基因型：CC基因型、CT基因型、TT基因型。对研究人群的基因型分布进行H-W遗传平衡定律检验，送检的86例妊高征患者的基因型分布符合H-W遗传平衡定律(χ2=0.109，P=0.947)，标本具有本区域群体代表性，见图1。

2.33组不同严重程度妊高征患者MTHFR C677T基因型及等位基因频率分布 妊娠高血压组、轻度子痫前期组、重度子痫前期组基因型及等位基因分布差异无统计学意义(P>0.05)，见表3。

表1 3组人群Hcy、肾功能指标水平比较

表2 3组不同严重程度妊高征患者Hcy、肾功能指标水平比较

2.4MTHFR C677T基因型与Hcy和肾功能指标水平的关系 TT基因型患者的Hcy水平明显高于CC、CT基因型患者，差异有统计学意义(P<0.05)，而CC基因型与CT基因型患者的Hcy水平比较，差异无统计学意义(P>0.05)。此外，3种基因型患者的UA、Cr和BUN水平比较，差异均无统计学意义(P>0.05)。通过Spearman相关分析发现，MTHFR C677T基因型与Hcy呈正相关(r=0.418，P<0.05)，与UA、Cr和BUN无相关性(r=-0.111、0.043、-0.042，P>0.05)，见表4。

图1 MTHFR基因C677T多态性

表3 3组不同严重程度妊高征患者MTHFR C677T基因型及等位基因分布频率[n(%)]

表4 MTHFR C677T 3种不同基因型患者的Hcy、肾功能指标水平比较

3 讨 论

正常情况下，孕6～8周时母体血容量开始增加，至孕32～34周时达到高峰，总循环血量增加40%～50%，血液相对稀释。循环血量的增加致使各重要脏器的灌注量增加，孕晚期子宫动脉的横断面积较非孕期增加2～3倍[5]，肾小球滤过率(GFR)和肾血浆流量(ERPF)代偿性升高，使孕期血液中的Cr和BUN等水平有一定程度的下降。妊高征是妊娠与血压升高并存的一组疾病，是孕晚期产科的常见疾病，在孕20周后出现高血压、水肿和蛋白尿，并且随着病情的加重，其可导致全身多处脏器受累。全身小动脉痉挛和血液高凝是本病主要的病理改变，可导致机体全身脏器有效血流量减少，肾脏供血下降，GFR与ERPF降低，肾脏代谢UA、Cr和BUN明显减少。本研究发现，与健康对照组、正常妊娠组相比，疾病组UA、Cr及BUN水平均明显增高；与妊娠高血压组、轻度子痫前期组相比，重度子痫前期组UA、Cr和BUN水平均明显增高(P<0.05)。由此可见，随着病情进展，肾脏失去代偿功能，血液中的肾功能指标水平明显增加，这表明血清UA、Cr及BUN能够作为妊高征的临床辅助诊断指标，以及成为判断疾病严重程度的一类重要参数。

MTHFR是叶酸转运和代谢的关键酶。MTHFR基因C677T位点和A1298C位点的多态性会造成MTHFR活性降低，造成叶酸代谢异常，并且叶酸水平下降会使Hcy水平升高。研究发现，Hcy可以促进氧自由基的生成，不仅激活血小板的黏附和聚集，损伤血管内皮细胞，还能刺激血管平滑肌细胞增殖[6]，使血管内胶原成分增加，血管壁增厚，破坏血管顺应性。此外，Hcy还可抑制胱硫醚γ裂解酶活性，减少内源性血管舒张剂硫化氢的生成[7]，这些因素可促进妊高征的形成。有研究报道，MTHFR基因A1298C位点[8]多态性与Hcy无相关性。本研究从MTHFR基因C677T位点入手，发现MTHFR基因C677T多态性与UA、Cr及BUN无相关性(P>0.05)，与Hcy有一定的相关性(P<0.05)，且TT基因型患者的Hcy水平明显高于CC、CT基因型患者(P<0.05)。妊高征患者Hcy水平明显增高(P<0.05)，并与病情严重程度呈正相关，与高同型半胱氨酸血症的存在加重妊高征疾病的发展相一致[9]。

综上所述，妊高征患者血清Hcy及肾功能指标水平明显增高，且在重症患者中升高更为明显，能够作为妊高征辅助诊断、病情监测及预后判断的重要指标。MTHFR基因C677T多态性和妊高征患者血清Hcy水平有一定的相关性，且纯合型(TT基因型)患者血清Hcy水平显著增高，检测MTHFR基因C677T多态性可为妊高征患者病情严重程度评估及预后判断提供一定依据。