HPLC法测定金盏银盘中金丝桃苷的含量

姜启娟，王冰冰，殷 丹

（通化市食品药品检验所，吉林通化 134001）

1 仪器与试药

仪器：高效液相色谱仪（型号：日本岛津L C-2010AHT）、电子天平型号（BT25S 感量：0.1/0.01mg北京赛多利斯仪器天平有限公司）；对照品：金丝桃苷（111521-201507 、含量：以94.3%计；产地：中国食品药品检定研究院）；水（自制纯化水）、乙腈（色谱纯）、甲醇、乙醇（分析纯）

2 色谱条件及溶液的制备

2.1 色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18（直径4.6 mm，长度250mm，粒径5μm），以乙腈-3%冰醋酸溶液（13：87）为流动相；检测波长为360nm。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备

取金丝桃苷对照品，精密称定，置量瓶中，加60%乙醇溶液制成浓度为每1ml含20µg的溶液，摇匀，过滤，取续滤液作为对照品溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备

精密称取金盏银盘粉末约1g(过四号筛)，置具塞锥形瓶中，精密加入60%乙醇溶液25ml，称定重量，加热回流提取1小时，放置室温，再称定重量，用60%乙醇溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液10ml，置分液漏斗中，用石油醚（60～90℃）40ml，分2次洗涤，弃去石油醚液，合并两次乙醇液，回收溶剂至近干，残渣加甲醇溶解并转移至10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。

3 方法学验证与结果

3.1 标准曲线的制备

标准曲线母液的制备：取金丝桃苷对照品约10mg，精密称定，置25ml容量瓶中，用60%乙醇溶液溶解稀释至刻度，摇匀，再精密量取12.5ml置50ml量瓶中，用60%乙醇溶液溶解稀释至刻度，摇匀作为母液。

标准曲线溶液的制备：用刻度吸管吸取母液1.25、2.5、5、7.5、10ml，置25ml容量瓶中，加60%乙醇溶液至刻度。精密吸取上述溶液各10µl进样，结果以对照品量为横坐标，以峰面积为纵坐标，计算所得回归方程及数据见表1。

3.2 进样重复性试验

取同一供试品溶液，按拟定的色谱条件连续测定6次。结果色谱峰面积数据和RSD值见表2。

表1 标准曲线数据

表2 进样重复性试验结果

3.3 重复性试验

取同一供试品6份，按所拟定方法独立测定6次，结果金丝桃苷的平均含量数据和RSD值见表3。

3.4 耐用性试验（稳定性考察）

精密吸取同一供试品溶液10μL，分别在0，3，6，12，16h进样，结果色谱峰面积值数据和RSD值见表4。

3.5 准确度

取同一浓度的供试品（含量为0.04%）共6份，每份精密称取约0.5g,分别加入金丝桃苷对照品适量，按供试品溶液制备的方法制备，按拟定的方法测定，结果金盏银盘中金丝桃苷回收率数据和RSD值见表5。

表3 重复性试验结果

表4 耐用性试验 （稳定性）结果

4 讨 论

4.1 试验参数波长的确定

取金丝桃苷对照品60%的乙醇溶液，经UV-2450型紫外-可见分光光度计在200nm～400nm范围内测定，结果金丝桃苷最大吸收波长在360.20nm和256.80nm处，同时参照《中国药典》2015年版一部[1]高效液相色谱法测定菟丝子中金丝桃苷的含量，测定波长为360nm， 故选择了波长为360nm。

4.2 流动相的选择

流动相考察了乙腈-0.1%磷酸溶液（13:87）、乙腈-3%冰醋酸溶液（13:87）、乙腈-甲醇-四氢呋喃-0.5%醋酸溶液（1:1:19.4:78.6）为流动相，结果表明以乙腈-3%冰醋酸溶液（13:87）为流动相峰形好，保留时间适度，分离度、拖尾因子均符合规定，供试品主峰能与杂质峰得到基线分离。用二极管阵列检测器对色谱峰纯度进行检测，供试品中金丝桃苷色谱峰在阈值范围内。故选用此流动相为本试验的流动相。

表5 准确度测定结果（n=6）