三味拳参口服液中氧化苦参碱、苦参碱薄层鉴别检测方法研究

郭艳钦，王梦雪，李云波，杜西翠，李泽庭，张 趁，刘格格，武 珊，位寿朋，李莹洁，肖亚彬，李淑娜，边青岩

（1.河北锦坤动物药业有限公司，河北 辛集 052360；2.河北省兽用中药制剂技术创新中心，河北 辛集 052360；3.河北省兽药监察所，石家庄 050035；4.辛集市动物疫病预防控制中心，河北 辛集 052360；5.乐亭县农业农村局，河北 乐亭 063600；6.饶阳县农业农村局留楚动物防疫站，河北 饶阳 053900）

中药苦参为豆科植物苦参（Sophora flavescens Ait.）的干燥根。春、秋二季采挖，除去根头和小支根，洗净，干燥。性苦、寒。归心、肝、胃、大肠、膀胱经。具有清热燥湿、杀虫去积、利水的功效。主治湿热泻痢、黄疸、水肿、疥癣[1]。

苦参中含有大量的生物碱，其中苦参碱和氧化苦参碱含量最高，加起来占苦参药材根总干重的2%，其中大部分以氧化苦参碱形式存在，同时还有其他相近的生物碱[2]。

三味拳参口服液为兽药成方制剂，收载于《兽药质量标准》（2017 年版）中药卷。由拳参、穿心莲、苦参三味中药提取浓缩而成。具有清热解毒、燥湿止痢的功效，主治湿热泄泻[3]。《兽药质量标准》规定了氧化苦参碱薄层鉴别方法，但在实际检测中发现，按照该标准规定方法进行薄层检测时，氧化苦参碱对照品斑点在原点位置，无法根据氧化苦参碱对照品斑点判定样品是否合格。通过多次试验摸索，对原标准检测方法进行了改进：在三氯甲烷加入前调节pH 对电极损伤比较小；样品制备过程中用超声提取代替加热回流提取；展开过程用极性比较大的甲醇代替丙酮。改进后的方法可以达到比较满意的检测结果，现介绍如下。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

AUW220D 型十万分之一电子分析天平，感量为0.000 01 g，岛津国际贸易有限公司生产；KH-500E 型超声波清洗器，昆山禾创超声仪器有限公司生产；DK-98-Ⅱ型恒温水浴锅，天津市泰斯特仪器有限公司生产；硅胶G薄层板，青岛海洋化工厂生产；层析缸，上海信谊仪器厂有限公司生产。

1.2 试剂

苦参碱对照品，中国食品药品检定研究院提供，含量为98.7%，产品批号为110805-201709；氧化苦参碱对照品，中国食品药品检定研究院提供，含量为92.9%，产品批号为110780-201909；三味拳参口服液样品，河北锦坤动物药业有限公司生 产， 产 品 批 号 为 20191201、 20191202、20191203；三氯甲烷、浓氨溶液、乙醇、苯、丙酮、甲醇、乙酸乙酯等均为分析纯；试验用水为高纯水。

2 方 法

2.1 改进前方法

2.1.1 溶液的制备

（1）氧化苦参碱对照品溶液：精密称取氧化苦参碱对照品适量，加乙醇溶液制成含量为1 mg·mL-1的溶液，即得。

（2）供试品溶液：取三味拳参口服液10 mL，加三氯甲烷25 mL，摇匀，然后加浓氨溶液调pH至9.5，加热回流1 h，放冷，取三氯甲烷液蒸干，残渣加乙醇2 mL使溶解，即得。

2.2 改进后方法

2.2.1 溶液的制备

（1）氧化苦参碱对照品溶液：精密称取氧化苦参碱对照品适量，加乙醇溶液制成含量为1 mg·mL-1的溶液，即得。

（2）苦参碱对照品溶液：精密称取苦参碱对照品适量，加乙醇溶液制成含量为1 mg·mL-1的溶液，即得。

（3）供试品溶液：取三味拳参口服液10 mL，先加浓氨溶液调pH 至9.5，再加三氯甲烷25 mL，摇匀，超声（220 V/50 Hz）提取30 min，放冷，取三氯甲烷液蒸干，残渣加乙醇2 mL 使溶解，即得。

3 结 果

3.1 改进前薄层色谱层析结果

吸取2.1.1 中氧化苦参碱对照品溶液和供试品溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G 薄层板上，以苯-丙酮-乙酸乙酯-浓氨试液（2∶3∶4∶0.2）为展开剂，展开，展距为10.5 cm，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液显色。显色结果见图1。

3.2 改进后薄层色谱层析结果

吸取氧化苦参碱对照品溶液、苦参碱对照品溶液、供试品溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以苯-甲醇-乙酸乙酯-浓氨试液（2∶3∶4∶0.2）为展开剂，展开，展距为10.5 cm，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液显色。显色结果见图2，在供试品色谱中，与对照品色谱相应位置上显示相同颜色的斑点。

图1 改进前薄层色谱层析结果

4 讨 论

4.1 pH调节

在实际检测过程中发现，样品加入三氯甲烷后调节pH，对电极损伤非常大，认为先调节pH后再加三氯甲烷更为合理，改变方法后对试验结果没有影响。

4.2 样品制备过程

原标准是加热回流1 h，其过程可能会造成氧化苦参碱转化成苦参碱。陆蕴如等[4]研究了苦参在复方中化学成分的变化，结果表明，含苦参的复方制作成制剂时，受水、加热等因素及与共存的还原性成分的作用，使氧化苦参碱含量逐渐降低直至消失，苦参碱含量逐渐增加。室温超声提取[5]时，薄层色谱法可以检出明显的氧化苦参碱斑点。因此将样品制备方法加热回流1 h 改为超声（220 V/50 Hz）提取30 min，效果更好。

4.3 展开剂选择

原标准展开剂为苯-丙酮-乙酸乙酯-浓氨试液（2∶3∶4∶0.2），展开显色后，氧化苦参碱对照品在原点位置形成一个橙红色斑点，没有得到上行展开的斑点，根据对照品无法判定样品斑点中是否有氧化苦参碱斑点，从而无法得出产品是否合格的结论。经过多次试验摸索，将展开剂[6]中的丙酮用极性比较大的甲醇代替，其他色谱条件不变，展开显色后，氧化苦参碱和苦参碱都可以得到清晰的斑点。

图2 改进后薄层色谱层析结果

5 结 论

综上所述，三味拳参口服液氧化苦参碱薄层鉴别法在原标准基础上，经过改进，样品制备方法更加简单、快捷，可在很大程度上减小对检测结果的影响。薄层展开结果比较理想，可以得到清晰的氧化苦参碱和苦参碱斑点，从而可以对氧化苦参碱和苦参碱两种成分进行质量控制。希望本研究结果可对以后该标准修订提供有价值的参考。