巴音布鲁克羊包虫病感染情况的血清流行病学调查

党娜娜，哈西巴特，姜 媛，呼尔查,3，巴音查汗★

（1.新疆农业大学动物医学学院 830052；2.和静县畜牧兽医站 841300；3.新疆农业大学动物科学学院 830052）

棘球蚴又称包虫，是棘球绦虫的中绦期，寄生于牛、羊、猪、人及其他动物的肝、肺及其他器官中，属人畜共患寄生虫病，该病呈世界性分布。 包虫囊肿大，生长旺盛，在人类和动物体内的任何部位都可能寄生， 可使周围组织受到压迫而引起萎缩和功能障碍，甚至感染，在蚴囊破裂的情况下还会导致引发过敏反应甚至家畜死亡[1-4]，在我国主要是细粒棘球绦虫[5]，它在植被茂密的高山草甸或草原地区， 干旱少雨的牧区以及气候寒冷的半农牧区尤为常见；从整体分布来看，家畜的包虫病发病率在西部较高[5，6]。 在我国，主要分布在新疆、四川、青海、西藏、甘肃、宁夏和内蒙的牧区和半农半牧地区，包虫病报告病例分析中，来自以上流行省份的病例占全国总病例数的71%[7]。 其中努斯来提等[8]有对新疆14 个地州牛、羊、犬包虫病的感染情况进行了调查统计，羊包虫病的感染率为50.24%。 巴音布鲁克羊作为新疆和静养殖大县的优势绵羊，养殖量占全县总牲畜量的80%，也是棘球蚴病高发区。 此前，当地技术人员哈西巴特[9]、席耐[10]、薛新梅[11]对和静县牛、羊、犬棘球蚴病也做了有关调查研究，和静县当地羊包虫病感染情况不容乐观，严重危害畜牧业生产和人类健康，给当地造成巨大的经济损失。

该病的诊断方法主要有病原学诊断[12]、血清学诊断、病理组织学诊断， 其中血清学诊断目前在巴音布鲁克羊包虫病调查研究还未有过， 对和静县巴音布鲁克羊包虫病的流行病学调查具有重要意义[13-15]。 新疆和静县位于新疆中部，巴州北部，地处天山南麓，县境地域辽阔，其中大部分为山地高原，占92.6%，小部分为绿洲平原，占7.4%。作为拥有上百万巴音布鲁克羊的中国西部畜牧大县，新疆和静县特殊的地理环境和当地不同的养殖方式，给寄生虫的繁殖带来了便利， 虽然近几年牧民驱虫意识有所提高，但当地巴音布鲁克羊细粒棘球蚴病的流行仍呈上升趋势。 对此，本研究采集涵盖和静县12 个乡镇共36 个行政村（牧场）的巴音布鲁克羊血液， 采取血清学调查分析当前和静县细粒棘球蚴病的感染情况和流行特点， 为下一步和静县对包虫病的防控工作提供参考数据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验材料与试剂

羊棘球蚴（包虫）病间接ELISA 检测试剂盒购自重庆澳龙生物制品有限公司，包括有血清稀释板、抗原包被板、样品稀释液、浓缩洗涤液、酶标二抗、底物、阳性对照血清、阴性对照血清、终止液、封板膜等；采血器、离心管、移液枪、酶标仪、枪头、恒温箱、吸水纸。

1.1.2 被检血清

涵盖和静县12 个乡镇共36 个行政村、 牧场随机抽样采集巴音布鲁克羊血清184 份，分离血清，置-20℃冰箱备用。

1.2 试验方法

1.2.1 样品处理

血清：从各地采集来的血液应呈45 度角倾斜，室温静置一段时间，离心5min(3000r/min)。仔细收集上清液，将清亮无溶血的血清置-20℃备用。

1.2.2 操作步骤（间接ELISA 检测实验）

间接ELISA 试验步骤包括，待检血清样本的编号：将待检血清样品按序编号，每板设阴性、阳性对照各2 孔；试验用试剂的配制：使用前将试剂盒内的试剂（酶标二抗除外）恢复至室温。25 倍浓缩的稀释液略微加热至盐完全溶解，然后用蒸馏水作25倍稀释。 酶标二抗在使用前用样品稀释液按照1∶100 倍稀释，现配现用；待检样品、对照样品的稀释：阴、阳性对照样品与待检样品均在血清稀释板中按照1∶50 倍稀释（本试验147μL 样品稀释液中加3μL 待检血清样品）； 将稀释后的血清移至抗原包被板中： 分别将稀释好的待检样品和对照样品各取100μL 移到抗原包被版中，阴性对照和阳性对照各设2 孔，置37℃温育30min；第一次洗板：甩掉板中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200μL，静置1min 弃液，再在吸水纸上拍干，重复洗板3 次；加酶反应：每孔加入稀释好的酶标二抗100μL，置37℃温育30min；第二次洗板：甩掉板中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200μL，静置1min 弃液，再在吸水纸上拍干，重复洗板3 次；显色反应：每孔加入等体积混合好的底物溶液A 和底物溶液B100μL， 避光显色10min；最后终止反应：每孔加入终止液50μL，终止反应。

测定：在终止反应10min 内用酶标仪于450nm 波长依次读取每孔的吸光度（OD 值）。

1.2.3 实验结果的判定

结果判定标准，即有效实验结果应同时满足：标准阳性对照孔平均OD450nm≧0.6；标准阴性对照孔平均OD450nm≦0.3。

细粒棘球蚴 （包虫） 病血清学检验结果判定标准： 样品OD450nm≦0.3，判为阴性，样品暂未患有细粒棘球蚴（包虫）病；样品0.6≧OD450nm≧0.3，判为弱阳性，对应样品处于细粒棘球蚴感染初期，尚未形成包囊或包囊不明显；样品OD450nm≧0.6，判为阳性，对应样品应处于细粒棘球蚴感染后期，并形成较明显的包囊。

2 结果

巴音布鲁克羊包虫病血清间接ELISA 检测184 份血清，血清学检测结果显示巴音布鲁克羊包虫病感染率为20%。 统计结果见表1、2。

表1 血清阳性率统计结果

表2 年龄阳性率统计结果

3 讨论

棘球蚴在生长发育过程中必须要通过犬科动物和食草动物共同完成，例如牛、马、羊等。 其终末宿主为犬、狐狸、狼等犬科动物[16]；细粒棘球绦虫的中间宿主感染率最高的是绵羊，除其本身最易感外，还与牧羊犬经常密切接触，在草地上吃到虫卵的机会多，而牧羊犬又常可吃到绵羊的内脏，因而形成循环感染。 在冬季和春季动物多出现死亡[17，18]。 在巴音布鲁克大草原及地势险要的山区（巴伦台、克尔古提乡、阿拉沟乡）的自然放牧环境里，土尔扈特牧羊犬几乎家家都有，当地也时常有狐狸、狼等野生动物出没，这给包虫病的流行提供了条件[9]。

在生产过程中，一般情况下可使用细胞免疫（Casoni 皮内试验）、 酶联免疫吸附试验 （enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）、间接红细胞凝集试验（indirect haemagglutin ationtest，IHA）、沉淀反应、抗体定量和蛋白质印迹试验（Western Blotting，WB）、间接免疫荧光试验（indirect fluorescent antibody，IFA）等多种免疫学诊断方法[19，20]进行确诊。本试验采用的间接ELISA 试验方法是Farag 在1975 年最早将ELISA 用于包虫病的诊断， 该方法的敏感性为88.2%，特异性为88.5%[21]。 该试验为高灵敏度检测技术，结果可定性也可定量表示，可检测抗体、抗原或特异性复合物，比IHA 操作较复杂。 动物棘球蚴病诊断技术（NY/T1466-2007） 中将IHA 和ELISA 的诊断作为我国绵羊和牛棘球蚴病诊断的国家标准[22]。

从试验结果来看，巴音布鲁克羊包虫病感染情况较普遍，海拔较低牧区感染率最高达到33%，牧区感染率（感染率21%）高于农区（感染率11%）。 造成感染率不同的原因可能是A 犬的管理方式不同：农区养殖户的犬基本都圈养，很少有随意走动的犬出现；牧区养殖户的犬基本都放养，很少有圈养起来的。 牧民对野生动物保护的意识加强，狐狸、狼的繁殖增加，粪便分布在草原上增多，这些无形间加大细粒棘球蚴的感染风险，利于包虫病的流行。 薛新梅,等（2020）在她对和静县绵羊棘球蚴的相关研究中发现牧区感染率明显高于农区[11]，此次试验检测结果得出了与其相似的结果。

成年羊（感染率22%）高于当年出栏羊羔（感染率13%）。 此结果有可能是不同年龄羊与牧羊犬活动范围接触时间长短有关。 有报道显示宿主自身抵抗力与细粒棘球蚴的感染情况可能有关[22]。

本次实验得出农区与牧区包虫病感染率不同的原因可能为：农区羊、犬基本都属圈养，羊、犬的接触较少，阻断传播途径。防控难度有大有小：农区住户集中，利于驱虫预防宣传；牧区巴音布鲁克高山草原地势相对平缓且羊群数量集中， 利于集中防治；但巴伦台、阿拉沟、克尔古提山势陡峭，其特殊的自然气候环境更适宜包虫病的生长，住户分散，不利于当地基层兽医技术人员驱虫防治工作开展， 这也是导致本区域感染率最高的原因之一。 巴音布鲁克地区牧区高海拔昼夜温差大， 冬季最低气温可达-45℃[23]， 很多牧民选择在入冬时将羊群转场至农区或低海拔地带过冬，来年开春后再转回牧场，这又间接减少使羊群感染的几率，而巴伦台等山区由于气温相对较高，牲畜可以抵御冬天严寒气候，所以大部分不转场，增加羊群感染几率。

根据检测结果的分析，笔者认为，巴音布鲁克地区的细粒棘蚴的防控要点主要集中在对犬的管理，要求广大群众做到“犬犬投药，月月驱虫”，并栓养犬，管理好犬粪便；注意病死羊的处理，要求严格按照无害化处理，坚决不能把病变脏器直接喂犬。 加强基层兽医人员的专业知识水平，人与犬等动物接触时，应注意个人卫生。 加大包虫病的宣传力度，让广大牧民都参与进来，共同防控。 由于和静县地理环境跨度大，应分类合理制定适合当地各乡镇区域的包虫病防控措施。

最后， 本次调查试验不足之处在于因牧民放牧基本是轮牧状态，采样有一定难度，采样基数相对较少。 但由于是随机取样，并且专门针对采集巴音布鲁克羊，采样覆盖很均匀。 总体来说，虽然基数相对较小，但有一定科学研究价值。 此次对巴音布鲁克羊包虫病的随机覆盖采样通过血清学诊断调查为首次， 为以后巴音布鲁克羊包虫病的防控工作提供参考依据。

4 结论

本次间接ELISA 检测检出和静县地区的巴音布鲁克羊棘球蚴阳性率为20%；不同养殖方式下羊棘球蚴阳性率存在差异，牧区高于农区。 地处巴音布鲁克山区的羊群感染率高于草原地区的羊群；成年羊感染率高于羔羊。