环介导等温扩增技术对慢性阻塞性肺疾病急性加重期机械通气患者病原菌检测的研究

刘东育 赵洪伟 李丽丽 马庆庆(通信作者)

563000贵州航天医院重症医学科，贵州遵义

慢阻肺可以分为稳定期和急性加重期，慢阻肺的主要症状是咳嗽、咳痰、喘息、气短，在稳定期患者症状比较轻微，药物治疗能有效对病症进行抑制。而急性加重期就表现在患者短期内出现咳嗽加剧，痰多，喘息加重，咳痰呈脓性痰等并且伴随着发热等炎症症状，这就是临床所说的慢阻肺急性加重期(AECOPD)。AECOPD 的主要原因可以归结为感染和空气污染，其中感染占50%～70%，同时也有大概1/3 的患者找不出致病因。AECOPD 发作时一般常用药物或增加常用药物剂量服药依然达不到控制病症的效果。临床中也常将呼吸困难、咳脓痰等症状持续2 d的病症判定为急性较重。而因为急性加重期出现的症状与很多疾病容易混淆，如肺炎、气胸、胸腔积液等症状有相似之处，所以在临床中很容易误诊，最终延误治疗，导致病情加重。同时我们知道对于感染的有效抑制使用针对性的抑菌治疗，才能对病菌起到抑制作用。所以在使用选择抗菌药治疗前需确认病菌的类型，再合理适量地运用抗菌药。AECOPD 患者及时有效的机械通气可迅速有效改善通气状况[1-5]。但AECOPD 主要由下呼吸道感染引起，及早合理使用抗菌药是控制病情、提早拔管的关键。所以提前进行检测，先确定再用药是非常必要的。为满足试验要求，本课题选取2017年1月-2019年12月收治的AECOPD 机械通气患者的下呼吸道痰标本65 份，进行病原菌检测，现报告如下。

资料与方法

本课题为满足试验要求挑选的研究对象全部来自我院2017年1月-2019年12月收治的AECOPD 机械通气患者的下呼吸道痰标本65 份，男34 例，女31 例；年龄58～89 岁，平均(72.81±6.64)岁。

方法：对于行气管插管的患者，即刻(第1天)留取深部痰液，用一次性配有标本收集瓶的无菌吸痰管通过气管插管或者内套管进行吸引，然后采集下呼吸道的分泌物，装入标本收集瓶，并立即送到细菌培养室。对每份标本行常规痰培养并同时使用LAMP 快速检测AECOPD 下呼吸道13 种病原体。第5 天后再次留取深部痰液标本送细菌常规培养及LAMP快速检测下呼吸道13种病原体。

统计学处理：数据应用SPSS 17.0 软件处理；配对的计数资料之间两两比较采用McNemarχ2检验，P＜0.05 为差异有统计学意义。

表1 第1天LAMP法与常规痰培养法检测结果比较(n)

表2 第1天LAMP技术和培养法对各种病原菌检出率的比较[n(%)]

结果

第1天LAMP法与常规痰培养法检测结果比较：LAMP 法的总阳性率为61.5%，高于培养法的38.4%，差异有统计学意义(χ2=2.067，P＜0.05)。见表1。

第1天LAMP技术和培养法对各种病原菌检出率的比较：LAMP 技术检测肺炎链球菌、铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌、鲍曼不动杆菌、嗜麦芽窄食单胞菌的阳性率均高于培养法，差异有统计学意义(P＜0.05)。见表2。

机械通气第1 天与第5 天病原菌分析：本组2 个时段检测的病原菌无明显差异，痰培养法不同时间检测出的病原菌比例无统计学差异，与报道相符。LAMP 法第5 天检出病原菌比例明显升高，达80%阳性率。LAMP 技术已可检测多种病原体，检出率明显高于传统痰培养法。

讨论

慢性阻塞性肺疾病是一种慢性气道炎症性疾病，是由于慢性支气管炎，在受到气流的持续限制后被诊断为慢阻肺。患有慢阻肺会出现慢性咳嗽，在早晨表现明显，在夜间也有阵发性咳嗽，是一种终身性疾病。当病情急性发作时，会增加痰量，有时还会出现脓性痰，严重者可出现气喘、呼吸困难等症状。慢阻肺患者肺功能较差，肺内存在慢性炎症改变。临床分缓解期和急性加重期。AECOPD 是指慢阻肺患者咳痰喘的症状较重，伴或者不伴发热。慢阻肺患者肺内存在菌群，患者急性加重多因感冒等因素导致免疫力下降。AECOPD是指一种急性起病的过程，其特征为患者呼吸系统症状恶化，如呼吸困难、咳嗽、咳痰等症状加重，导致需要改变药物治疗。大量研究表明[6-8]，感染是AECOPD的最常见诱因。

痰培养主要是检查有无致病菌感染。痰液是气管、支气管的分泌物或肺泡内的渗出物。正常情况下，肺泡、支气管和气管可有少量分泌物，当呼吸道黏膜受到刺激时，分泌物增多，痰量也就增多。通过痰液检测可以发现许多问题，比如致病菌、寄生虫、血液等均能反映呼吸道疾病情况。痰培养尤其适用于呼吸道炎症、支气管扩张、肺结核、肺寄生虫病等的诊断。痰培养迄今仍是临床上应用最普遍的病原学检测方法。虽然痰培养能提供病原学依据并指导抗菌药物治疗，然而这种方法存在实验周期长以及特殊细菌无法测出的不足。

本研究是对诊断AECOPD 进行机械通气患者不同时段利用LAMP 技术进行病原体快速诊断体系的研究。LAMP 技术已经检测多种病原体，检出率明显高于传统痰培养法。本研究针对AECOPD机械通气患者的下呼吸道常见的13 种病原体设计引物，利用含LAMP 技术的基因芯片进行核酸扩增，作为快速、准确的病原体检测方法，LAMP 检测技术可在2 h内检测出感染病原菌，使患者及早得到有效治疗，控制病情，提早拔管，缩短ICU住院治疗时间。

LAMP 技术检测的肺炎链球菌、铜绿假单胞菌、流感嗜血杆菌，嗜麦芽窄食单胞菌的阳性率均高于培养法。

LAMP 技术检测的病原菌与我院院感科提供的院感病原菌(痰培养及血培养结果)基本符合。该方法的建立为临床AECOPD 进行机械通气患者的下呼吸道感染致病菌检测，提供了准确快捷实用的新途径。