盖文燕,侯显涛,秦晓庆,刘红芹,王 芳,王宝杰
(山东畜牧兽医职业学院,山东 潍坊 261061)
近年来,随着我国经济的增长,宠物行业得到了迅猛的发展,宠物已经成为人们生活的伴侣,在人们的生活中扮演着重要的角色,越来越多的人开始养宠物,主要以犬猫为主。根据2020年中国宠物行业白皮书数据显示,2020年全国城镇宠物犬猫数量较2019年增长1.7 %,首次突破1亿只大关。与此同时,宠物带来的人兽共患病也接踵而至。犬猫作为宠物所传播的人兽共患病寄生虫病也应该引起重视。犬猫寄生虫病与人类的健康和畜牧业的发展密切相关,有效的对犬猫人畜共患寄生虫病检测是疾病防控的关键。因此,了解掌握犬猫人兽共患寄生虫病检测技术的研究进展,对人们有效的掌握犬猫人兽共患寄生虫病的流行现状、制定该病的防控计划和措施具有重大的意义。
弓形虫病是由刚地弓形虫引起的一种人兽共患寄生虫病,呈世界性分布,几乎可感染包括人类、犬、猫在内的温血动物。其中,猫在弓形虫 病传播过程中扮演者重要的角色。在我国犬猫弓形虫的感染率为14.06 %~78 %[1]。
常用的病原学诊断有涂片镜检和接种动物。
免疫学诊断方法主要包括免疫荧光试验(IFT)、间接血凝试验(IHA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)。宋世斌等[2]用IHA方法对兰州市城关区3家宠物诊所就诊犬和兰州市流浪犬共计439份血清样品进行检测分析。结果表明,3家宠物诊所就诊犬感染率分别为7.1 %、6.9 %、6.5 %,均低于平均感染率7.5%,流浪动物救助站流浪犬感染率为10.2 %。谭丹等[3]用ELISA方法对长沙市宠物监测点的犬血清样品进行弓形虫抗体检测,2017年共抽检血清样品707份,抗体阳性率为9.34 %;2018年抽检血清样品711份,抗体阳性率为8.02 %。
分子生物学诊断方法包括聚合酶链式反应(PCR)、RT-PCR、N-PCR和环介导等温扩增技术(LAMP)等。LAMP是犬猫弓形虫病常用的检测方法,其敏感性和特异性较高,且检测速度快,有望成为犬猫弓形虫病临床诊断的主要手段之一。宇芙蓉等[4]根据弓形虫WH6弱毒株速殖子表面抗原1的基因序列建立了LAMP方法,发现LAMP方法的特异性高,其敏感性比普通PCR高100倍。
旋毛虫病是由旋毛虫寄生于动物体内引起的一种危害严重的食源性人兽共患寄生虫病。全球有21.9 % 国家的家畜和33.3 % 国家的野生动物会感染旋毛虫病,该病对人的致死率大约为0.2 %[1]。犬猫因食用含有旋毛虫包囊的动物肉制品、尸体和粪便而感染。
病原学诊断包括镜检法和集样消化法。集样消化法是欧盟肉类旋毛虫检验唯一推荐方法。刘莉娜等[5]用压片镜检法和人工消化法检测河南省郑州市屠宰厂犬的膈肌样本403份,结果显示,两种方法均未检出旋毛虫幼虫。
ELISA是最常用的旋毛虫病免疫学诊断方法。蒋成玉等[6]用ELISA检测犬血清样品44份,猫血清样品36份,检出犬旋毛虫抗体阳性血清6份,感染率为17.6 %;检出猫旋毛虫抗体阳性血清4份,感染率为12.9 %。
分子生物学诊断方法包括PCR、荧光实时定量PCR和LAMP等。PCR对于了解犬猫旋毛虫流行病学,评估人类接触感染相关风险,以及追溯感染源等具有重要的意义;荧光实时定量PCR方法的特异性高,且与肌肉组织和其它寄生虫无交叉反应,适用于犬猫旋毛虫病的常规检测;LAMP方法快速、敏感性较高,可用于犬猫旋毛虫病的流行病学调查。黄芸等[7]根据ITS-2基因设计引物,建立了LAMP方法,结果表明,LAMP方法的敏感性高于PCR检测方法,并与其它寄生虫无交叉反应。
包虫病又称棘球蚴病,是由寄生于犬科动物的棘球属虫种的幼虫(棘球蚴),寄生于动物和人的肝脏、肺及其他器官引起的一种危害严重的人兽共患寄生虫病。犬等终末宿主排出棘球蚴虫卵污染草地和水源等,人和家畜在进食或饮水时感染;也有部分的棘球蚴虫卵污染犬的周身毛,跟犬接触的人或动物均可感染。全国有23个省(自治区)有包虫病的报到,其中,新疆和内蒙古的包虫病血清学阳性率最高(>20 %),牧区犬的包虫病感染率(11.53 %)高于农耕地区的犬[1]。
病原学诊断主要是检测粪便或土壤样品虫卵。该方法被广泛用于动物包虫病的初检和流行病学调查。
免疫学诊断是利用粪抗原检测抗体的夹心酶联免疫吸附试验可以代替传统的槟榔碱检测法,在犬群细粒棘球绦虫的检测中,感染的初期即可检出粪抗原,但到了虫体排出阶段,粪抗原水平快速下降。该法敏感性和特异性均较高。詹芳等[8]用粪抗原检测方法检测甘肃省玛曲县、碌曲县、夏河县等20个包虫病流行市县的犬粪,结果显示,犬包虫抗原检测平均感染率为1.86 %。
分子生物学诊断包括PCR、RFLP-PCR、RAPD-PCR、序列测定和LAMP等方法。许阳阳等[9]用PCR方法检测宁夏西固地区宁夏西吉、海原和原州区棘球绦虫的感染情况,检测犬粪样品2 175份,结果显示,三个地区中细粒棘球绦虫阳性率分别为9.87 %、6.10 %、7.00 %;多房棘球绦虫阳性率分别为6.40 %、1.52 %、3.37 %,同时结果也显示细粒棘球绦虫和多房棘球绦虫在该地区的传播流行非常活跃。张艳艳等[10]针对COX2基因设计引物,建立了LAMP方法用于检测犬粪便中细粒棘球绦虫DNA,结果显示LAMP方法的敏感性和特异性较高,其敏感性是普通PCR的1 000倍。
隐孢子虫病是由隐孢子虫感染人和动物引起的一种人兽共患寄生性原虫病。感染犬猫的隐孢子虫主要有犬隐孢子虫、猫隐孢子虫、微小隐孢子虫和火鸡隐孢子虫等,这些均是人兽共患的虫种。目前犬感染隐孢子虫的感染率为0.8 %~40 %[11]。
病原学诊断包括漂浮法和染色镜检。韩冰等[12]用该法对哈尔滨市宠物医院、宠物市场和动物门诊犬粪便样品2 000份进行调查,结果表明,所获卵囊为犬隐孢子虫卵囊,被检粪便样品中有430份查到犬隐孢子虫卵囊,其感染率为21.50 %。
ELISA方法是该病常用的免疫学诊断方法,用该法检测犬猫粪便样品中的抗原,其检测值可达3×105~1×106个卵囊,与显微镜的检测值比较相似。
常用的分子生物学诊断方法是PCR、巢式PCR、套式PCR和LAMP等。Xu等[13]用PCR方法对上海地区485份犬粪便样品和160份猫粪便样品进行隐孢子的基因分型和调查研究,结果显示,犬隐孢子感染率为8 %,猫隐孢子虫感染率为3.8 %。沈莉萍等[14]用巢式PCR方法对上海地区442份流浪犬的粪便样品进行检测,结果显示,犬隐孢子的感染率为1.81 %,存在微小隐孢子虫和犬隐孢子虫两种虫种。王丹等[15]根据隐孢子虫18S rRNA基因设计引物,建立了LAMP方法,结果显示LAMP检测方法特异性高,其敏感性是巢式PCR的8倍。
在严格执行宠物行业相关法律法规的基础上,制定针对宠物市场、宠物医院和宠物运输等流通环节的法律法规制度,规范宠物来源、落户、饲养、流通、检疫和诊治等工作。《中华人民共和国动物防疫法》第三十条规定了犬只疫苗的接种登记、流浪犬猫的控制和处置要求、犬只的防疫管理等具体措施。
基层兽医站、防疫检疫站和宠物医院是宠物源人兽共患寄生虫病防控的前沿阵地。如青岛市动物疫病预防控制中心联合防疫站和动物医院等举办“宠物养殖科普讲座”和“世界狂犬病日”科普宣传活动。普及狂犬病防控知识,提高群众对狂犬病防治知识的了解。
但也有个别市级动物疫病预防控制中心和县级防疫站等存在设备差,人员少,技术水平低等众多问题,需要加强宠物行业基础设施规范,加快宠物养与疫病防治专业队伍建设,进一步加强宠物相关专业队伍和人才的培训。
宠物主把宠物带回家时,最好先带到宠物医院进行详细的体检,在确定健康的情况下,才带回家饲养,并对宠物进行定期体检。定期为宠物进行免疫注射和定期驱虫,杀灭其体内、体表的寄生虫以保证宠物的健康。同时,加强犬猫粪便管理,对宠物粪便集中发酵处理,防止宠物粪便中的寄生虫卵污染环境。
严格控制进口宠物的质量,对于进口的宠物建立严格的隔离检疫制度,严防进口宠物的同时带入人兽共患新病原。《中华人民共和国动物防疫法》第五十二条也对进出口动物和动物产品进行了明确的规定。
通过组织形式多样的宣传教育活动,提高公众对宠物科学饲养,人畜共患寄生虫病预防控制工作的认知,营造群防群控氛围。各省市动物疫病预防控制中心把全面推进人兽共患寄生虫病的宣传列入省市办实事计划,进一步加大宣传力度,依托各区市动物疫病预防与控制中心、基层动监站将人兽共患寄生虫病的宣传材料张贴到每一个社区、村委的宣传栏上,力争做到宣传无死角。
犬猫人兽共患寄生虫病病原种类繁多、宿主分布范围广、传播途径多样且对人类危害严重。因此,需要不断摸索掌握犬猫人兽共患寄生虫病的发病规律及流行特点,开展相关诊断技术研究,不断提高宠物质量的监控措施。同时,现有的犬猫人兽共患寄生虫病的诊断方法均存在局限,病原学诊断虽然特异,但敏感性较差;免疫学诊断敏感性较好,特异性存在缺陷,同时也不能区分既往感染和现症感染;分子生物学诊断虽有较高的敏感性和特异性,但所需设备和技术要求较高。因此,还需尽早确立一套完善犬猫人兽共患寄生虫病的诊断技术和防控体系,为我国宠物行业的健康发展和社会的稳定提供可靠的保障。