气相色谱法测定硫酸阿扎那韦中残留溶剂的含量

周 洁，高 衎，李春刚，唐祁匀

(上海现代制药海门有限公司，江苏 南通 226100)

硫酸阿扎那韦是一种艾滋病病毒(HIV)蛋白酶抑制剂，主要与其他抗逆转录病毒药物联用治疗HIV病毒感染[1]. 当前，常见的硫酸阿扎那韦生产工艺路线中，都需要使用醇类及其他溶剂[2-6]，而残留溶剂是产品质量标准中不可或缺的关键指标之一. 不过，目前硫酸阿扎那韦的质量标准在中国在药典 Chp2015中未收录，在国外药典中，也鲜有关于残留溶剂研究的记载[7].

硫酸阿扎那韦具有多种晶型，分别是晶型A、晶型I、晶型II[8]、C及E3型[9-10]、晶型H1[11]、晶型B、晶型P和无定型[12]. 其中，E3型是一种三乙醇溶剂合物(结构如图1所示)，系阿扎那韦游离碱在乙醇、硫酸共存条件下加热生成[13].

图1 三乙醇溶剂合物结构式Fig. 1 Structure of Azanavir sulfate E3

由于在测定硫酸阿扎那韦残留溶剂乙醇的过程中，阿扎那韦与乙醇、硫酸共存且受热(顶空加热)，因此可能会产生溶剂合物，从而导致检测结果的回收率偏低. 硫酸阿扎那韦的合成与结晶工艺存在较多差异，文献[14]虽然报道了其残留溶剂的测定方法，但因其底物硫酸阿扎那韦原料药晶型不同，某些晶型不会发生溶剂合物效应，因此未做溶剂合物影响醇类测定结果的研究. 本文建立了气相色谱法测定硫酸阿扎那韦中残留溶剂的方法，改进了样品前处理方式，使用过量的其他醇类对样品进行预处理以消除溶剂合物效应. 该方法为其他具有相似结构、相似溶剂合物效应的品种的残留溶剂研究提供了新的思路，具有较大的实用价值.

1 仪器与试剂

安捷伦e7890型气相色谱仪(美国Agilent公司)；Empower色谱工作站(美国waters公司)；梅特勒mL240型电子分析天平(瑞士梅特勒-托利多公司)；色谱柱Agilent DB-624(30 m×0.32 mm×1.8 μm，美国Agilent公司).

乙醇(德国默克，K49984727811批，色谱级)；异丙醇(沃凯，18050263批，色谱级)；正庚烷(德国默克，I754190442批，色谱级)；N,N-二甲基甲酰胺(德国默克，I0956783820批，色谱级)；N,N-二甲基乙酰胺(德国默克，I0970399832批，色谱级)；二甲基亚砜(德国默克，I0954400820批，色谱级)；甲醇(德国默克，I0951907818批，色谱级)；正丁醇(国药试剂，20170312批，分析纯)；硫酸阿扎那韦(自制，201801011批)；

稀释液A：N,N-二甲基乙酰胺；稀释液B：甲醇-正丁醇(体积比1∶1).

2 试验部分

2. 1 色谱条件

6%氰丙基苯基-94%二甲基硅氧烷为固定液的毛细管色谱柱，起始温度为35 ℃，维持3 min，以2 ℃/min的速率升至70 ℃，再以20 ℃/min的速率升至220 ℃，维持2 min. 进样口温度200 ℃，分流比20∶1；检测器(FID)温度为240 ℃；流速为1 mL/min.

2. 2 溶液配制

2. 2. 1 对照储备液的配制

对照储备溶液A：取丙酮5.0 g、二氯甲烷 0.6 g、甲基叔丁基醚5.0 g、正庚烷5.0 g、精密称定，置于预置适量稀释液A的100 mL容量瓶中，以稀释液A定容至刻度，摇匀即得.

对照储备溶液B：取乙醇5.0 g、异丙醇5.0 g，精密称定，同法配制.

2. 2. 2 对照溶液的配制

对照溶液A：精密量取对照储备溶液A 1.0 mL，置于预置适量稀释液A的100 mL容量瓶中，以稀释液A定容至刻度，摇匀即得.

对照溶液B：精密量取对照储备溶液B 1.0 mL，置于预置适量稀释液B的100 mL容量瓶中，以稀释液B定容至刻度，摇匀即得.

2. 2. 3 供试品溶液的配制

供试品溶液A：取硫酸阿扎那韦约1.0 g，精密称定，置于10 mL容量瓶中，以稀释液A溶解、定容至刻度，摇匀即得(0.1 g/mL). 用于检测样品中丙酮、二氯甲烷、甲基叔丁基醚、正庚烷的溶剂含量.

供试品溶液B：取硫酸阿扎那韦约1.0 g，精密称定，置于10 mL容量瓶中，以稀释液B溶解、定容至刻度，摇匀即得(0.1 g/mL). 用于检测样品中的乙醇、异丙醇的溶剂含量.

2. 2. 4 标准曲线的绘制

线性溶液A组：精密量取对照储备液A 0.5、0.6、0.8、1.0、1.2、1.5 mL，置于不同的100 mL容量瓶中，用稀释液A定容至刻度，摇匀即得.

线性溶液B组：精密量取对照储备液B 0.5、0.6、0.8、1.0、1.2、1.5 mL，置于不同的100 mL容量瓶中，用稀释液B定容至刻度，摇匀即得.

3 结果与讨论

3. 1 稀释液筛选

在2.1节色谱条件下，分别考察不同稀释液对待测组分的影响，结果如表1～2所列.

表1 不同稀释液对待测组分的干扰情况Table 1 Interference results of different diluents

表2 溶剂合物效应对不同醇类的选择性Table 2 Selectivityof solvent complexes to different alcohols /%

由表1可知，在该方法下，N,N-二甲基乙酰胺对溶剂干扰最小. 因此选择N,N-二甲基乙酰胺作为稀释液A.

由表2可知，结构越接近的醇，相互之间的替代性越强，消除溶剂效应的效果越好. 以甲醇-正丁醇(体积比1∶1)为稀释液，能最好地同时消除对乙醇、异丙醇的影响. 因此选择甲醇-正丁醇(体积比1∶1)为稀释液B.

3. 2 专属性

取空白溶剂、对照溶液、供试品溶液分别依法测定. 试验结果表明，空白溶剂及供试品均不干扰测定，残留溶剂峰之间分离度大于2.0，方法专属性良好. 试验结果如表3所列.

表3 专属性、定量限与检测限试验结果Table 3 Results of specificity test and LOD&LOQ

3. 3 检测限、定量限

取配制的对照溶液，逐步稀释，使S/N约分别为10、3左右，记录此时的浓度分别为定量限、检测限. 试验结果表明，各残留溶剂的检测限、定量限如表3所列. 方法灵敏度良好，满足定量分析的要求.

3. 4 线性关系

取不同浓度水平的线性溶液，分别依法测定，以浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线. 试验结果表明，各残留溶剂在一定范围内，浓度与峰面积的线性关系良好，r均大于0.999 0，满足定量分析的要求. 结果如表4所列.

表4 线性试验结果Table 4 Results of linear test

3. 5 重复性

试验结果表明，同一均质样品(201801011批)平行测定6份，按外标法计算，各残留溶剂含量的RSD均低于5.0%，方法重复性良好，如表5所列.

表5 重复性试验结果Table 5 Results of repetitive test /%，n=6

3. 6 回收率

回收率溶液A组：取硫酸阿扎那韦适量，精密称定，加入对照储备液A适量，用稀释液A溶解并稀释. 回收率溶液B组：取硫酸阿扎那韦适量，精密称定，加入对照储备液B适量，用稀释液B溶解并稀释.

试验结果表明：不同浓度水平的加样回收率溶液中，各残留溶剂的回收率均在90%～110%范围内，RSD均低于5.0%，由表6可见，本方法准确度良好，满足定量测定的要求.

3. 7 样品中醇类溶剂回收率偏低的原因分析

专利报道的硫酸阿扎那韦的三乙醇溶剂合物是一种E3型晶型，其差示扫描量热(DSC)和热重分析(TGA)图谱如图2所示[9]. 受热硫酸阿扎那韦样品的TGA和DSC图谱如图3所示.

由上述图谱分析可知：受热样品的TGA和DSC图谱与E3型基本一致. 由此推测，乙醇的加样回收率偏低是由于与样品在气相色谱仪中受热形成了溶剂合物. 回收率同样偏低的异丙醇，也可能产生了相似的效应.

表6 回收率试验结果Table 6 Results of recovery test

图2 E3型TGA和DSC[9]Fig. 2 TGA/DSC of E3 type standard[9]

图3 受热样品的TGA和DSCFig. 3 TGA/DSC results of treated samples

4 结论

本研究建立了一种采用气相色谱法测定硫酸阿扎那韦中残留溶剂的方法，特别是找到了一种能够消除乙醇、异丙醇溶剂合物效应的样品前处理方式. 经验证，本方法专属、灵敏，且在LOQ至限度浓度的1.5倍范围内，线性关系良好，方法的RSD均低于5.0%，回收率结果均介于90%～110%之间，方法重复性及准确度较好. 因此，本方法满足定量分析的要求，具有较高的参考意义和实用价值.