大肠杆菌的牛津杯药敏试验

王雪芬，周守长，李小庆，许金朋，卢 婷，刘 喆，刘 洋

（华裕农业科技有限公司 057151）

大肠杆菌病是由埃希氏大肠杆菌的某些致病株所引起的一类疾病，各种年龄的鸡均可感染，大肠杆菌病可以单独发病也可以通过其他疾病的继发感染，由于近年来抗菌药物的滥用，大肠杆菌耐药株日益增多，使得该病呈蔓延趋势。 所以本次针对临床分离的三种大肠杆菌菌群，进行牛津杯药敏试验，同时对比标准药敏片。 结果显示成品牛津杯药敏结果与标准药敏片结果一致性较高，可通过药敏结果来指导现场用药防止耐药产生。

1 试验目的

为了现场出现大肠杆菌引起的心包炎、肝周炎、腹膜炎等原发和继发感染，防止耐药对成品药品的使用筛选，选用三个分离的大肠杆菌进行牛津杯药敏试验。

2 实验材料

大肠杆菌分离株A 菌株、B 菌株、C 菌株、药敏片、牛津杯、成品药、离心管、超纯水、生理盐水、涂布棒、珠子、酒精灯、取菌环、MH 培养基等。

表1 产品信息

3 试验方法

3.1 培养基制备

将121℃高压灭菌的MH 琼脂培养基， 冷却至50℃～60℃后， 在超净台中酒精灯火焰旁， 倒在无菌培养皿内， 每皿约25mL，凝固后备用。

3.2 菌悬液制备

在超净台内，用酒精灯外焰灼烧接种环，待接种环冷却后接将三个场区纯化的单个菌落到装有3mL 无菌生理盐水的样品瓶中，制成菌悬液。

3.3 药品稀释

将10 种产品进行按照推荐量稀释，并缩小10 倍，扩大10倍做三个梯度备用。

3.4 菌液涂布

在超净台内，吸取0.1mL 菌液到平板表面，用涂布棒或珠子5 颗将菌液涂布均匀。

表2 稀释比例

3.5 摆放牛津杯

在超净台内，在培养基表面垂直摆放牛津杯，轻轻加压，使其与培养基接触无空隙，每个平皿放置6 个牛津杯。

3.6 加入药液

在超净台内往牛津杯中加入不同浓度的药液200uL。

3.7 贴药敏片

选与本次试验同类的标准药敏片进行对比。

3.8 培养

将做好的培养皿放置在37℃培养16～18h， 取出观察结果，进行分析对比。

4 实验结果

4.1 通过三种细菌5 种抗生素的三种浓度进行抑菌对比结果如下

4.1.1 A 菌株牛津杯药敏结果

缩小10 倍浓度结果：多西环素、杆特、痢康、复方阿莫西林为极敏，普得康为中敏；

推荐浓度结果：杆特、痢康、复方阿莫西林为高敏，多西环素为中敏，普得康为不敏；

扩大10 倍浓度结果：杆特、痢康为中敏，普得康、多西环素、复方阿莫西林为不敏。

4.1.2 B 菌株牛津杯药敏结果

缩小10 倍浓度结果：多西环素、杆特、复方阿莫西林为极敏，普得康、痢康为高敏；

推荐浓度结果：杆特为极敏，多西环素、痢康、复方阿莫西林为高敏，普得康为不敏；

扩大10 倍结果：杆特为高敏，痢康为中敏，普得康、多西环素、复方阿莫西林为不敏。

4.1.3 C 菌株牛津杯药敏结果

缩小10 倍浓度结果：多西环素、复方阿莫西林为极敏，普得康为高敏，痢康为不敏；

推荐浓度结果：杆特为极敏，多西环素、复方阿莫西林为中敏，普得康、痢康为不敏；

扩大10 倍浓度结果：杆特为中敏，普得康、多西环素、痢康、复方阿莫西林为不敏。

表3 成品药牛津杯药敏结果

备注： 以下药敏结果图示编号代表意义，A 开始的均为A菌株，A1 的1、2、3 标记代表1 号普得康缩小10 倍、推荐剂量、扩大10 倍，A1 的4、5、6 标记代表2 号产品多西环素50%，缩小10倍、推荐剂量、扩大10 倍；A2 的1、2、3 代表3 好产品杆特，缩小10 倍、推荐剂量、扩大10 倍；A2 的4、5、6 代表4 号产品痢康，缩小10 倍、推荐剂量、扩大10 倍；A3 的1、2、3 代表5 号产品复方阿莫西林缩小10 倍、推荐剂量、扩大10 倍；A3 的4、5、6 代表6号产品，因为没有同样的药敏片所以不进行分析。

图1 A 菌株牛津杯药敏结果

图2 B 菌株牛津杯药敏结果

图3 C 菌株牛津杯药敏结果

4.2 通过标准药敏片试验结果显示如下

4.2.1 A 菌株：黏菌素、环丙沙星、庆大霉素高敏，阿莫西林/克拉维酸中敏，氟苯尼考低敏，多西环素和氯霉素不敏；

4.2.2 B 菌株：庆大霉素极敏，环丙沙星、黏菌素高敏，氟苯尼考、阿莫西林/克拉维酸、多西环素中敏，氯霉素不敏；

4.2.3 C 菌株耐药：环丙沙星高敏，氟苯尼考低敏，庆大霉素、多西环素、氯霉素、粘菌素、阿莫西林/克拉维酸不敏；

4.2.4 ABC 混合菌株与C 菌株耐药的结果基本一致。

表4 药敏片药敏结果

图4 A 菌、右B 菌株药敏片结果

图5 C 菌株、三个混合菌药敏片结果

5 实验结论

通过本次实验牛津杯成品药敏结果与标准药敏片一致性较高，且成品药更方便现场的选择优势。 本次实验三种菌株均显示环丙沙星敏感性最高，其次是粘菌素、复方阿莫西林，且C 菌株都表现有一定程度的耐药情况。 根据本次实验结果显示，牛津杯药敏试验配成品药的浓度建议使用推荐剂量。 临床兽医可以根据牛津杯药敏的结果开具处方，选择敏感的药物进行治疗，防止耐药菌株的产生。 牛津本实验操作简单方便使用，有条件的实验室均可以操作。 为现场临床提供有效的指导意义。