阿克苏地区禽流感抗体的检测与分析

伍麦尔·麦海提，徐远远，阿迪莱·卡哈曼，布帕提买木·麦麦提，张秋林，陈荟旭，孙鹏亮，李莲瑞★

（1.塔里木大学动物科学学院 843300；2.新疆生产建设兵团塔里木动物疫病诊断与防控工程实验室 843300）

禽流感 （avian influenza） 是由禽流感A 型病毒 （avian influenza virus）引起，在各种家禽和野生鸟类中感染的高度接触性传染病[1]。 根据毒性大小，禽流感还可分低致病性和非致病性禽流感[2]。 其中能引起高致病性禽流感的主要为H5 和H7 亚型毒株[3]。H5 和H7 血清型可以引起高致病性禽流感，以高发病率，高死亡率为主要特征，并且这两种血清型的病毒能够在禽与禽，禽与人，人与人之间快速传播，不管是禽类还是人类被传染后都存在高烧持续不退的症状，甚至比较严重可能会就此丧命[4]。 因此，家禽进行禽流感抗体的检测对预防禽流感的暴发至关重要。

本实验为了准确掌握阿克苏地区H5 和H7 亚型禽流感强制免疫效果，取阿克苏地区八个县一个市的屠宰场、交易市场、散养农户以及规模化养殖场家禽血清并检测其抗体水平。 通过这一环节，始终掌握禽流感的最新动态，将预防放在首位，对免疫状况较差的禽类进行补免， 为后续免疫程序提供精准的指导与计划，从而更好的预防和控制禽流感的暴发供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

1.1.1 样品采集 2020 年，从阿克苏地区8 县1 市的规模化养殖场、屠宰场、交易市场和散养户的家禽中采集血清。 在取样过程中，采集者应清楚并完整的记录从哪采集的家禽、家禽的免疫情况、各个地方家禽血清采集的数量，以便为后期免疫提供准确方向。

1.1.2 主要试剂 H5、H7 亚型禽流感病毒的标准抗原、阴性和阳性血清均购自哈尔滨维科生物技术开发公司； 在无菌条件下，健康的公鸡血液用肝素进行抗凝，1%的红细胞悬液按常规制备和储存，以备后续使用。

1.2 试验方法

1.2.1 血凝（HA）试验（微量法） 在微量反应板的第1～12 孔均加入0.025mL PBS，换滴头。吸取0.025mL 抗原，加入第1 孔混匀。 从第一孔吸取0.025mL 抗原液加入第2 孔。 混匀后吸取0.025mL 加入第3 孔，如此进行对比稀释至第11 孔，从第11 孔吸取0.025mL 弃之，换滴头。每孔再加入0.025mL PBS。每孔均加入0.025mL 体积分数为1%鸡红细胞悬液。 振荡混匀， 在室温（20℃～25℃）下静置40min 后观察结果（如果环境温度太高，可置4℃环境下）。 对照孔红细胞将成明显的钮扣状沉到孔底。

结果判定:将板倾斜，观察红细胞有无泪滴状流淌。 完全血凝（不流淌）的抗原最高稀释倍数代表1 个血凝单位（HAU）。 本试验的一个血凝单位为1∶256。

1.2.2 血凝抑制（HI）试验（微量法） 根据2.1 试验结果配制4HAU 的抗原，以完全血凝的抗原最高稀释倍数作为终点，终点稀释倍数除以4 即为含4HAU 的抗原的稀释倍数。 例如，如果血凝的终点滴定为1∶256，则4HUA 抗原的稀释倍数应是1∶64（256除以4）。 在微量反应板的第1～11 孔加入0.025mL PBS，第12 孔加入0.05mL PBS。吸取0.025mL 血清加入第1 孔。充分混匀后吸取0.025mL 加入第2 孔，依次对倍稀释至第10 孔，从第10 孔吸取0.025mL 弃 之。 1 ～11 孔 均 加 入 含4HAU 混 合 的 抗 原 液0.025mL，室温约20℃静置至少30min。每孔加入0.025mL 体积分数为1%的鸡红细胞悬液混匀，轻轻混匀，静置约40min（室温约20℃，若环境温度太高可治4℃条件下进行），对照红细胞将呈现钮扣状沉于孔底。

结果判定:以完全抑制4 个HAU 抗原的血清最高稀释倍数作为HI 滴度。 如果HI≤3log2，抗体为阴性。HI≥4log2 为抗体阳性，符合抗体标准。

3 结果与分析

3.1 2020 年春季规模化养殖场禽流感免疫抗体水平

表1 2020 年春季规模化养殖场禽流感免疫抗体水平监测情况

从表1 的检验结果显示，2020 年采自春季阿克苏地区规模化养殖场中的家禽血清， 在H5 亚型禽流感免疫抗体检测中，除了阿克苏市H5 亚型禽流感免疫抗体合格率为90%以外，其他八个县H5 亚型禽流感免疫抗体合格率均为100%，免疫效果较好；在H7 亚型禽流感免疫抗体检测中，沙雅县的H7 亚型禽流感免疫抗体合格率极低（55%）。其次，新和县的H7 亚型禽流感免疫抗体合格率为95%，阿克苏市是90%，其他县H7 亚型禽流感抗体免疫良好。

3.2 2020 年春季屠宰场禽流感免疫抗体水平

表2 2020 年春季屠宰场禽流感免疫抗体水平监测情况

从表2 的检测结果显示，2020 年春季采自阿克苏地区屠宰场中的家禽血清，在H5 亚型禽流感免疫抗体检测中，除了温宿县H5 亚型禽流感免疫抗体合格率为90%以外，其他七个县一个市H5 亚型禽流感免疫抗体合格率均为100%，免疫效果较好；在H7 亚型禽流感免疫抗体检测中， 沙雅县和新和县的H7 亚型禽流感免疫抗体合格率较低，分别为40%和75%。 温宿县与阿瓦提县的H7 亚型禽流感免疫抗体合格率为95%，低于其他H7 亚型禽流感免疫抗体合格率100%的县市。

3.3 2020 年春季散养户禽流感免疫抗体水平

表3 2020 年春季散养户禽流感免疫抗体水平监测情况

从表3 的检测结果显示，2020 年春季采自阿克苏地区散养户的家禽血清，在H5 亚型禽流感免疫抗体检测中，除了阿瓦提略低外，总体的免疫效果还是比较良好的；在H7 亚型禽流感免疫抗体检测中，沙雅（60%）、新和（70%）、阿瓦提（75%）偏低，有待于进一步补免，其他县市免疫效果良好。

3.4 2020 年春季交易市场禽流感免疫抗体水平

表4 2020 年春季交易市场禽流感免疫抗体水平监测情况

从表4 的检测结果显示，2020 年春季采自阿克苏地区交易市场的家禽血清，在H5 亚型禽流感免疫抗体检测中，新和县的H5 亚型禽流感免疫情况还有待加强， 阿瓦提的H5 亚型禽流感出现了很明显的免疫不合格问题，应提醒注意防患；在H7 亚型禽流感免疫抗体检测中，沙雅县和阿瓦提县免疫效果仍然不佳，拜城县的免疫情况也需加强。

3.5 2020 年春季H5 亚型禽流感免疫抗体水平

表5 2020 年春季H5 亚型禽流感免疫抗体监测情况汇总

从表5 的检测结果显示，2020 年春季采自阿克苏地区的家禽血清，总体来看，H5 亚型禽流感免疫抗体获得情况良好。 但有个别县免疫效果没有达到100%，新和县、阿克苏市、温宿县、阿瓦提县免疫过程可能进行的不完善，需要进一步加强免疫。

3.6 2020 年春季H7 亚型禽流感免疫抗体水平

表6 2020 年春季H7 亚型禽流感免疫抗体监测情况汇总

从表6 的检测结果显示，2020 年春季采自阿克苏地区的家禽血清，H7 亚型禽流感免疫抗体的获得情况较差。 其中，沙雅县对于H7 亚型禽流感的免疫抗体获得情况极差，需及时进行补免措施。 结合表5 分析，库车、乌什以及柯坪县对禽流感的防控很好；沙雅、阿瓦提县需要防范禽流感的潜在威胁。

4 讨论

本次监测结果显示， 阿克苏地区8 个县和1 个市的禽流感整体免疫效果较好， 少数县H7 亚型禽流感的免疫效果仍需加强，应尽早加强免疫，以抵抗野生毒株的感染。 本试验结果表明，不同饲养条件下的免疫效果具有些许差异。 禽流感抗体水平在规模化养殖场是最高的。 造成这种现象的原因可能是规模化养殖场的卫生环境干净整洁，通风系统良好，管理水平高，免疫程序合理，因此，规模化养殖场的禽流感抗体水平最高；屠宰场的禽流感抗体水平较好， 出现这种现象原因可能是屠宰场中一般是肉用鸡以及淘汰蛋鸡，肉鸡养殖周期比较短，因此免疫数量较少，可能存在禽流感病毒；散养户的禽流感抗体水平普遍较低，形成这种现象的原因可能是散户饲养数量少， 对免疫接种的重要性没有得到很深的认识；交易市场的禽流感抗体水平也一般，形成这种现象的原因可能是交易市场主要从事为规模化养殖场和散养户销售饲养的家禽，造成抗体水平不平均，流动性高，禽流感传播的可能性高。 因此，需要做好禽流感的免疫工作以知道及时进行调查处理。 除此之外，在免疫中需要注意以下方面，疫苗应妥善保存，防止应保存不当而降低免疫原性；选择合适的天气条件，按疫苗接种规定使用培养箱；避免免疫时的繁重工作，以避免防疫人员在追求速度的时忽略质量，降低免疫效果；注射用针头避免倒刺，以防止注射部位感染，影响免疫应答[5]。

5 结论

本实验为了监测阿克苏地区禽流感免疫抗体水平， 通过采集阿克苏地区的家禽血清， 采用血凝和血凝抑制法检测禽流感免疫抗体。结果显示，目前，阿克苏地区H5 亚型禽流感免疫抗体合格率良好，可以再更一步完善和提高；但是，部分县对于H7 亚型禽流感的接种情况较差，易造成禽流感暴发的潜在可能性。 在这项研究中，通过抗体水平检测，及时反馈各养鸡场，并指导补免加强和后期监测， 可以使得免疫不格的鸡场的抗体阳性率有大幅度提升，起到了良好的预警作用和指导作用[6]。