“壮医水蛭活体疗法 ”治疗用水蛭四级净化流程

周维海 李焕华 梁子茂 潘韦情 梁江洪

【摘 要】 目的：制定“壮医水蛭活体疗法 ”治疗用水蛭净化养殖标准流程。方法：在前期研究的基础上从养殖场地、环境、温度、空气、水质、投喂、周期、卫生、检测及活体成虫外形、体长、体重、饲养员要求等依次按4个等级作出净化养殖流程，最后经过第三方检测不含有特定病原微生物或寄生虫，提供给临床或科研使用。结果：顺利完成“活体水蛭疗法治疗肌筋膜炎的临床研究”（编号：Z20180119）课题的水蛭活体供给，未出现安全差错事故等，安全保障高。结论：广西科康科技集团有限公司经过四级净化的水蛭活体安全性高，方法可操作性强。本流程的确立为“医用水蛭”的进一步研究及相关标准的修订打下良好的基础。

【关键词】 壮医水蛭疗法;活体;净化养殖

【中图分类号】R285.5   【文献标志码】 A    【文章编号】1007-8517（2021）22-0051-04

水蛭，俗称蚂蟥，而蚂蟥唾液腺分泌的水蛭素，则是当今世界上发现的抗凝血酶活性最高的天然物质，从而注定了其与医药领域有着密切的渊源。

人类在医疗发展进程中应用水蛭的历史可追溯到古埃及、古罗马和古希腊时期。法国外科医生Francois Broussais（1772～1838）于19世纪初将水蛭吸血应用于人体治疗而引起轰动，2004年8月，法国Ricarimpex公司饲养的水蛭获得美国FDA医用许可证及国际ISO9001认证[1]。经现代药理学研究[2]表明，吸血水蛭在吸吮血液分泌的唾液里含有许多复合状态的生物活性成份，主要为天然水蛭素，它是一种小分子单链多肽，是显著并专一的凝血酶特异性抑制剂，也是迄今为止人类发现的最强的抗凝血天然物质，且引起出血的副作用较小。另外还有抑菌成分、镇痛成分、抗血栓、抗肿瘤等等。俄罗斯国家卫生部也已正式批准部分水蛭类药物可用于冠心病等的临床治疗[1]。

在中国，水蛭活体疗法及入药使用也见诸多部典籍，如《本草拾遗》、《神农本草经》、《千金方》等等均有外治痈疽痞肿，内治血瘀经闭的作用[3]。水蛭生物疗法又称“蜞针疗法”，在广西等壮民族地区，人们称为“壮医水蛭治疗”或“壮医水蛭活体疗法”，主要是采用生长于本地、也是我国古代用于临床治疗主要品种之一的“金边蚂蟥”（菲牛蛭）在人体的特定穴位上进行叮咬吸血、并分泌水蛭素等活性物质而达到治病的目的[7]。2011年，金边蚂蟥（菲牛蛭）作为广西特色药用动物资源被收录于《广西壮族自治区壮药质量标准》第二卷[8];2013年被收录于《云南省中药材标准》[9]。近年来，由于“壮医水蛭活体疗法”简、便、验、廉的特点，其运用越来越广泛，主要涉及痛症、类风湿性关节炎、痛风急性发作、外科术后、皮肤病等，广西壮族自治区已将其列入民族医医疗服务项目[6]。因此，对于治疗用的活体水蛭的需求量越来越大，质量要求也越来越高。而在我国，该领域的相关标准尚属空白，鉴于此，为了配合完成广西国际壮医医院承担的“活体水蛭疗法治疗肌筋膜炎的临床研究”（编号：Z20180119）课题，广西科康科技集团有限公司在菲牛蛭养殖、净化及天然水蛭素提取二十多年耕耘的基础上，进一步从各阶段梳理优化菲牛蛭净化流程，形成专供“壮医水蛭活体疗法”人体治疗的菲牛蛭活体四级净化相关标准或指标，填补国内“医用水蛭”标准的空白。

1 “壮医水蛭活体疗法”治疗用水蛭四级净化流程规范

在普通药用水蛭养殖标准的基础上，必须经过一、二、三、四级净化，经第三方专业机构对相关病原微生物的检验合格后，方能作为“医用水蛭”用于患者身体进行活体治疗。

本流程主要适用于广西科康科技集团有限公司提供给广西国际壮医医院承担的“活体水蛭疗法治疗肌筋膜炎的临床研究”（编号：Z20180119）课题及所有使用于人体治疗的活体菲牛蛭的净化养殖过程。该公司生产的治疗用活体菲牛蛭依次严格经过以下4个等级的养殖周期总共4个月的净化养殖，最后经第三方检测不含有特定的病原微生物和寄生虫。

本流程主要对菲牛蛭的成虫选择、场地、环境、包括温度、空气、水质以及净化养殖的技术要求、养殖周期、质量控制、卫生检测等方面进行规范化、标准化认定。分阶段描述如下。

1.1 一级净化 只经过一级净化养殖的活体水蛭还不能用于水蛭活体治疗，必须输送到第二级净化养殖室继续进行净化养殖。

1.1.1 活体成虫选择 挑选本公司陆川养殖场按“广西菲牛蛭规范化养殖标准操作规程（sop）”[4]养殖、繁育二代以上的菲牛蛭（金边蚂蟥）健康成虫，体重4～8 g。

1.1.2 养殖环境 场地： 符合养殖环保要求的室内饲养池。單池内空：2 m（长）×1 m（宽）×0.15 m（深）， 贴白色瓷砖，设独立给排水和防逃设施;室内门窗完好，有防虫纱网，有强制通风设施; 温度：室内温度控制在17～32 ℃; 空气：保持空气自然流通、无污染，室内无异常臭味;水质：100 m深以下地下水源，PH值6～8（呈中性），含盐量小于4%，溶氧量 1 mL/L以上;噪音：养殖场地禁止高声喧哗、机车马达等噪音;光线： 避免阳光直射，尽量创造黑暗环境。

1.1.3 养殖技术要求 放养前准备： 放养前5～10 d干池并进行消毒处理，用20～40 ppm漂白粉或7～13 ppm强氯精消毒养殖池及其周围环境。放养前2天水池先注水;养殖密度： 500～600条/平米;换水频率： 温度不同可以分为几种情况如表1。

换水之前应将水蛭和饲养池里面的排泄物用水清洗干净，避免杂质的残留;投喂：整个养殖周期不喂食，待其体内杂物自然排泄净化;监察：养殖周期中每天至少进行2次巡检，发现有病、死或体型不符合4～8 g范围者要及时检出并妥善处理。本养殖周期内不能中途补充新的水蛭到养殖池内;养殖周期：30 d;质控检测：外观性状健康正常，体长直，体长8～16 cm。进入下一环节净化养殖;记录表：做台账记录，分工作记录和工作报表（报表另印）。内容包括巡回检查、清洗换水、生长情况、病死情况、现场环境状况（温度、湿度、空气质量等），所饲养的水蛭做到分批登记，可追溯来源去向。

1.1.4 饲养员要求 饲养员要求身体健康，无传染性疾病，无外伤，注意个人卫生，進入养殖区域必须穿戴统一的工作服装。饲养周期内采取饲养员负责制，即养殖周期内不能换人，饲养员要对本批次养殖负责，是本批次产品质量问题的直接追责者。

1.2 二级净化养殖 经过二级净化养殖的活体水蛭还不能用于水蛭活体治疗，必须输送到第三级净化养殖室继续进行净化养殖。

1.2.1 活体成虫选择 经第一级净化饲养后合格健康的金边蚂蟥（菲牛蛭） ，体重在3～6 g之间。

1.2.2 养殖环境 同第一级净化养殖要求。

1.2.3 养殖技术要求 放养前准备：同第一级净化养殖;养殖密度：每平方米水面放养400～500条;换水频率： 温度不同可以分为几种情况如下表2。

投喂 ：整个养殖周期不喂食;监察：养殖周期中每天至少进行2次巡检，发现有病、死或体型不符合3～6 g范围者要及时检出并妥善处理，本养殖周期内不能中途补充新的水蛭到养殖池内;养殖周期：30 d;质控检测：外观性状健康正常，体长直，活力好;记录表：同第一级养殖净化要求。

1.2.4 饲养员要求 同第一级养殖净化要求。

1.3 三级净化养殖 只经过三级净化养殖的活体水蛭还不能用于水蛭活体治疗，必须输送到第四级净化养殖室继续进行净化养殖。

1.3.1 活体成虫选择 经第二级净化饲养后合格健康的金边蚂蟥（菲牛蛭），体重2～6 g。

1.3.2 养殖环境 场所：选择符合养殖环保要求的养殖室，安装冷暖空调，防虫、通风设施等。统一使用5000 mL的专用玻璃净化养殖瓶饲养。养殖瓶按要求做好标签统一整齐摆放在专用货架上; 空气：保持空气自然流通、无污染，室内无异常臭味;温度：室温20～30 ℃;水质：同第一级净化要求;噪音：养殖场地禁止高声喧哗、机车马达等噪音;光线：避免阳光直射，尽量创造黑暗环境。

1.3.3 养殖技术要求 养殖容器：5000 mL玻璃瓶，提前5 d用20～40 ppm漂白粉或7～13 ppm强氯消毒，并清洗干净。放养前2 d养殖瓶先注水;养殖密度：30～50条/瓶;换水频率：温度不同可以分为几种情况如下表3。

投喂 ：整个养殖周期不喂食;监察：养殖周期中每天至少进行2次巡检，发现有病、残及过大过小的应检出妥善处理，中途不能补充新的水蛭到养殖瓶内。周期内发现有病死水蛭的，该养殖瓶的水蛭终止净化养殖并妥善处理;养殖周期：30 d;质控检测：外观性状健康正常，体长直，活力好;记录表：同第一级养殖净化要求。

1.3.4 饲养员要求 同第一级养殖净化要求。

1.4 四级净化养殖 只有经过第四级净化养殖并检验合格的活体水蛭才是合格的医用水蛭，可以安全用于水蛭活体治疗。

1.4.1 活体成虫选择 经第三级净化饲养后合格健康的金边蚂蟥（菲牛蛭） ，体重2～5 g。

1.4.2 净化养殖环境 场所：选择符合养殖环保要求的类GMP实验生产场所，空气：洁净程度达10万级以上，统一使用5000 mL的专用玻璃净化养殖瓶饲养。养殖瓶按要求做好标签统一整齐摆放在专用货架上;温度：室温20～30 ℃;水质：100 m深以下地下水源，经过RO膜净化处理，达饮用纯净水要求，PH值呈中性，溶氧量为1 mL/L以上;噪音：养殖场地禁止高声喧哗、机车马达等噪音，室内禁用电子电器设备;光线：避免阳光直射，尽量创造黑暗环境。

1.4.3 养殖技术要求 养殖容器：5000 mL玻璃瓶，提前5 d用20～40 ppm漂白粉或7～13 ppm强氯精消毒，并清洗干净。放养前2天养殖瓶先注水;养殖密度：20～30条/瓶;换水频率：温度不同可以分为几种情况如下表4。

投喂：同第一级养殖净化要求，整个周期不投喂;监察：每天至少进行2次巡检，发现有病、残及过大过小的应检出妥善处理，中途不能补充新的水蛭到养殖瓶内。周期内发现有病死水蛭的，该养殖瓶的水蛭终止净化养殖并妥善处理;养殖周期 ：30 d;质控检测：外观性状健康正常，体长直，体长7～15 cm;记录表：同第一级养殖净化要求。

1.4.4 饲养员要求   同第一级养殖净化要求。

2 病原菌及微生物检测

广西科康科技集团有限公司出品的活体治疗用菲牛蛭是委托第三方微生物权威检测机构，对活体进行“沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、志贺氏菌、大肠埃希氏菌、溶血性链球菌、副溶血性弧菌、单核细胞增生李斯特氏菌、致泻大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌”等九项专业级检测，以确保每条菲牛蛭均达到人体治疗级别。

3 “治疗用菲牛蛭”四级净化流程简图

二代以上人工繁育健康菲牛蛭成虫→一级净化养殖（无喂食，500～600条/平方米池养30 d）→二级净化养殖（无喂食，400～500条/平方米池养30 d）→三级净化养殖（无喂食，30～50条/5000 mL净化养殖瓶相对恒温环境养30 d）→四级净化养殖（无喂食，20～30条/5000 mL净化养殖瓶相对恒温，10万级无菌环境下养殖30 d）→按要求检验合格→出品。

4 结语

“壮医水蛭活体疗法”是一种外治疗法，作为一种侵入性外治疗法，其安全性及可操作性是医生和患者关注的重点之一，特别是部分患者在生活过程中曾经有过活体水蛭叮咬的经历，会产生比较大的心理恐惧。如何消除患者的心理影响并切实保护患者的生命安全，是治疗必须要首先解决的问题。广西科康科技集团有限公司长期致力于活体水蛭等的研究，而水蛭的净化养殖是保证临床活体治疗安全的关键所在，所以一定要有科学、规范的操作规程。本流程于2016年修订执行，至2018年1月为配合提供给广西国际壮医医院承担的“活体水蛭疗法治疗肌筋膜炎的临床研究”（编号：Z20180119）课题[5]用的菲牛蛭活体而进一步优化，并沿用至今，共为广西国际壮医医院、百色市中医医院、桂林市南溪山医院及各级各类诊所、中医馆、工作室等提供科研及治疗用菲牛蛭活体约127011条，参与体验“壮医水蛭活体疗法”约21168人次，未出现出血、感染、严重过敏等不良反应。“壮医水蛭治疗”等民间疗法，绿色环保、安全可靠，“简、便、廉、验”，值得进一步研究推广。

参考文献

[1]苏承武，唐东平，贺彬.水蛭生物疗法的进展及基础研究概况[J].蛇志，2011，23（4）：370-372.

[2]钟超，吴辉 ，赖富饶.酶解菲牛蛭制备抗凝血肽的工艺优化[J].现代食品科技，2012，28（2）：164-167.

[3]张卫，张瑞贤，李健，等.中药水蛭品种考证及资源可持续利用发展探讨[J].中国中药杂志，2013，38（6）：914-918.

[4]周维官，周维海，丘毅，等.菲牛蛭规范化养殖标准操作规程（SOP）[J].中药材，2010，34（9）：1331-1335.

[5]潘韦情，梁子茂，周维海，等.活体水蛭疗法治疗肌筋膜炎30例疗效观察[J].中国民族民间医药杂志，2020，29（8）：103-108.

[6]广西壮族自治区物价局，卫生和计划委员会，人力资源和社会保障厅.壮医水蛭治疗[J].广西新增民族医医疗服务价格项目公示表，490002040.

[7]张卫，张瑞贤，李健，等.中药水蛭品种考证及资源可持续利用发展探讨[J].中国中药杂志，2013，38（6）：914-918.

[8]广西壮族自治区食品药品监督管理局.广西壮族自治区壮药质量标准，第二卷[M].南宁：广西科学技术出版社，2011：183-184.

[9]云YNZYC-0357-2013，菲牛蛭[S].云南省食品药品监督管理局，2013.

（收稿日期：2021-04-02 编辑：陶希睿）

基金项目：广西壮族自治区卫生和计划生育委员会自筹经费科研课题 （ 编号： Z20180119） 。

作者简介：周维海（1968-），男，汉族，本科，研究方向为金边蚂蟥和水蛭素的研究。E-mail：zhouweihai@126.com