血清β2-MG、miR-133a 联合检测对扩张型心肌病患者预后的评估价值

陆爱民，赵艳，刘宝宝

（青海省心脑血管病专科医院冠心病二科，青海 810000）

扩张型心肌病（dilated cardiomyopathy，DCM）是一种异质性心肌疾病，致病原因包括心肌炎、代谢缺陷、神经肌肉疾病、家族遗传等，其发病率及病死率较高［1］。据统计，DCM 患者5 年生存率约50%，多数患者最终发展为失代偿期充血性心力衰竭（congestive heart failure，CHF）［2］，因此，对DCM 患者进行预后评估有着十分重要的临床意义。目前已证实血尿酸（serum uric acid，SUA）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor α，TNF-α）、脑钠肽（brain natriuretic peptide，BNP）等临床生化指标与DCM 预后相关［3-5］，但目前未见血清β2 微球蛋白（β2-microglobulin，β2-MG）、微小RNA（microRNA，miR）-133a 在DCM 患者预后评估中的应用。因此，本研究就血清β2-MG、miR-133a浓度联合检测对DCM 患者预后评估价值进行了相关探讨，以期为DCM 患者临床诊疗提供参考，现报告如下。

1 资料和方法

1.1 一般资料

经青海省心脑血管病专科医院医学伦理委员会批准，前瞻性选择2017 年2 月至2018 年2 月本院收治的98 例DCM 患者为DCM 组，另选同期本院健康体检者98 名为对照组。DCM 组：男59 例，女39 例，年龄（61.78 ±10.33）岁；体质量指数（body mass index，BMI）为（22.74±2.88）kg/m2。对照组：男61例，女37例，年龄（61.22±11.78）岁；BMI为（23.05±3.12）kg/m2。DCM 组和对照组一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。根据随访2年期间是否发生心源性死亡将98 例DCM 组患者分为生存亚组（n=80）与死亡亚组（n=18），生存亚组：男48 例，女32例，年龄（60.77±9.89）岁；BMI为（23.45±2.85）kg/m2。死亡亚组：男11 例，女7例，年龄（59.33±11.42）岁；BMI为（22.17±3.15）kg/m2。生存组和死亡组患者一般资料比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。纳入标准：（1）符合原发性DCM 诊断标准［1］；（2）女性未处于哺乳期或妊娠期；（3）年龄30～75 岁，未合并严重呼吸道感染性疾病；（4）所有研究对象及家属对本研究知情同意，并签订知情同意书。排除标准：（1）合并凝血系统疾病；（2）合并肝、肾疾病；（3）合并恶性肿瘤；（4）合并原发性高血压（高血压）或糖尿病；（5）合并其他类型心肌病；（6）随访期间失访者。

1.2 检测方法

（1）血清β2-MG 浓度检测：采集所有研究对象外周静脉血2 mL，采用离心机（深圳市达科为生物技术股份有限公司）以3 000 r/min离心15 min，分离血清，采用免疫比浊法检测血清β2-MG 浓度，试剂盒由北京科美生物技术有限公司公司提供，参考范围为0.97～2.64 mg/L，所有操作严格按照操作说明书进行。

（2）血清miR-133a 浓度检测：采集所有研究对象外周静脉血2 mL，采用总RNA 提取试剂盒（上海美吉生物医药科技有限公司）提取血液总RNA，总RNA 逆转录成cDNA，以此cDNA 为模板行聚合酶链反应（PCR）扩增，聚合酶链反应条件：95℃预变性10 min，95℃变性15 s，60℃退火延伸60 s，45 次循环。根据扩增曲线读取循环数（Ct），计算miR-133a mRNA 相对表达浓度，基因的相对表达浓度=2-△△Ct，以β-actin 为内参照，表示为ΔΔCt=DCM 组（CtmiR-133a-Ctβ-actin）-对照组（CtmiR-133a-Ctβ-actin）。

1.3 统计学分析

本研究数据的统计分析在SPSS 22.0 软件上进行。计量资料以（）表示，采用t检验比较DCM 组与对照组血清β2-MG、miR-133a 浓度，采用t检验比较生存亚组与死亡亚组血清β2-MG、miR-133a 浓度。DCM 患者血清β2-MG、miR-133a浓度相关性采用Pearson 相关分析，DCM 患者预后的影响因素采用多因素Logistic 回归分析，采用受试者工作特征曲线（receiver operating characteristic curve，ROC）分析血清β2-MG、miR-133a 浓度检测对DCM 患者预后的预测价值。以P＜0.05 表示差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 扩张型心肌病组与对照组研究对象血清β2-MG、miR-133a 浓度比较

DCM 组患者血清β2-MG 浓度显著高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）；DCM 组患者血清miR-133a 浓度显著低于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05），详见表1。

表1 DCM 组与对照组研究对象血清β2-MG、miR-133a 浓度比较 ［n=98，］

表1 DCM 组与对照组研究对象血清β2-MG、miR-133a 浓度比较 ［n=98，］

2.2 生存亚组与死亡亚组患者血清β2-MG、miR-133a 浓度比较

死亡亚组患者血清β2-MG 浓度显著高于生存亚组，差异具有统计学意义（P＜0.05）；死亡亚组患者血清miR-133a 浓度显著低于生存亚组，差异具有统计学意义（P＜0.05），详见表2。

2.3 Pearson 相关分析结果

Pearson 相关分析结果显示，DCM 患者血清β 2-MG 浓度与miR-133a 浓度呈负相关（r=-0.449，P＜0.05）。

2.4 多因素Logistic 回归分析扩张型心肌病患者预后的影响因素

多因素Logistic 回归分析结果显示，血清β2-MG、miR-133a 浓度是影响DCM 患者预后的独立因素（P＜0.05），见表3。

表2 生存亚组与死亡亚组血清β2-MG、miR-133a浓度比较 ［］

表2 生存亚组与死亡亚组血清β2-MG、miR-133a浓度比较 ［］

表3 多因素Logistic 回归分析DCM 患者预后影响因素的结果

2.5 血清β2-MG、miR-133a 检测对DCM 患者预后的预测价值

ROC 分析结果显示，血清β2-MG 浓度检测对DCM 患者预后的预测价值明显优于血清miR-133a浓度检测（P＜0.05）；血清β2-MG、miR-133a 浓度联合检测对DCM 患者预后的预测价值明显优于各指标单项检测（P＜0.05），见表4、图1。

3 讨论

DCM 是一种异质性心肌疾病，也是心脏移植的主要原因之一，特征为左或右心室或双侧心室扩大，并伴有心室收缩功能减退［6］。DCM 患者的病情呈进行性加重，死亡可发生于疾病的任何阶段［7］，给患者生命带来巨大威胁。近年来多种血清标记物已通过实践验证成为DCM 患者的预后标记物，但有些指标检查费用昂贵且特异性不高，故有待寻找特异性更高的更适用的血清标记物应用于临床，以及时了解DCM 患者病情变化，为DCM患者临床治疗及心力衰竭和心脏重构预防提供新的思路。

表4 血清β2-MG、miR-133a 浓度检测对DCM 患者预后的预测价值

图1 血清β2-MG、miR-133a 浓度及其联合预测DCM患者预后的ROC 图

β2-MG 主要是由淋巴细胞产生的一种小分子蛋白质，由100 个氨基酸残基组成，可参与淋巴细胞表面识别，体内几乎所有有核细胞均能合成β2-MG，并附着于细胞表面。测定血液、脑脊液、尿液中的β2-MG 浓度对诊断多种疾病有着重要的意义，其浓度增高常见于肾功能衰竭、恶性肿瘤、器管移植排斥反应、自身免疫性疾病等［8］。有研究发现，β2-MG 是评估肾小球、肾小管功能受损的敏感指标，其在血清中的浓度上升可提示肾小球滤过率（glomerular filtration rate，GFR）下降［9］。另有研究发现，β2-MG是心力衰竭患者预后的独立危险因素，与左心室质量及心室肥厚密切相关［10］。本研究结果显示，DCM 组患者血清β2-MG 浓度显著高于对照组，这与上述研究结果一致［8-9］，说明血清β2-MG 浓度与DCM 发生相关。本研究结果还显示，死亡组患者血清β2-MG 浓度显著高于生存组，提示血清β2-MG 浓度与DCM 预后相关。ROC 分析显示血清β2-MG 浓度预测DCM 患者预后的准确度为78.21%，提示血清β2-MG 浓度检测对DCM 患者预后有一定预测价值。

miRNA 是一类由内源基因编码的非编码单链RNA 分子，长度约为22 个核苷酸，在动植物中参与转录后基因表达调控［11］。此外，一些miRNAs可参与早期发育、细胞增殖、细胞分化、细胞凋亡、细胞死亡等一系列生命重要进程，如miR-14、miR-133a、miR-23 等［12-13］。另有研究发现，2 个miRNAs 浓度下降与慢性淋巴细胞白血病（chronic lymphoblastic leukemia，CLL）显著相关［14］。有学者通过大鼠模型发现，miR-133a 过表达可以抑制心肌纤维化，改善心脏功能［15］。本研究发现DCM组患者血清miR-133a 浓度显著低于对照组，死亡组患者血清miR-133a 浓度显著低于生存组，说明miR-133a 与DCM 发生及预后相关。ROC 分析结果显示血清miR-133a 浓度预测DCM 患者预后的准确度为61.34%，提示血清miR-133a 浓度检测对DCM 患者预后预测价值低于血清β2-MG 浓度检测。相关分析显示DCM 患者血清β2-MG 浓度与miR-133a 浓度呈负相关，且血清β2-MG、miR-133a 浓度是影响DCM 患者预后的独立因素，说明血清β2-MG 浓度随着miR-133a 浓度下降而逐渐上升，提示β2-MG 可与miR-133a 联用构建成为评估DCM 预后的新型生物标志物。本研究发现，血清β2-MG、miR-133a 浓度联合检测对DCM 患者预后的预测价值明显优于血清β2-MG、miR-133a 单项检测，说明血清β2-MG、miR-133a 浓度联合检测大大提高了预测DCM 预后的准确性，可为选择精准治疗方案提供参考。

综上所述，血清β2-MG、miR-133a 浓度变化与DCM 发生及预后密切相关，两者联合检测对DCM 患者预后有一定评估价值，可有效指导DCM的临床诊疗工作。但本研究为单中心小样本研究，仍需多中心大样本研究加以证实。