生防菌剂“宁盾”对浙贝母的防病促生作用△

郑明子，叶海军，俞仪阳，严辉，蒋春号*，郭坚华*

1.南京农业大学，江苏 南京 210095；2.江苏省南通卫生高等职业技术学校，江苏 海安 226600；3.南京中医药大学，江苏 南京 210095

a并列第一作者

浙贝母FritillariathunbergiiMiq.属百合科(Liliaceae)贝母属中药材，是著名的“浙八味”之一。其以鳞茎入药，具有清热解毒、散结消肿、止咳化痰等功效[1]，目前主要分布于浙江、江苏等省[2]。

生产规模的扩大和连年种植，导致浙贝母病虫害问题日益突出。浙贝母根腐病由镰刀菌引起，被侵染的植株鳞茎发生不同程度的腐烂，叶片因水分和营养的供给不足而发黄、枯萎[3]。目前，对于浙贝母根腐病以化学防治为主，而这种防治方法会带来环境污染、农药残留等问题，寻求安全有效的防治方法迫在眉睫。“宁盾”是本课题组在前期实验中筛选出的1种三菌合剂(即生防菌剂)，主要为蜡质芽胞杆菌Bacilluscereus(AR156)、枯草芽胞杆菌B.subtilis(SM21)与沙雷氏菌沙雷氏菌Serratiasp.(XY21)。“宁盾”于2013年成功登记成微生物肥料[微生物肥(2013)准字(1096)号]。本研究采用“宁盾”对浙贝母根腐病进行防控，为安全有效地提高浙贝母药材质量提供方法参考。

1 材料

酵母提取物(批号：20190702，北京奥博星生物技术有限公司)；其他试剂为分析纯。LB培养基：胰蛋白胨10 g、酵母提取物5 g、氯化钠10 g用1 mol·L-1氢氧化钠调pH为7.0～7.2，加超纯水定容至1 L。

生防菌剂“宁盾”：从超低温冰箱中取出已保存的种菌株，采用三线划板法于LB平板上28 ℃活化，24 h后挑取单菌落，接入LB试管，置于28 ℃摇床里培养 18～20 h作为种子液；以1%的接种量将种子液接种于1 L大三角瓶培养基，继续于28 ℃摇床培养24 h。将AR156、SM21、XY21菌液浓度分别调成终浓度为1×108CFU·mL-1，并按1∶1∶1的体积比混合。

浙贝母由江苏省南通卫生高等职业技术学校叶海军讲师鉴定为FritillariathunbergiiMiq.。

2 方法

2.1 防病促生作用

于江苏省南通市海安市韩南村(N 32°34′19.48″、E 120° 33′ 54.42″)选取土壤结构疏松、有机质含量丰富的地块。地块长10 m、宽3.6 m，行间距35 cm，株间距25 cm。“宁盾”处理为实验组，清水处理为对照组。播种当天喷淋苗床，在植物生长期于出苗后(苗期)、开花前、休眠期前分别灌根1次，田间用量75 kg·hm-2。每个处理设3个重复。各实验小区采用完全随机排列的方式。

在生防菌剂“宁盾”120、130、145 d时统计浙贝母的叶片数、株高、根系数。收获期统计产量。

2.2 根腐病的防效统计

2020年5月，雨水充沛，田块积水较多，根腐病高发。对浙贝母采用5点取样法随机取样，统计根腐病发病情况。按参考文献[4]方法计算病害严重度和防治效果。

病害严重度=[Σ(病级株数×代表级数)/(植株总数×最高代表级值)]×100%

(1)

生物防治效果=(对照发病率-处理防病率)/对照发病率×100%

(2)

相对防效=(对照病害严重度-处理病害严重度)/对照病害严重度×100%

(3)

3 结果与分析

3.1 生防菌剂“宁盾”处理对浙贝母地上部生长指标的影响

在播种后的120、130、145 d采用5点取样随机测量其生长指标，包括叶片数、株高、根系数。与对照组相比，实验组在播种120 d后，浙贝母叶片数增加了16.67%(见图1)；130 d后，实验组浙贝母根系提前分蘖，分蘖量比对照组增加了16.67%(见图2)。以上结果表明，按此浓度施用生防菌剂“宁盾”能发挥较好的促生效果。在播种145 d后，实验组浙贝母株高明显提高(见图3)，比对照组增加了12.12%。综上所述，生防菌剂“宁盾”对浙贝母地上部有很好的促生效果。

注：A.对照组；B.实验组；下同。图1 播种120 d后浙贝母生长情况

图2 播种130 d后浙贝母生长情况

图3 播种145 d后浙贝母生长情况

3.2 生防菌剂“宁盾”处理对浙贝母鳞茎的病害防治效果及促生情况

根腐病作为浙贝母的一种常见病害，严重影响浙贝母的产量及品质。研究结果显示，生防菌剂“宁盾”能显著降低浙贝母根腐病的发生，相对防效达到90.9%(见表1、图4)。同时，生防菌剂“宁盾”能显著促进浙贝母根系发育生长，与对照组相比，根系促生率达75.78%。综上所述，生防菌剂“宁盾”对浙贝母根腐病有很好的防效，对浙贝母鳞茎也有良好的促生效果。

表1 不同处理对浙贝母的病害防治和促生效果

注：A.清洗前；B.清洗后；左侧为实验组；右侧为对照组。图4 播种后200 d浙贝母鳞茎

4 分析与讨论

浙贝母在生长过程中容易发生灰霉病、黑斑病、根腐病等[5]，且随连作日益严重。浙贝母根腐病为茄镰刀菌蓝色变种Fusariumsolanivarcoeruleum导致的土传病害。浙贝母根腐病多发于低洼积水地块，主要危害根茎组织，表现为鳞茎腐烂，茎、叶也因为水分、养分供应不足萎蔫，直至死亡[6]。目前，浙贝母根腐病以化学防治为主，日孜旺古丽·苏皮等[7]提出，在根腐病发病初期及时用 45%代森铵500倍液，以每株10 g 量对病株及周围未出现症状的植株进行灌根，可达到良好的防治效果；也可选用 50%甲基托布津或50%多菌灵800～1000倍液浸种30 min[8]。但是，目前越来越多的人认识到化学防治在用药安全方面的隐患，因而健康安全的生物防治成为近年来的研究热点。

“宁盾”对土传病害具有良好的防治效果。目前结果表明，“宁盾”中AR156能够同时激发水杨酸和乙烯茉莉酸信号通路，植物通过产生系统诱导抗性来抵御病原微生物的入侵[9]。此外，AR156对扁豆有促生效果，对其果实品质有明显提升作用[10]。

本研究探讨了“宁盾”对浙贝母根腐病的防效和促生效果。生长指标(叶片数、株高、根系数)统计结果显示，“宁盾”对浙贝母具有促进生长的作用；根腐病防治效果统计显示，其对浙贝母根腐病的防治效果显著，在浙贝母病害的绿色防控中具有良好应用前景。

由于实验田地前期使用化学防治，对“宁盾”的效果可能存在一定影响。同时，由于本次实验田块属于连作地，根腐病的发生导致土壤微生态并不利于“宁盾”存活，随着“宁盾”的连续使用，浙贝母根腐病的防治效果和促生情况都将有所提升。在后续研究中，本团队将针对浙贝母多种常见病虫害开展研究，以期形成完整的浙贝母病害绿色防控体系。