柴胡皂苷d抗肝纤维化模型中的大鼠脂质过氧化作用分析

金红阳 张坤 胡海 孙洁

【摘要】目的：分析柴胡皂苷 d 抗肝纤维化模型中的大鼠脂质过氧化作用。方法：将 24例 SPF 级雄性 SD 大鼠随机分为三组，即预防组、模型组、正常组，每组8 例。统计分析三组大鼠的血清酶活性、血清透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、Ⅳ型胶原（IV-C）水平及血清、肝组织超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）水平、肝纤维化程度、胶原总面积、面积比。结果：模型组、正常组、预防组大鼠的血清谷草转氨酶（AST）、佛甲草提取液（SLT）水平均逐渐降低（P <0.05），模型组、预防组、正常组大鼠的血清 HA、 LN、IV-C 水平均逐渐降低（P <0.05）。模型组、预防组大鼠的血清 SOD 水平均低于正常组（P <0.05）;模型组、正常组、预防组大鼠的血清、肝组织 MDA 水平逐渐降低（P <0.05），肝组织 SOD 水平逐渐升高（P <0.05）。模型组、预防组大鼠的肝纤维化0 级比例均低于正常组（P <0.05）;预防组大鼠的肝纤维化Ⅱ级比例高于模型组、正常组（P <0.05）;模型组大鼠的肝纤维化Ⅲ级比例高于正常组、预防组（P <0.05）。模型组、预防组、正常组大鼠的胶原总面积、面积比均逐渐降低（P <0.05）。结论：柴胡皂苷 d 抗肝纤维化机制可能和抗脂质过氧化作用相关。

【关键词】抗肝纤维化模型;大鼠;柴胡皂苷 d;脂质过氧化;肝纤维化程度;胶原总面积

【中图分类号】R258.5 R575【文献标识码】A 【文章编号】2096-5249（2021）18-0001-03

Analysis of effect of saikosaponin d on lipid peroxidation in rats with hepatic fibrosis

Jin Hong-yang1， Zhang Kun2， Hu Hai2， Sun Jie2

1.Baotou Medical College， Inner Mongolia University of science and technology， Baotou 014060， China;

2.Department of pathophysiology， Baotou Medical College， Inner Mongolia University of science and technology， Baotou 014060，China

【Abstract】Objective：To analyze the effect of saikosaponin d on lipid peroxidation in rats with hepatic fibrosis.Methods：24 SPF male SD rats were randomly divided into three groups：prevention group，model group and normal group，with 8 cases in each group.The levels of serum enzyme activity，serum hyaluronic acid（HA），laminin（LN），type Ⅳ collagen（Ⅳ-C），serum and liver superoxide dismutase（SOD），malondialdehyde（MDA），degree of liver ?brosis，total area and area ratio of collagen were statisti- callyanalyzed.Results：The levels of serum aspartate aminotransferase（AST） and SLT in model group，normal group and preven- tion group decreased gradually（P<0.05），and the levels of serum HA，LN and Ⅳ-C in model group，prevention group and normal group decreased gradually（P<0.05）.The levels of serum SOD in model group and prevention group were lower than those in normal group（P<0.05）;The levels of MDA in serum and liver tissue of model group，normal group and prevention group decreased grad- ually（P<0.05），and the level of SOD in liver tissue increased gradually（P<0.05）.The proportion of grade 0 liver fibrosis in model group and prevention group was lower than that in normal group（P<0.05）;The proportion ofgrade Ⅱ liver fibrosis in the prevention group was higher than that in the model group and normal group（P<0.05）;The proportion of grade Ⅲ liver fibrosis in model group was higher than that in normal group and prevention group（P<0.05）.The total area and area ratio of collagen in model group，pre- vention group and normal group decreased gradually（P<0.05）.Conclusion：The anti fibrosis mechanism of saikosaponin d may be related to its anti lipid peroxidation effect.

【Key words】Anti hepatic fibrosis model;Rats;Saikosaponin d;Lipid peroxidation;Degree of hepatic fibrosis;Total collagenarea

肝纤维化在分子水平上一方面和氧化应激相关分析关系密切，另一方面还和化学因子、细胞因子等关系密切[1]。相关促进其减慢。近年来，在兴起的自由基医学作用下，临床发现中药能够将鞣酸类、黄酮类等自由基成分清除，从而直接清除超氧阴离子，同时还能够促进机体抗氧化能力的增强，途径为对机体内氧化- 抗氧化系统进行调节[3]。本研究分析了柴胡皂苷d抗肝纤维化模型中的大鼠脂质过氧化作用，报道如下。

1材料与方法

1.1 实验动物

选取由北京维通利华实验动物技术有限公司提供的24例健康SPF 级雄性 SD 大鼠[动物饲养许可证号 SCXK（京）2002-0003，动物合格证号SYXK（京）2005-0019]，所有大鼠体重70～90（80±10）g，均在中日友好医院临床研究所动物室屏障系统中饲养，并让其自由饮食水。

1.2 药物与试剂、仪器

于中日友好医院临床医学研究所药物药理室购买柴胡皂苷d（Saikosaponind，SSd）白色粉末，从北柴胡中提取，纯度经高效液相色谱法分析为92%，能够在生理盐水中部分溶解，实验时配制，煮沸灭菌。

透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）放射免疫分析测定盒购自北京北方生物技术研究所;二甲基亚硝胺（DMN）购自日本东京化成工业株式会社; Ⅳ型胶原（Ⅳ-C）放射免疫分析测定盒购自美国TPI公司;超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）试剂盒购自南京建成生物工程研究所。采用美国 CD-1600全自动生化分析仪，上海第三分析仪器厂生产的722光栅分光光度仪，北京核仪厂生产的放射免疫γ 计数仪（BFG0152型），日本SAKURA公司生产的滑走式切片机，日本 KUBOTA-5310台式低速离心机。

1.3 方法

1.3.1 大鼠肝纤维化模型建立

给予大鼠腹腔注射DMN 10 mg/kg，每天1次，每周2天，共4周。采血后立即处死大鼠并常规摘取大鼠肝脏。

1.3.2 动物分组及处理

将24例大鼠随机分为三组，即预防组、模型组、正常组，每组8 例。预防组从造模第1天给其腹腔注射 SSd1.8mg/ kg，直到实验结束。 4周后给予预防组、模型组大鼠腹腔注射3.5 mL/kg 10%水合氯醛，对其进行麻醉，然后取腹主动脉血液，离心将血清分离出来，分装后保存在-20℃的温度下备用。正常组不接受任何处理。

1.4 观察指标

（1）对比血清酶活性。采用全自动生化分析仪对谷草转氨酶（AST）、佛甲草提取液（SLT）活性进行测定;（2）对比血清HA、LN、Ⅳ-C水平。应用放射免疫分析测定盒对血清HA、 LN、IV-C水平进行测定;（3）对比血清、肝组织 SOD、MDA水平。应用 SOD、MDA测定盒对血清、肝组织 SOD、MDA水平进行测定;（4）病理组织观察。肝纤维化分级标准为无胶原纤维增生、具有正常的肝组织评定为0级;胶原纤维从中央静脉周围或汇管区轻度向外延伸评定为Ⅰ级;胶原纤维显著延伸但还没有相互连接将整个肝小叶包绕起来评定为Ⅱ级;胶原纤维显著延伸、相互连接将整个肝小叶包绕起来评定为Ⅲ级;胶原纤维将肝小叶包绕起来并分隔、破坏正常肝小叶结构、形成假小叶、主要为大方形假小叶评定为Ⅳ级;完全破坏假小叶、形成假小叶、大方形和小方形假小叶分别占1/2评定为Ⅴ级;小圆形假小叶布满肝、有粗大增生的胶原纤维出现在假小叶中评定为Ⅵ级[4]。（5）对比胶原总面积、面积比。

1.5 统计学分析

采用 SPSS 21.0软件分析数据。计量资料用（ ±s）表示，用 t检验;计数资料用率（%）表示，用Fisher χ2检验。当 P<0.05表示差异有统计学意义。

2结果

2.1 三组大鼠的血清酶活性、血清HA、LN、Ⅳ-C水平比较模型组、正常组、预防组大鼠的血清 AST、SLT 水平均逐渐降低（P<0.05），模型组、预防组、正常组大鼠的血清HA、 LN、IV-C水平均逐渐降低（P<0.05），见表1。

2.2 三组大鼠的血清、肝组织SOD、MDA水平比较

模型组、预防组大鼠的血清 SOD 水平均低于正常组（P<0.05），但模型组、预防组大鼠的血清SOD 水平差异不显著（P>0.05）;模型组、正常组、预防组大鼠的血清、肝组织 MDA水平逐渐降低（P<0.05），肝组织 SOD水平逐渐升高（P<0.05），见表2。

2.3 三组大鼠的肝纤维化程度比较

模型组、预防组大鼠的肝纤维化0级比例均低于正常组（P<0.05），但模型组、预防组大鼠的肝纤维化0级比例对比差异不显著（P>0.05）;预防组大鼠的肝纤维化Ⅱ级比例高于模型组、正常组（P<0.05），但模型组、正常组大鼠的肝纤维化Ⅱ级比例对比差异不显著（P>0.05）;模型组大鼠的肝纤維化Ⅲ级比例高于正常组、预防组（P<0.05），但正常组、预防组大鼠的肝纤维化Ⅲ级比例对比差异不显著（P>0.05）;三组大鼠

的肝纤维化Ⅰ级、Ⅳ级比例对比差异均不显著（P>0.05）。见表 3。

2.4 三组大鼠的胶原总面积、面积比比较

模型组、预防组、正常组大鼠的胶原总面积、面积比均逐渐降低（P<0.05）。见表4。

3讨论

小柴胡汤的主要功效为保肝利胆、抗炎，近年来在慢性肝病的治疗中得到了广泛应用。其君药为柴胡，主要功效为疏肝解郁、解表退热等;主要活性成分为柴胡皂苷，其中SSd最具活性[5]。现阶段相关医学研究表明[6]，SSd能够将抗肿瘤作用发挥出来。还有医学研究表明[7]，SSd能够促进四氯化碳引发的肝功能损伤的减轻，对原代培养的肝细胞增殖进行抑制，促进细胞外基质沉积的减少。

相关医学研究表明[8]，SSd可能通过抗脂质过氧化作用在极大程度上对肝细胞进行保护，将抗肝纤维化作用发挥出来。本研究结果表明，模型组、正常组、预防组大鼠的AST、 SLT水平均逐渐降低，模型组、预防组、正常组大鼠的血清HA、LN、Ⅳ-C水平均逐渐降低。模型组、预防组大鼠的血清SOD水平均低于正常组;模型组、正常组、预防组大鼠的血清、肝组织 MDA水平逐渐降低，肝组织SOD水平逐渐升高。模型组、预防组大鼠的肝纤维化0级比例均低于正常组;预防组大鼠的肝纤维化Ⅱ级比例高于模型组、正常组;模型组大鼠的肝纤维化Ⅲ级比例高于正常组、预防组。模型组、预防组、正常组大鼠的胶原总面积、面积比均逐渐降低（P 均<0.05），此研究结果和上述研究结果一致。但本次研究不足之处在于样本数量较少、观察时间较短，造成研究结果可能存在偏差，今后应该扩大样本量、延长随访时间，进行进一步深入细致的研究。

综上所述，SSd抗肝纤维化机制可能和抗脂质过氧化作用相关，值得临床重视。

参考文献

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[3]李素婷，楊鹤梅，齐洁敏，等. 柴胡皂苷-d 对酒精性肝纤维化大鼠星形细胞活化的影响[J].时珍国医国药，2008，19（8）：1897-1898.

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[6]夏荣. 柴胡皂苷对阻塞性黄疸的肝细胞保护机制[J].国际中医中药杂志，2011，33（12）：1143-1144.

[7]林柳兵，阙任烨，刘进锴，等. 柴胡皂苷d 对活化的 HSC-T6细胞MMP-1、TIMP-1表达的影响及其分子机制[J].世界华人消化杂志，2016，24（8）：1159-1165.

[8]林柳兵，刘进锴，阙任烨，等 .柴胡皂苷d 对肝星状细胞 ER α和ER β mRNA 水平的调节[J].中药药理与临床，2016，32（1）：35-39.

（收稿日期：2021-05-21）