药物敏感试验中应注意的问题

刘明团 王敏丽 （山东省青岛市畜牧兽医研究所，山东 青岛 266199）

随着抗生素数量和种类的增加以及人为因素，许多细菌菌株对一种或多种抗生素产生了抵抗力或耐药性，单凭临床观察来正确选择治疗药物就显得比较困难。这时，用抗菌药物敏感性试验(AST)就可以解决这个问题。该试验可预测抗菌治疗的效果，即AST试验结果为“敏感”时，治疗可能有效；试验效果为“耐药”时，使用该药物肯定失败。同时可以用于指导临床工作者选择使用合适的抗生素以及对细菌耐药性的分析。药敏试验具有操作简便、容易掌握等特点，成为临床工作中必不可少的内容。然而药敏试验只是一种药物敏感性定性试验，在试验中容易受到诸多因素的影响，如抗菌药物的种类、培养基的成分、细菌类别、试纸片质量以及培养条件等因素。为提高药敏试验的准确性，本文介绍在实际操作过程中应注意的问题。

1 正确配制培养基

（1）培养基是影响药敏试验结果的重要因素，除要维持细菌正常生长发育外，还须不拮抗抗生素的效力，对其扩散影响较小。其中最重要的是琼脂的种类和浓度影响较大。（2）培养基的其他成分及pH范围都要保持一定的标准范围。一般细菌用肉浸液或肉膏液培养基；营养要求较高的细菌，用含0.5%羊血的测定肉浸液或肉膏液培养基；测定细菌对磺胺类药物敏感性，应用无蛋白胨肉浸液或肉膏液培养基。（3）药敏试验一般在直径9cm或12cm的平皿内进行，每个平皿贴6～7个纸片。琼脂厚度约4～6mm，不可太薄，但也不要太厚，培养基厚度越大药物的抑菌环越小。一般直径9cm的平皿，倾注培养基18～20ml即可。

2 选用新分离的菌株

一般使用经培养6～18h的肉汤培养物，用肉汤或生理盐水作1:1000或1:10倍稀释。被检验的药物原液的配制要根据其药物实际含量配成所需要浓度。对于易潮解的药物，称量和配制操作过程要迅速，防治药物吸水潮解。

3 确定培养时间和温度

用灭菌棉签蘸取试菌液，在管内壁将多余菌液旋转挤去后，在琼脂表面均匀涂片接种3次，每次旋转平板60度，最后沿平板内缘涂抹1周即可。倒置37ºC温箱中20min，使培养基表面干燥。将各种药物纸片放置在培养基表面，用玻棒轻压，使其紧贴于培养基上。各纸片中心相距大于24mm，纸片距平板内缘大于15mm。一般采用16～18h孵育，但不要超过24h，培养时间过长，细菌能恢复生长，造成抑菌环缩小。

4 保证药敏片质量

抑菌环直径的大小与纸片中药物含量有关。若在储存期间，由于药物变质使其效能降低，则抑菌环变小。药敏试验所使用的纸片一定要在表明有效期内使用。禁止使用过期的药敏纸片。一般药敏纸片密封储存在2～8℃无霜冷冻箱内保存。使用前将储存容器移至室温平衡1～2h，可避免开启储存容器时药敏纸片产生冷凝水。

5 坚持做对照试验

为准确判断试验结果，试验中必须同时进行各种对照试验。试验菌株对照即在无药物情况下，应能够在培养基内正常生长；抗菌药物对照即药物原液应该具有明显的抑菌作用；稀释液对照即配制抗菌药物的稀释液应该无抗菌作用。试验结果判断时，要有精确度为1mm的游标卡尺量取抑菌圈直径，根据提供的标准，对量取的抑菌直径作出“敏感”“耐药”和“中介”的判断结果。