浅谈山羊布鲁氏杆菌病的诊断及防治

陈永红

（姚安县官屯镇农业农村综合服务中心，云南姚安 675305）

1 布鲁氏杆菌病的诊断

1.1 根据症状和病理变化进行初步诊断

1.1.1 症状

妊娠母羊的主要症状为流产。流产前病症表现为体温升高、精神不振、食欲减退、有的长卧不起，由阴道排出黏液或带血分泌物，阴唇和乳房肿胀，荐部与肋部下陷，以及乳汁呈初乳性质，阴道黏膜出现粟粒大红色结节，阴道流出灰白色或浅褐色黏液，继而发生流产。流产母羊多数产出死胎，少数产出活的弱羔。有的病羊还发生关节炎和滑液囊炎，出现跛行。公羊可表现睾丸炎和附睾炎，公羊发生睾丸炎，有热、痛，以后逐渐减轻，无热、痛，触之质地坚硬。病羊流产后，常发生胎衣不下，若不及时处治则可能发生慢性子宫炎，引起不孕。

1.1.2 病理变化

流产胎衣、胎儿的病理损害。流产胎衣具有明显病变，胎衣呈黄色胶冻样浸润，有些部位覆有纤维蛋白絮片和脓液，有的增厚而杂有出血点。胎衣绒毛膜充血和贫血，有时水肿或杂有小出血点，还可能覆盖一层灰黄色渗出物。子宫绒毛膜间隙中存在灰色或黄色、无气味的胶冻样渗出物。胎儿多呈败血症变化，浆膜和黏膜有出血斑点，皮下结缔组织发生浆液出血性炎症，脾和淋巴结肿大，肺有支气管肺炎。早死的胎儿可见干尸化。胎羊胃特别是第四胃中有淡黄色或白色黏稠的絮状物，肠胃和膀胱的浆膜下可见点状或线状出血。浆膜腔略有微红色液体，腔壁上可能覆有纤维蛋白凝块，皮下呈出血性浆液性浸润，肥厚。公羊生殖器精囊内可能有出血点和坏死灶，大量释放的细菌超过了吞噬细胞的吞噬能力，表现出明显的败血症或毒血症；同时细菌可随粪、尿排除。流产后流出红色黏液、胎盘明显肥厚，皮下呈浆液性浸润。

1.2 细菌学检查

1.2.1 染色镜检

取可疑绒毛叶渗出液、胎衣、胎儿胃内容物、水肿液、胸水、腹水、阴道分泌物等制成涂片，除用革兰氏染色法染色外，还可用布鲁氏菌鉴别染色法染色或柯兹洛夫斯基染色法染色。其中，布鲁氏菌鉴别染色法染色镜检，布鲁氏菌染成橘红色，背景为蓝色。柯兹洛夫斯基染色法染色镜检可见单个、成对或成堆存在的红色球杆状细菌，其他细菌被染成绿色或蓝色。

1.2.2 分离培养

病料可采用流产母羊的子宫及阴道分泌物，也可采用病死羊的的肝、脾、淋巴结或流产胎儿的内容物、肝、脾、淋巴结接种。常用培养基为血清琼脂、血清葡萄糖琼脂、胰蛋白䏡琼脂、吐温葡萄糖琼脂、马铃薯琼脂、肝汤培养基及甘油肝汤琼脂等。为抑制杂菌生长，可在培养基中加入放线菌酮、杆菌肽、多黏菌素、乙基紫及结晶紫。对分离到的细菌可先做形态学检查，再做种型鉴定。

1.2.3 动物接种

豚鼠是最适于做布鲁氏杆菌分离检查的试验动物。病料中含菌量少而能检出的可靠方法是接种豚鼠。如病料污染较轻，可接种于腹腔；如污染严重，可做皮下或肌肉注射。每种病料至少接种2只豚鼠，1只在接种后3周剖杀，另1只在6周剖杀。剖杀前须采血作凝集试验，滴度在1∶5以上判为阳性。剖杀时，如脾肿，肝与肾有坏死灶，并做细菌分离鉴定。剖杀豚鼠，取脾、肝和淋巴结等病料涂片染色镜检或作细菌分离培养，若分离培养有可疑菌落，则用已知布鲁氏杆菌阳性血清作凝集反应，凝集反应为阳性，则可确定为布氏杆菌。若剖杀前的血清凝集反应为阳性，即使剖检时培养为阴性也可以诊断为布鲁氏杆菌病。此外，小鼠和家兔也可以用作试验动物。

1.3 分子生物学检查

核酸探针、聚合酶链反应（PCR）可以快速检测布鲁菌。PCR技术有普通PCR、多重PCR、实时荧光定量PCR和AMOS-PCR等方法。病料可采取患病动物脾脏、淋巴结、流产胎儿内容物、胎衣、绒毛膜渗出物、水肿液、胸水、腹水等，也可采取粪便、尿液、乳汁等。

1.4 免疫学检查

1.4.1 血清凝集试验

血清凝集试验是布鲁菌病诊断和检疫常用的方法，具有较高的特异性和敏感性。有试管凝集试验、平板凝集试验、缓冲布鲁菌抗原试验、虎红平板凝集试验、缓冲平板凝集试验。缓冲布鲁菌抗原试验是诊断羊布鲁菌的指定筛选试验。我国常用的检测试验为虎红平板凝集试验和试管凝集试验，一般用虎红平板凝集试验初筛，阳性者用试管凝集试验做复核试验。细菌侵入机体后7～15 d血液中就出现凝集抗体随后凝集滴度逐渐增高。病畜流产后10 d以上，大多数（1∶100）～（1∶1000）的滴度，阳性反应可保持几个月甚至2～3年以上，因此流产后采血时间要在7～10 d以后更好。另外由于其他细菌感染，可出现非特异性反应，在羊血清试验时，要用5 %～10 %盐水稀释血清，检出率才高。

1.4.2 补给结合反应

本法具有很高的特异性，是OIE确定的国际贸易指定用于羊布鲁菌、绵羊附睾布鲁菌试验。病畜感染后7～14 d血中出现补体结合抗体，保持时间比凝集素长，特异性和敏感性高，对布鲁氏杆菌病诊断有特殊的诊断价值，但操作复杂，通常只作为辅助诊断方法。

1.4.3 全乳环状反应

此法操作简便，敏感性高，可用于混合羊乳的普查，以判定羊群是否存在布鲁菌病。绝大部分阳性病例都从奶中排菌，如与血清凝集反应同时并用，不仅可以提高检出率，也可以说明病的活动性。1只病羊的乳与几只健康羊的乳混合，仍可出现阳性，若有阳性再分别检查病羊。注意：初乳或产犊后14 d内的乳、泌乳后期的乳、一般乳房炎的乳、接种疫苗后6个月内的乳、日产乳量低于5 kg等情况不适合。

1.4.4 变态反应

可用于检查犊羊、羊和猪。在尾根皮内注射0.2 mL流产布鲁菌菌素，阳性者24 h内出现红肿，阴性者无任何变化。羊感染布氏杆菌后20～30 d以上出现变态反应，它比凝集反应出现稍迟，但持续时间长，羊在病愈后1～1.5年才逐渐消失。所以本法不适于早期诊断。我国对山羊的布鲁氏杆菌病采用布氏杆菌水解素进行大群检疫。

1.4.5 荧光偏振试验

荧光偏振试验是OIE确定的国际贸易指定试验，具有很高的敏感性和特异性，可批量检测的优点。实时荧光定量 PCR是在PCR反应体系中加入荧光基团 ，利用对荧光信号积累的实时检测来监测整个PCR进程 ，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析 。方法：取20 uL血清样品加入黑色96孔微量反应板内，加180 uL反应缓冲液，室温孵育3 min，置荧光偏振仪上读板，加结合物10 uL，室温孵育2 min，置茨光偏振仪上读板，两次读取值的差值与阴性对照的差值进行比较，检测小于72 mp为阴性，表示无布鲁氏抗体，72～93 mp为可疑，大于93 mp，则判定为阳性。

2 预防和防治措施

2.1 健康羊群的预防措施

2.1.1 合理选址及布局

羊舍的位置与公共场所的距离要符合兽医主管部门规定的标准。不把羊舍建在交通主干道、公路边、居民生活区、生活饮用水源地、学校、医院等公共场所周边，并按照兽医主管部门和环保部门的规定标准进行建造。羊舍间距离不能太近，便于防疫和安全生产。同时要具备消毒舍、隔离舍、化污池、化尸池、防疫室等设施，一旦发生疫病能立即采取防疫隔离措施，切断传播途径，控制疫病的流行。

2.1.2 加强饲养管理

坚持自养自繁，必须引进种羊时应从无病地区引入并进行严格检疫。对引入的种羊有隔离观察记录，及近3年完整的种羊销售记录。购进精液、胚胎、引种来源有《种畜禽生产经营许可证》的单位，或符合相关规定国外进口的种羊、胚胎或精液。引入种羊、精液、胚胎证件齐全，销售种羊、胚胎或精液有疫病抽查记录，同时留用种羊、精液有抽检检测报告结果：羊布鲁氏菌病检测阴性、羊口蹄疫病原检测阴性。对引入种羊进行两次布鲁菌病的免疫学检查，检查均为阴性者才可以与健康羊群混群饲养。

2.1.3 定期检疫和疾病监测

每年定期对羊群作布鲁氏杆菌病检疫，以及时发现病畜。应用免疫学方法对动物群体定期抽样检查布鲁氏菌病。如发现阳性动物，及时隔离或扑杀，并做无害化处理，以防止感染其他动物；若有原因不明的流产时，必须严格隔离流产母羊，对流产胎儿及胎膜进行微生物检查，严格消毒处理流产物污染的环境和用具；对流产母羊作血清学检查，直到证明为非传染性流产时才能取消隔离。

2.2 受威胁羊群的预防措施

2.2.1 定期检疫

应当建立健全防疫制度，同时定期执行，以便及时发现和处理病畜。对羊群每年进行2次检疫，采用免疫学方法定期进行普遍检疫，将检出的阳性和可疑反应的病羊隔离饲养，如检出患病羊的数量少，应该及时淘汰；当数量多时，采用检疫净化进行处理。在1年内连续3次检疫未出现阳性的山羊，则认为是净化山羊群体，才可以与健康羊群进行合群饲养。其中种公羊必须检疫，健康的种公羊才能作为种用。

2.2.2 布鲁氏猪型2号弱毒苗应用

此种疫苗可以口服、拌水饮服或灌服、皮下注射或肌肉注射和喷雾法。山羊在配种前1～2个月或在怀孕期采用口服法，此法不受怀孕限制。拌水饮服或灌服时，不能用热水，山羊在口服疫苗当天、前1 d或后1 d应停止应用抗生素添加饲料和发酵饲料。注射法和喷雾法不能用于孕羊，喷雾完毕后，让羊群在室内停留20～30 min。

2.2.3 布鲁氏杆菌羊型5号弱毒苗应用

此疫苗用于预防羊和羊的布氏杆菌病。注意对体质瘦弱、食欲和体温不正常、妊娠期的山羊及公畜，不宜采用。羊经检疫阴性的进行接种，阳性反应的山羊接种，应进行隔离和淘汰，如检疫有困难的大群羊，可不经检疫进行预防接种。幼羊应在3～8月龄时接种；成年羊一般不接种，宜采取分群隔离、培养健康幼畜和淘汰病畜的办法进行净化。连续接种2～3年的羊群，可隔1～1.5年进行检疫，再决定继续进行免疫或停止接种。

2.3 感染山羊的防治措施

2.3.1 检疫净化

对感染山羊群体，以免疫学方法进行反复多次检疫，检出的患病山羊应立即淘汰。如果血检阳性动物数量多，应隔离饲养，专人饲养，避免与健康羊群接触；如阳性山羊数量少，必须淘汰处理。这样逐步检疫净化，直到全群山羊均为阴性，再经1年以上检疫或连续3次检疫未出现阳性的山羊群体，即认为是净化山羊群体。

2.3.2 培育健康山羊群体

如血检阳性山羊数量多，不能立即淘汰处理，则采用培育健康山羊群体方法。血检阳性雌性山羊用雄性山羊的精液人工授精，雌性山羊产前、产后要对体躯和产房环境进行彻底消毒。幼龄山羊出生后、立即与雌性山羊群体隔离，喂健康山羊初乳，以后喂健康乳或消毒乳；在1年内进行2～3次免疫学检查，如检查均为阴性，可作为健康山羊饲养；如为阳性，则淘汰处理。

2.3.3 严格执行消毒等兽医卫生措施

对圈舍的环境定期进行严格消毒。一旦发现流产，则必须对流产物、胎儿、胎衣进行彻底的无害化处理，同时对污染的环境严格消毒。患病山羊的分泌物、排泄物及其污染的环境、厩舍、用具、运输工具等均应彻底消毒。疫区的生皮、羊毛等动物产品及饲草饲料等也应进行消毒处理才能利用。流产污染的草场，应空置3个月以上才能再次放牧，周围地区紧急免疫接种，同时做好相关人员的个人防护。建立病死羊无害化处理制度，并且记录完整，具有可追溯性，无害化处理设施运转正常，并且按国家规定处置患布鲁氏菌病的山羊。

2.3.4 免疫接种

免疫接种是控制本病的有效措施，布鲁菌病免疫时以细胞免疫为主。其保护宿主抵抗布鲁菌的作用机制是特异T细胞与布鲁菌抗原反应，产生淋巴因子，提高了巨噬细胞活性，从而消除细胞内的细菌。在没有隔离条件的山羊群体，可以采取接种疫苗措施控制布鲁菌病。疫苗首先选用毒力稳定、使用安全、免疫力好、且适用于孕羊的布鲁氏猪型菌2号弱毒苗；其次选用免疫效果较好，但毒力较强，不适用于孕羊的布鲁氏杆菌羊型5号弱毒苗。

2.3.5 病羊处理

病羊头数不多且价值不大，以淘汰屠宰为宜。逐步淘汰和肉品合理利用是一种积极的措施，各地可因地制宜采用。此外对病畜进行对症治疗，如剥离胎衣、子宫炎时进行冲洗及治疗、抗生素的应用等。羊流产时用土霉素配成5%溶液，肌肉注射，每日1次，连注4次，能制止流产的继续发生。