肝细胞癌64 排128 层螺旋CT 征象与环加氧酶-2和血管内皮生长因子表达及预后的相关性

邓卫华，黄苑君，王敏，高路

江西省遂川县人民医院 （江西吉安 343900）

原发性肝癌是目前临床上常见的恶性肿瘤，而肝细胞癌（liver cell carcinoma，LCC）是原发性肝癌中最为高发的类型[1]。据不完全统计，我国LCC 每年新发病例占全球范围内新发病例的50%，该病严重威胁我国居民的健康与安全[2]。LCC 的发生受多种因素的影响，如遗传、病毒性肝炎、肝硬化、中毒等，近年来的高发趋势还与环境及饮食行为的改变等相关[3]。该病早期多缺乏特异性表现，但随着我国预防医学的发展与健康体检的推广，在一定程度提高了该病的早期发现率。多层螺旋CT（multislice spiral computed tomography，MSCT）是目前诊断与评估LCC 的主要影像学手段，能够无创、直观地反映肿瘤的形态特征，同时能够明确肿瘤病灶血管情况、病灶侵袭转移情况等生物学特性，为诊疗工作的开展提供依据。本研究主要结合临床实际病例分析LCC 64排128层螺旋CT 征象与环加氧酶-2（cyclooxygenase-2，COX-2）、血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）表达和预后的相关性，以期为LCC 的诊断、治疗和预后评估提供参考。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选 取2 0 1 9 年1—6 月 我 院 收 治 的8 0 例L C C 患 者 作为研究对象，其中男51例，女29例；年龄49～71岁，平均（57.92±4.48）岁；肿瘤直径2.1～5.3 cm，平均（3.7±0.6）cm。

纳入标准：接受手术切除并经由病理证实为LCC；术前开展螺旋CT 平扫与多期增强扫描检查；未接受化学、介入等抗肿瘤治疗；病历资料完整。排除标准：合并自身免疫性疾病、感染性或传染性疾病；患有其他类型恶性肿瘤；凝血机制异常。

1.2 方法

术中获取患者的病理组织标本，术后所有标本均经10%中性缓冲甲醛固定，常规石蜡包埋，行连续切片，分别行病理分级、免疫组织化学染色等处理。

1.2.1 病理分级

采用Edmondson-Steiner 分级法将癌细胞分化程度分为Ⅰ～Ⅳ级，见表1。

表1 LCC 病理分级

1.2.2 免疫组织化学染色

利用免疫组化Elivison 二步法，开展常规免疫组化染色，具体如下：将标本制成切片，厚度3 µm，二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水；各切片加1滴3%过氧化氢溶液，于室温环境下孵育25 min 后利用蒸馏水冲洗，置入枸橼酸盐乙二胺四乙酸（ethylenediamine tetraacetic acid，EDTA）缓冲液中进行高压抗原修复，时间为5～10 min，0.01M 磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffered saline，PBS）冲洗3 次（2 min/次）；去PBS 液，各切片加1滴一抗（HIF-1α/VEGF/CD31），室温孵育2 h，0.01M PBS 冲洗3次（2 min/次）；去PBS 液，各切片加1滴聚合物增强剂，恒温箱37 ℃孵育20 min，PBS 冲洗3次（2 min/次）；去PBS 液，各切片加1滴酶标抗鼠/兔聚合物，室温孵育30 min，PBS 冲洗3次（2 min/次）；去PBS 液，各切片加1滴新鲜配置二氨基联苯胺（diaminobenzidine，DAB）显色，利用显微镜进行显色控制，自来水冲洗；利用苏木素复染，返蓝，脱水，二甲苯透明，中性树胶封片、镜检。

对照组设计：阳性对照以LCC 阳性切片（染色结果示阳性）；阴性对照以0.01 mol/L PBS 液（染色结果示阴性）。

1.2.3 螺旋CT 检查

由影像科工作经验丰富的医师采用螺旋CT（GE 公司，型号：64排Optima660）进行检查，患者检查前6 h 禁食，检查前30 min 经口饮用800 ml 温水，检查前再次饮用200 ml 温水以充盈胃肠道，在此基础上开展CT 检查，具体如下。（1）平扫：扫描参数设置为120 kV、250～300 mA，层厚、层间隔为5～10 mm，其中层厚可结合患者具体情况调整，螺距为1.0，从膈下至髂嵴上缘进行扫描。（2）增强扫描：静脉注射800～100 ml 的非离子碘对比剂碘海醇，速度控制在3.0～4.0 ml/s，于动脉期（25～30 s）、门脉期（50～60 s）和实质期（90～120 s）进行三期扫描。

1.3 临床评价

（1）不同病理分级LCC 患者VEGF、COX-2表达情况分析。由实验者及两位经验丰富的病理科医师按统一标准完成，阳性染色即胞浆出现棕色颗粒，采用×400高倍镜随机选择染色密集区的5个视野进行观察，各视野计分为阳性细胞染色强度、阳性细胞率各得分之和。阳性细胞染色强度分值范围0～3分，其中0分表示无染色，3分表示强染色；阳性细胞率分值范围0～3分，0分为<5%，1分为5%～25%，2分为26%～50%，3分为>50%。最终评分为5个视野的均值，其中阴性为0～2分，阳性为3～6分（依据分值划分轻度、中度、重度）。（2）LCC 患者CT 征象与总生存时间（overall survival，OS）及VEGF、COX-2表达情况分析。螺旋CT 检查结果由两名放射科医师判定，两人意见一致的情况下有效，主要就肿瘤直径、假包膜情况、肿瘤侵袭转移及强化类型等进行观察，其中依据平扫基础CT 值增加幅度进行强化程度评估，轻度为<20 HU，一般为20～40 HU，明显为>40 HU，同时对所有患者进行临床随访，明确OS，即确诊至死亡或末次随诊时间，遗漏值为至末次随访时死亡患者或随访期间失访者。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 不同病理分级LCC 患者VEGF、COX-2表达情况分析

80例LCC 患 者 中，VEGF 阳 性 表 达 患 者44例（55.00%），阳性表达的标本细胞浆中可见棕黄色颗粒；COX-2阳性表达患者58例（72.50%），阳性表达的标本胞核无着色，细胞浆呈现黄褐色斑片状或颗粒状。Ⅰ、Ⅱ级病理分级患者VEGF 及COX-2阳性率与Ⅲ、Ⅳ级比较，差异有统计学意义（P<0.05），见表1。

2.2 LCC 患者CT 征象与OS 及VEGF、COX-2表达情况分析

CT 扫描结果中肿瘤形态不规则、CT 增强扫描明显强化、合并侵袭转移及病理分级Ⅲ、Ⅳ级患者的COX-2及VEGF阳性率高于肿瘤形态规则、CT 增强扫描轻度/不均匀强化、无侵袭转移及病理分期Ⅰ、Ⅱ级，且前者OS 短于后者，差异有统计学意义（P<0.05），见表2。

表1 不同病理分级LCC 患者VEGF、COX-2表达情况分析[例（%）]

表2 LCC 患者CT 征象与OS 及VEGF、COX-2表达情况分析

3 讨论

近年来，LCC 的发病率逐渐升高，临床上针对该病患者的治疗以手术为主，辅以放化疗、基因疗法、生物疗法等干预，通过开展符合患者个体化特征的综合疗法治疗，以降低肿瘤复发转移风险，改善预后，从而延长患者的生存期[4-5]。由于LCC 是实体肿瘤，内部血管丰富，而丰富的血管组织为肿瘤细胞的生成、增殖与转移过程提供了基础，所以LCC 具有较高的致死风险[6]。VEGF 为特异度、作用效果均最强的促血管生长因子，通过促进血管生长，为肿瘤细胞的增殖、转移提供充足的血液供应，诱发恶性肿瘤的复发，是目前公认大部分恶性肿瘤的诱发因子[7]。COX主要参与机体炎性改变的调节，COX-2是其亚型之一，活跃度较高，会因生长因子、细胞因子等刺激作用呈现高表达，而COX-2及产物会通过VEGF 蛋白造成血管生成因子的高表达，继而对肿瘤病灶的血管、淋巴管的生成发挥调节作用[8]。因此，部分专家认为COX-2、VEGF 的表达与LCC 的发展及预后直接相关。本研究结果显示，Ⅰ、Ⅱ级病理分级患者VEGF 及COX-2阳性率与Ⅲ、Ⅳ级比较，差异有统计学意义（P<0.05）；CT 扫描结果中肿瘤形态不规则、CT 增强扫描明显强化、合并侵袭转移及病理分级Ⅲ、Ⅳ级患者的COX-2及VEGF 阳性率高于肿瘤形态规则、CT 增强扫描轻度/不均匀强化、无侵袭转移及病理分期Ⅰ、Ⅱ级，且前者OS 短于后者，差异有统计学意义（P<0.05）。

综上所述，MSCT 征象进行肿瘤形态、强化、侵袭转移、病理分期的评估结果，与VEGF、COX-2表达情况及OS 时间存在显著相关性，能够为诊疗及预后评估提供可靠依据。