聚葡萄糖对小鼠腹腔巨噬细胞活性的影响

摘要：膳食纤维可以影响机体的免疫系统，通过观察聚葡萄糖对于小鼠腹腔巨噬细胞的影响，对其调节免疫机制效应有重要意义。巨噬细胞具有抗原递呈、吞噬、杀伤等功能，是机体起关键作用的免疫细胞，在机体非特异性防御中起着关键作用。当巨噬细胞被活化后，还能被作为抗原递呈细胞参与，是先天免疫和后天免疫的桥梁，巨噬细胞的活化在免疫调节中起到了关键作用。

关键词：聚葡萄糖;巨噬细胞;调控作用

聚葡萄糖（Polydextrose，PDX）为白色或类白色颗粒，以1，6-糖苷键结合为主经葡萄糖随机聚合而成，是一种结构复杂且高度分支含有多种糖苷键的多糖类聚合物平均分子质量约3200左右，聚合度约20，属于可溶性膳食纤维。PDX虽然不能被人体消化，但可在肠道内被有益菌分解为SCFA，可以起到改善肠道菌群微环境以及防治许多肠道疾病的作用。随着生活条件的改善，人们的饮食中摄入的膳食纤维逐渐减少，所以现在对于膳食纤维的重要作用及合理应用也越来越重视。人体摄入PDX后，不仅不会升高血糖，而且还能使缩短胃肠道消化吸收时间，在肠道中经过肠道菌群分解后产生SCFA，从而调整肠道PH，改善肠道菌群微环境。虽然PDX对肥胖、心血管疾病、便秘、腹泻以及结肠癌等多种疾病都具有防治作用，但在临床上的应用尚没有明确的使用标准，其对于调控机体免疫功能的作用机制尚需进一步研究。

1.实验材料与仪器

1.1实验材料

聚葡萄糖（批号：F2017112053112，广州汇健生物科技有限公司）、RPMI-1640培养基（Gibco）、胎牛血清（Gibco）、MTT（Sigma）、PBS（上海麦克林生化科技有限公司）、DMSO（国药集团化学试剂有限公司）

1.2實验仪器

手术器械、超净工作台、TDL-5离心机、电子天平、CO2恒温培养箱、MCO-17A倒置相差显微镜（COICXDS-1B）、酶标仪（Multi-skan GO）等。

1.3实验动物

KM小鼠，体重18-22g，雌雄不限（济南朋悦实验动物繁育有限公司），许可证号：SCXK（鲁）20140007。

2实验方法

2.1小鼠腹腔巨噬细胞的制备

小鼠颈椎脱臼处死，75%酒精浸泡5min，腹腔注入5ml1640培养基，轻轻揉腹，剪开皮肤，吸出腹腔液，1500rpm离心5min，弃掉上清液，用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基重悬细胞并计数。将细胞加入96孔细胞板，每孔1×10个，100μl，放入CO2恒温培养箱培养12h。

2.2 PDX溶液的制备

用RPMI-1640培养基配成0.01mg/ml、0.1mg/ml、1mg/ml储备液备用，用灭菌后0.22μm滤膜过滤器过滤除菌。

2.3 PDX对小鼠巨噬细胞活性的影响

设置空白组，实验组（浓度分别为0.01mg/ml、0.1 mg/ml、1mg/ml），每组设置30个重复孔，空白组加入100μlRPMI-1640培养基，实验组依次加入100μl配好的试剂，分别培养2d，4d，6d，8d，10d，每组取6个重复孔，每孔加入20μlMTT溶液，培养4h后，弃去上清液，加入150μlDMSO，振荡10min后，测量490nm波长处OD值。

3.统计学处理

实验数据用x±s表示，采用IBM SPSS Statistics22.0数据统计软件进行方差分析，p<0.05为差异有统计学意义。

4.实验结果与分析

从表1中可以看出，与对照组比较，从第4d至第10d，PDX剂量组OD值对于空白组，均显著升高（n=6，p<0.01），从表2中可看出，从第4d至第10d，PDX不同剂量组增值率均显著高于对照组（P<0.01），因此，可推断PDX能够提高小鼠腹腔巨噬细胞活性。

5.总结

巨噬细胞活化后在形态上有着比较大的差别，但在功能上有许多相似点，比如抗原递呈功能：能够特异性结合T细胞表面的TCRαβ、CD3复合物分子，或者结合协同刺激分子受体CD2和CD28与T细胞相互作用从而调节获得性免疫反应。Chaen Y等经过研究证明，活化后的巨噬细胞其吞噬能力大大增强，并且能够分泌多种细胞因子，如TNF-α、ROI等，还能起到杀灭肿瘤细胞的效果，其释放出的TNF-α、IL-6、IL-12能够诱导免疫反应，从而起到杀灭病原微生物的作用。而在对于葡聚糖的研究中发现，树突细胞dectin-1受体能够被葡聚糖微颗粒激活从而使糖化血红蛋白肿瘤坏死因子受体（GITRL）表达增加，通过GITRL通路可使T细胞得到增殖，进而延缓肿瘤细胞的发展起到明显效果。经过体外研究证明，β-葡聚糖可影响多种免疫受体，如Dectin-1，CR3 和TLR-2/6，从而诱导免疫细胞发挥作用。

聚葡萄糖具有调节机体免疫，预防结肠癌等作用，本实验通过对比不同浓度PDX对于小鼠腹腔巨噬细胞的影响观察得出，PDX可提高巨噬细胞活性，这一结果为应用于调节免疫及防治免疫缺陷疾病奠定了理论基础，并为进一步开发含膳食纤维药品提供了实验依据。

参考文献：

[1]章辰琛.葡萄糖对小鼠腹腔巨噬细胞白介素-18表达的影响及其机制初探[D].蚌埠医学院，2012.

[2]帅小雪.基于甘露糖受体的黑灵芝多糖免疫调节作用及机制研究[D].2015.

作者简介：王新功（1963.09）男，籍贯：山东省烟台市，单位：山东中医药高等专科学校，职称：副主任药师，研究方向：中药炮制。