动物性食品中万古霉素及去甲万古霉素测定方法研究进展

周迎春 韩文凤 刘致远

1.河南进口肉类指定口岸漯河查验区服务中心 河南漯河 462300 2.漯河职业技术学院 河南漯河 462000

万古霉素(Vancomycin)和去甲万古霉素(Norvancomycin)分子式分别为：C66H75Cl2N9O24、C65H73Cl2N9O24，他们均属于抗革兰氏阳性菌的三环糖肽类抗生素，其药力较强，被称为“抗生素最后的王牌”，可用来治疗超级耐药细菌如超级细菌NDM1、MRSA、MRSE细菌的感染[1]，是人类目前对付超级耐药菌株的最后一道防线。

在商业利益的驱动下，万古霉素和去甲万古霉素被不法分子应用于养殖业，从而造成动物性食品中万古霉素和去甲万古霉素残留。

长期或过量食用含有万古霉素和去甲万古霉素的动物源性食品，可引起耳、肾和神经系统毒性反应，皮肤过敏及器官功能紊乱等不良反应[2]。同时，由于万古霉素及去甲万古霉素的滥用，导致其耐受细菌的数量也有所增加，产生更严重的抗生素耐药性，这对人类疾病的预防和治疗极其不利，影响动物源性食品安全、公共卫生、生态平衡以及动物性食品出口。

在肉类进口过程中，万古霉素的测定曾一度是国际贸易中的壁垒。因此，对动物源性食品开展万古霉素及去甲万古霉素残留量的检验检测工作迫在眉睫。

1 动物性食品中万古霉素及去甲万古霉素测定标准的研究进展

我国农业部第560号公告将万古霉素及去甲万古霉素规定为禁用兽药。

2010年03月22日，卫生部第四批《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单》(整顿办函〔2010〕50号)公告将万古霉素列为可能违法添加的非食用物质，并特别注明：“需要研制动物性食品中测定万古霉素的液相色谱-串联质谱法”。

通过检索国内外已公开发布的标准，未查询到相关的国家标准、行业标准或已立项未批准发布的标准。目前，我国已公布的标准中，仅有一个饲料中万古霉素测定的标准，即《农业部1862号公告-3-2012饲料中万古霉素的测定液相色谱-串联质谱法》。吉林省地方标准《DB22/T 1825-2013猪肉中万古霉素残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法》处于未公布实施阶段，暂无其他标准适应本标准所涉及的检验内容。

为了给食品风险预警和食品安全监管提供技术支撑，制定动物性食品中万古霉素和去甲万古霉素残留量测定的标准刻不容缓。

2 动物性食品中万古霉素及去甲万古霉素测定方法的研究现状

目前，测定万古霉素和去甲万古霉素的方法主要有高效液相色谱法和荧光偏振免疫法[3]、化学发光免疫法[4，5]等，这些方法的前处理往往适用于基质简单的样品，且检出限高，不适用于低浓度的检测，测定对象多为人体或动物血液、脑脊液样品[6，7]。猪、牛、羊、家禽和水产等动物源性食品含有大量脂肪、蛋白质、无机盐、固醇类等，成分复杂，易被杂质干扰，引起基质效应，降低回收率，而且动物源性食品中万古霉素和去甲万古霉素残留量小，运用上述方法无法准确进行定量定性检测。

液相色谱-串联质谱法同时兼有分离与定性、定量的优势，可完成对复杂样本准确、高效的定性定量分析，优化了样本的前处理过程，使样本分析更准确、方便、快捷，具有灵敏度高、应用范围广、实用性强等优势，尤其适合分析基质复杂的样品。

已发表的文献报道中利用液相色谱-串联质谱法测定万古霉素和去甲万古霉素残留量的测定对象多为牛奶[8]、虾[9]等极性较强的样品，便于分离、易于检测，而同时适用于猪、牛、羊、家禽和水产等多种动物性食品的液相色谱-串联质谱法测定万古霉素和去甲万古霉素残留量的报道相对较少，现有报道的方法仅适用于猪肉或猪肝等一种动物性食品[10，11]，或者只能测定万古霉素[12，13]，而且多数方法需要采用基质标准溶液进行定量[14，15]，增加了检测工作的复杂性，实用性不强。

杜业刚[16](2016)、韩婉清[17](2016)、綦艳[18](2016)等研究适用于多种动物性食品中万古霉素和去甲万古霉素残留量的测定，具有较高参考价值。杜业刚[16](2016)等研究中，万古霉素和去甲万古霉素的方法定量限均为20μg/kg；韩婉清[17](2016)等研究中，万古霉素和去甲万古霉素的方法定量限分别为15μg/kg、9μg/kg；綦艳[18](2016)等研究中，万古霉素和去甲万古霉素的方法定量限分别为2.0μg/kg、3.0μg/kg。方法检出限普遍偏高，均不能达到该项目立项要求的技术指标——方法定量限在1ppb(即1.0μg/kg)以下或尽可能低。王洪朋[19](2019)等报道的方法在检测猪肉、猪肝、猪肾样品时万古霉素和去甲万古霉素的方法定量限均可低至0.3μg/kg，值得推广到牛、羊、家禽和水产等动物性食品中加以研究、得以应用。

3 动物性食品中万古霉素及去甲万古霉素测定方法的发展方向

液相色谱-串联质谱法根据液相色谱的配置不同，又分为液相色谱-串联质谱法、高效液相色谱-串联质谱法与超高效液相色谱-串联质谱法，超高效液相色谱-串联质谱法与另外两种检测方法相比，具有检测效率高、进样体积小、流动相消耗少等显著优势。为保障动物性食品安全、公共卫生、生态平衡以及动物性食品安全出口，制定超高效液相色谱-串联质谱法测定动物性食品中万古霉素残留量的标准并将方法定量限降低到1ppb(即1.0μg/kg)以下或尽可能低势在必行。