草莓灰霉菌生防酵母菌的筛选及生防效果测定

王晓妍 张栋园 李宁 崔新仪

摘    要：从天津当地常见的7个葡萄品种中筛选得到69株酵母菌，通过平板对峙筛选发现8株酵母菌对草莓灰霉菌抑制效果超过50.00%，其中菌株YGMG-3的离体抑制率达到74.32%，显著高于其他处理（P<0.05）;对筛选得到的8株酵母菌株进行产挥发性物质测定，结果表明一株酵母菌株YGMG-3对草莓灰霉菌具有明显抑制效果，其抑制率达到68.89%，显著高于其他处理（P<0.05）;为进一步确认酵母菌株YGMG-3对草莓灰霉菌的抑制效果，本研究测定了其对草莓灰霉菌孢子萌发的影响，结果显示酵母菌株YGMG-3对草莓灰霉菌的孢子萌发具有较强的抑制效果，其中2×107个·mL-1处理效果最显著，抑制孢子萌发率达到85.50%，显著高于其他处理（P<0.05）。这些结果为开发酵母菌株YGMG-3防治草莓灰霉菌提供了一定信息。

关键词：生防酵母菌;草莓灰霉菌;抑菌效果;孢子萌发

中图分类号：S481          文献标识码：A          DOI 编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2020.09.001

Abstract： Sixty-nine yeast strains were screened from seven common grape varieties collected in tianjin， eight strains among these yeast strains inhibited more than 50.00% growth of agent caused strawberry greymold invitro. A yeast strain YGMG-3 exerted significant inhibite functionon strawberry grey mould with 74.32%，which was significantly higher than other stains（P<0.05）.Volatile substance produced from eight strains of yeast was determined and the strain YGMG-3 inhibited 68.89% mycelial growth of strawberry grey mold， which was significantly higher than other treatments（P<0.05）.To further confirm the inhibitory effect of yeast strain YGMG-3 on strawberry gray mould， germination of spores of strawberry grey mould were measured. The yeast strains YGMG-3 with 2×107·mL-1 concentration inhibited 85.50% germination of spores of strawberry grey mould， which was significantly higher than other treatments（P<0.05）. These results provided some information for the development of yeast strain YGMG-3 to control strawberry grey mould.

Key words： antagonistic yeast; strawberry grey mould; inhibitory effect; spore germination

草莓 （Fragaria × ananassa Duch.），属蔷薇科，草莓属，多年生草本植物。其色泽鲜艳、口感酸甜深受消费者的喜爱，又由于营养丰富，因此被称为“水果皇后”[1]。草莓灰霉病（Strawberry Gray Mould）是引起草莓腐烂的主要原因之一[2-3]。我国各草莓栽培地区都有发生，20 世纪 70 年代后发病逐渐加重，特别在南方采果期正值春雨时节，发病更为严重。草莓灰霉病的发生常造成感病品种的病果率在 30%左右，严重的可达60%以上，对草霉產量、品质影响很大。目前防治草莓灰霉病主要还是采用化学杀菌剂处理[4-6] ，这样往往会引入一些不安全因素。另外，病原菌对常用化学药剂抗药性的增强，使得化学农药的防效不断下降，并且随着人们生活水平不断提高，对绿色食品的要求越来越强烈[7-9]，因此很有必要开辟新的安全有效防治途径，生物防治显得具有重要意义。本研究从葡萄果实上筛选可离体拮抗草莓灰霉菌的酵母菌，并对其生防效果进行研究，为草莓灰霉病的防治提供一定的理论依据。

1 材料和方法

1.1 供试材料

从天津市西青区红旗农贸市场购入7个不同品种的葡萄：玫瑰香葡萄，马奶葡萄，阳光玫瑰葡萄，魏可葡萄，A17葡萄，脆红宝葡萄、红地球，挑选大小一致，成熟度8～9成，无病虫和机械伤口的果实用于酵母菌的分离与筛选。

1.1.1 供试酵母菌 从葡萄果皮和果肉中分离得到。

1.1.2 供试灰霉菌 草莓灰霉菌（Botrytis cinerea Pers.）由天津农学院植物病理实验室提供。

1.1.3 供试培养基 PDA培养基、PDB培养基、YEPD培养基均采用常规方法制备。

1.1.4 主要仪器与设备 详见表1。

1.2 试验方法

2.4 不同浓度酵母菌YGMG-3菌株对灰霉菌孢子萌发率的影响

结合表2和表3的试验结果，筛选出一株对草莓灰霉菌具有较好抑制效果的酵母菌菌株YGMG-3，测定了其对草莓灰霉菌孢子萌发的影响，结果见表4。

从表4可以看出，酵母菌株YGMG-3对草莓灰霉菌孢子萌发具有较好的抑制作用，其中2×107个·mL-1浓度对草莓灰霉菌孢子萌发抑制率达到85.50%，显著高于其他处理（P<0.05），其次为处理2×108个·mL-1，孢子抑制率达到76.04%。

3 结论与讨论

生物防治在果蔬采后病害控制过程中有着越来越广泛的应用前景[10-11]，但是对有效生防菌的筛选是一项繁重而复杂的工作，在工作前期筛选得到具有安全，有效，易定殖等特点优良菌株才能够为进一步研究开发和利用奠定坚实的基础。因此，本研究从日常食材中筛选拮抗酵母菌，为生防酵母菌的安全性提供了保障。酵母菌在葡萄中普遍存在，且容易在果蔬表面定殖，这些都为筛选和开发优良的生防酵母菌株奠定了基础。

有研究表明，有些酵母菌可以产生一些挥发性的抑菌物质[12-13]，在本研究中，通过对峙培养和产挥发性物质测定发现酵母菌YGMG-3均对草莓灰霉菌具有明显的抑制效果，可能该菌株不仅能产生抗生素类物质还能产生一些具有挥发性的抑菌物质，酵母菌YGMG-3对草莓灰霉菌孢子萌发也有明显的抑制作用，但是还需要对该菌株的活体抑制效果进一步研究和确认，对其抑菌机理进行深入研究，为酵母菌株YGMG-3的开发和应用奠定坚实的理论基础。

参考文献：

[1]余伟， 宋玥， 佘仲露， 等. 拮抗酵母菌挥发物单体对草莓灰霉病的防治效果[J].食品科学，2018，39（21）：230-236.

[2]秦晓杰， 许皎姣， 索娜梅， 等. 草莓灰霉病拮抗酵母菌的筛选鉴定及对采后草莓品质的影响[J]. 食品工业科技， 2012， 33（21）： 330-335，339.

[3]李迪， 蔡再华， 何永梅. 草莓灰霉病的识别与综合防治[J]. 农村新技术， 2019（10）： 21-23.

[4]黄蓉. 间型假丝酵母菌株C410防治储藏期草莓灰霉病效果及机制研究[C]. 中国植物病理学会. 中国植物病理学会2010年学术年会论文集. 中国植物病理学会： 中国植物病理学会， 2010： 675.

[5]WANG X， LI G， JIANG D， et al. Screening of plant epiphytic yeasts for biocontrol of bacterial fruit blotch （Acidovoraxavenaesub sp. citrulli） of hami melon[J]. Biological control， 2009， 50（2）： 164-171.

[6]LONG C A， YUAN C. Kloeckera apiculata strain（34-9）to control Botrytis cinerea during the pre-and postharvest handling of strawberries[J]. Annals of microbiology， 2009， 59（1）： 77-81. [7]LONG CA，WU Z，DENG BX. Biological control of Penicillium italicum of citrus and Botrytis cinerea of grape by Strain 34-9 of Kloeckera apiculata[J]. European food research and technology， 2005， 221（1-2）： 197-201.

[8]LASSOIS L， L DE LAPEYRE DE BELLAIRE， JIJAKLI M H. Biological control of crown rot of bananas with Pichia anomala strain K and Candida oleophila strain O[J]. Biological control， 2008， 45（3）： 410-418.

[9]LAHLALI R，MASSART S，DEClERCQ，et al. Assessment of Pichia anomala（strain K） efficacy against blue mould of apples when applied pre-or post-harvest under laboratory conditions and in orchard trials[J]. Eupropean journal of plant pathology， 2009， 123（1）： 37-45.

[10]XU X， CHAN Z， XU Y， et al. Effect of Pichia membranaefaciens combined with salicylic acid on controlling brown rot in peach fruit and the mechanisms involved[J]. Journal of the science of food and agriculture， 2008， 88（10）： 1786-1793.

[11]CHEN P H， CHEN R Y， CHOU J Y. Screening and evaluation of ueast antagonists for biological Control of Botrytis cinereaon strawberry Fruits[J]. Mycobiology， 2018， 46（1）：33-46.

[12]司琳媛. 葡萄有孢漢逊酵母（Hanseniaspora uvarum）挥发性代谢物对草莓采后贮藏性能的影响[D]. 南京：南京农业大学， 2015.

[13]窦国霞，蒋春号，郭虹娜， 等. 葡萄汁有孢汉逊酵母对采后草莓灰霉病抗性诱导机理研究[J]. 园艺学报， 2019， 46（7）： 1290-1302.